SN/T 3268-2012.Preservation methods of specimen of rodents for the pathogens detecting.
1范围
SN/T 3268规定了鼠类携带病原体检测用标本的保存方法。
SN/T 3268适用于国境口岸检验检疫部门开展鼠类携带病原体的检测用标本的保存。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 19489实验室生物安 全通用要求
病原微生物实验室生物安全管理条例(2004)
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1鼠类rodent
与鼠传疾病有关的鼠形动物(包括啮齿目、兔形目和食虫目动物)。
3.2检测标本specimen
用来作为病原体检测的样本,主要包括鼠类脏器(如:心、肺、肝、脾、肾、肠等),血液(全血、血清)，脑
组织肌肉组织以及体表寄生虫(如蚤类、蜱类、螨类等),排泄物(粪、尿)。
4实验室条件及防护要求
4.1 总则
检测标本的处理应在生物安全2级及以上实验室中进行。生物安全2级及以上实验室的要求要符合GB19489和《病原微生物实验室生物安全管理条例》中同级别实验室的要求,并按照以上两个标准的要求来进行个人防护。
4.2 个人防护用具
白色或浅色连体防护服、白色长筒袜、长筒雨靴、无粉手套、口罩、眼罩/防护眼镜等。
4.3冷藏设备
超低温冰箱(-60℃~-80℃)、低温冰箱(-20℃~-40℃)、普通冰箱(2℃~4℃)、液氮罐。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3268-—2012
鼠类携带病原体检测标本的保存方法Preservation methods of specimen of rodents for the pathogens detecting2012-10-23发布
华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-05-01实施
本标准按照GB/T1.1-—2009给出的规则起草。SN/T3268--2012
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国二连浩特出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本标准主要起草人：孙肖红、乔舜、孙时、宋锋林、田丽、张晓龙，魏莲、魏怀波、杨永莉、杨宇、王静1
1范围
鼠类携带病原体检测标本的保存方法本标准规定了鼠类携带病原体检测用标本的保存方法SN/T 3268—2012
本标准适用丁国境口岸检验检疫部门开展鼠类携带病原体的检测用标本的保存。2规范性引用文件
下列文件对干本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用义件，仅注日期的版本用于本文件。凡是不注H期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室牛物安全通用要求病原微生物实验室牛物安全管理条例（2004）3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
鼠类rudenl
与鼠传疾病有关的鼠形动物(包括啮齿白,免形日和食虫目动物)。3.2
检测标本specimen
用来作为病原体检测的样本，主要包括鼠类脏器（如：心肺，肝、牌，肾、肠等），血液（全血、班清），脑组织、肌肉纽织以及体表奇生虫（如蚤类、蜱类、螨类等），排泄物（粪、尿）。4实验室条件及防护要求
4.1总则
检测标木的处埋应在生物安个2级及以上实验室中进行。生物安全2级及以上实验室的要求要符合（B19489和原微生物实验室生物安全管理条例》中同级别实验室的要求.并按照以上两个标准的要求来进行个人防护。
4.2个人防护用具
白色或浅色连体防护服，白色长筒袜、长简雨靴、无粉手套、口罩眼罩/防扩眼镜等。4.3冷藏设备
超低温冰箱（—60℃-~—80℃）.低温冰箱（—20℃~-40）、普通冰箱（2℃~4℃），液氮罐。4.4保存用材料
液氨、干冰、冰渠、2ml.细胞冻存管、0号自封袋、试管（5mL~-20mL）、带盖塑料盒，油性记号笔。SN/T3268—2012
4.5组织、脏器保存液
组织脏器保存液的配制见附录A。5检测标本的保存方法
5.1冷冻保存
用于细菌、病毒分离和检测的组织、血清等所有样本可选择不同的存贮容器直接冷冻保存（一80℃冰箱），也可用化学制冷剂（如干冰）或在液氮罐中保存。5.2保存液保存
