SN/T 3297-2012
基本信息
标准号： SN/T 3297-2012
中文名称：植物种质资源鉴定方法玉米的鉴定
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 3297-2012.Detection and identification of Zea mays L.
1范围
SN/T 3297规定了进出境玉米种质资源鉴定的方法。
SN/T 3297适用于进出境玉米种质资源的检测和鉴定。
2规范性引 用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB1353玉米
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14072林木种 质资源保存原则与方法
SN/T 1193基因 检验实验室技术要求
SN/T1584出境玉米检疫操作规程
ASTM E1342用冷冻 、冷冻干燥和低温养护法保存细菌、真菌、原生生物、病毒、遗传要素以及动物和植物组织的保存
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1种质germplasm
亲代通过有性生殖过程或体细胞直接传递给子代并决定固有特性的遗传物质。
3.2种质资源germplasm resources
农作物、畜、禽、鱼、草、花卉等栽培植物和驯化动物的人工培育品种资源及其野生近缘种。
3.3稃husk
禾本科小穗上的小花,其外面具有两片苞片,在外一片称为外稃,包着的内部一片称为内稃。
3.4胚embryo
由卵细胞和一个精子受精后发育而成,是种子内未发育的幼小植物体,包括胚芽、胚轴、胚根和子叶四部分。
3. 5颖果caryopsis
单粒种子形成的果实,成熟时果皮、种皮不易分离,此为禾本科植物特有的果实。
1范围
SN/T 3297规定了进出境玉米种质资源鉴定的方法。
SN/T 3297适用于进出境玉米种质资源的检测和鉴定。
2规范性引 用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB1353玉米
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14072林木种 质资源保存原则与方法
SN/T 1193基因 检验实验室技术要求
SN/T1584出境玉米检疫操作规程
ASTM E1342用冷冻 、冷冻干燥和低温养护法保存细菌、真菌、原生生物、病毒、遗传要素以及动物和植物组织的保存
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1种质germplasm
亲代通过有性生殖过程或体细胞直接传递给子代并决定固有特性的遗传物质。
3.2种质资源germplasm resources
农作物、畜、禽、鱼、草、花卉等栽培植物和驯化动物的人工培育品种资源及其野生近缘种。
3.3稃husk
禾本科小穗上的小花,其外面具有两片苞片,在外一片称为外稃,包着的内部一片称为内稃。
3.4胚embryo
由卵细胞和一个精子受精后发育而成,是种子内未发育的幼小植物体,包括胚芽、胚轴、胚根和子叶四部分。
3. 5颖果caryopsis
单粒种子形成的果实,成熟时果皮、种皮不易分离,此为禾本科植物特有的果实。
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3297—2012
植物种质资源鉴定方法
玉米的鉴定
Detection and identification of Zea ma ys L2012-10-23 发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-05-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起常SN/T3297-—2012
请注意木文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准山国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局本标准参加起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国安徽出人境检验检疫局、中华人民共和国湖北山人境检验检疫局。本标准主要起草人：魏春艳、刘金华、刘阳、徐涛、姚剑、孟庆峰、王伟利、计振华、许瑾、曾宪东。1
1范围
植物种质资源鉴定方法
本标准规定了进出境玉米种质资源鉴定的方法，本标准适用丁进出境玉米种质资源的检洲和鉴定，2规范性引用文件
玉米的鉴定
SN/T3297—2012
下列文件对于木文件的应用是必不而少的，凡是注日期的引用文件，仅注H谢的版本适用于本文件。比是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用下本文件。(GF13 1353玉米
GB/T6682分析实验室用水规格和战验方法GB/T14072林木种质资源保存原则与方法SN/T 1193 基因检验实验室技术要求SN/T1584出境下米检疫操作规释ASTM F1342用冷冻、冷冻「燥和低温养护法保存细菌、真菌、原生生物、病毒、遗传要素以及动物利植物组织的保存
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
种质germplasm
亲代通过有性生殖过程或休细跑直接传递给了代并决定固有特性的遗传物质。3.2
种质资源germplasmresources
农作物、备、离，色、草、花卉等栽培植物和驯化动物的人工培育品种资源及其野生近缘种，3.3
木科小穗上的小花其外面具有两片危片,在外，片称为外,包着的内部一片称为内辞。3.4
胚 embryo
由卵细胞和一个精了妥精后发育而成.是种子内未发育的幼小植物体,包括胚芽、胚轴、胚根和子叶四部分。
颖果taryopsis
单粒种子形成的果实·成熟时果皮，种皮不易分离·吡为不木科植物特有的果实，1
SN/T3297—2012
叶舌ligule
叶片与叶鞘交界处内侧的膜状突起。叶舌是叶鞘的延长，其大小，形状和毛茸的有无，可作分类依据之一。禾本科的叶舌，常见的有撕裂状叶舌，二深裂叶舌，短叶舌，具毛叶舌和长叶舌等。3.7
叶耳falcate
叶鞘与叶片接连处叶缘两侧的伸延物。常将茎杆卷抱着，末端分离·有时弯曲·多呈耳状或镰刀状。单子叶植物中，部分的禾本科植物具有叶耳，如大麦、小麦、水稻、竹等。在分类上，常根据是否有叶耳，作为区分物种的依据之一
4方法原理
玉蜀黍族共有7个属，包括慧欣属Con）鞭颖草局（Seterachne、多商属（Polutoca）葫芦草属（Chionachne）三裂草属（Trilobuchne），玉蜀黍属（Zeu）、摩擦禾属（Tripsacum），其中玉蜀黍属是玉蜀泰族最重要的种属·除栽培玉米亚种外，其他玉米野生近缘材料统称为大草。玉米与大鱼草在植株和果穗的形态上存在显著的区别（参见附录A和附录B。玉米进出境时，可能存在的形态有：种子、植株、叶片、花、花粉、胚、组培苗、原生重体、组织、细胞、核酸（基因组DNA、RNA）等，以形态学方法为主，并借助分子生物学手段作为其分类鉴定的依据，因IVR为主米内源基因，故将其作为分了鉴定的靶标基因。
5仪器、用具和试剂
5.1仪器和用具
生物显微镜、体视显微镜、光照培养箱、天平，高压灭南器、台式高速离心机、PH计、水浴锅、PCR扩增仪、电泳仪、生物安全