针对鼠疫耶尔森菌检测的组织或胜器的样本可用20%中性甘油盐水保存。针对病毒检测的组织样本可在50%甘油磷酸盐缓冲液中保存，在5℃条件下保存数周：也可用组织保存液保存，或保存于RNAlater\保存液（用于核酸检测的伴本方可用这种方法，但无法再进行病原分离检测），样品保存液中保存的新鲜样品37℃下稳定保存1d，18～25℃保存7d，2℃～8℃稳定4周，一20℃长久保持（见附录A)。
5.3滤纸吸附保存（血纸条）
在解部动物取材的过程中用2cmX5m的普通滤纸条随取动物胸（腹）腔或者取血部位，以血液浸湿至滤纸长度的一半处为准，自然晾干后装人样本塑料袋常温或者冷冻保存即可。对于抗体检测试验如血凝试验、胶体金试验、酶联免疫吸附式验适用该保存方法。5.4鼠类携带医学媒介生物的保存5.4.1分类鉴定
将从体上梳检下来的医学媒介生物，如重，牌、等置于试管中，做分类鉴定。做好分组标识记录。
5.4.2分装
将鉴定后分组后的医学媒介生物装人小玻璃瓶，用200000龙胆紫2%盐水清洗3次，尽快送检。需要做保存的，应按照鉴定分组装入1：200000龙胆紫2%盐水试管中，上面放灭菌脱脂棉球，确保标本沉人保存液中，保存不超过3个月。5.4.3冻存
将标本直接装人带盖离心管、一拉得塑封袋或其他包装内，根据保存时间长短选择温度段冷冻保存。3d内2℃～8℃保存即可，1周内一20℃一30℃保存，超过1周的应保存在一60℃一80℃超低温冰箱或液氮中。
5.4.4活体保存
如需要短期保存活体标本，则于试管底部放少量湿润、洁净细沙土，再放人少许青草，将活体标本放1给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。
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SN/T 3268—2012
人其中，用棉花、纱布或软不塞塞好管口，保存于防凉处。该方法适用于短期保存，一般不超过3d，6保存时限
6.1待检标本
采集的标本应在计划既定期限内完成检测工作，如需长期保存的标本，应按照病原微生物实验室生物安全管理条例》的相关规定执行。6.2阳性标本
6.2.1立即销毁
对于经过检测结果附性的检测标本，按照规定程序送检相关权威部门确认后应按照本实验室的相关规定销毁。
6.2.2继续做活菌/病毒
需要进一步做细菌或病毒研究的应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》的相关规定执行，6.2.3灭活实验
需要做血清学检测项目的血清样本,应在: 56 ℃火活 30 min 后疗可开展实验。6.3未检出目标病原体标本
经确认目标病原体检出阴性的标本不再保存须按照“病原微生物实验室生物安全管理条例》规定及本实验室制定的实验室废弃物处理规程\及时处理。7安全保存原则
7.1存储包装应密封，防止渗漏、浓缩。7.2低温冷冻样本尽可能分装，避免多次冻融。7.3建立详细的样本保存/销缎档案，标本信息资料应完整。7.4标本应标识清断，确保标本的可溯源性。7.5定期检测冷冻液量利冰箱温度。7.6实行双人专管负责制。
7.7实验室应有按照GB19189及《病原微生物实验室生物安全管理条例（2001)》要求建立的安全管理体系文件和程序文件，
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A.120%中性甘油盐水
附录A
（规范性附录）
组织、脏器保存液的配制
中性甘油（化学纯)20ml.、氯化钠0.85、蒸馏水80tmI.混匀后分装：压火菌121，15min）50%甘油磷酸盐缓冲液
取等体积的甘油与等体积的0.2nol/L磷酸盐缓冲液混合，调pH值为7.0即可。100mL0.2nal/1.磷酸盐缓冲液具体配方为：0.2mol/1.NazHPO.81mL和0.3mnl/LNH,PO,18mL混↑，
A.3组织保存液
0. 6%水解乳蛋白、2%小牛血清、肯需素500 1J/ml.链霉素10 1/mI制莓菌素 50 1./ml. 组成的溶液。
A,4RNAlater保存液
RVAlaler可以迅速渗透到组织或其他生物样木中，稳定并保护RNA完整而不被降解，确保下游分析得到的数据真实反应样品的表达信息。RNAlater保存液为商品试剂盒-购头后按照试剂盒说明操作，
2）给这一信息楚为了方便木标准的便用者，产不表示对该产品的认可。如果其他等效产品只有相同的效果，则乃使用这紫等效产品。
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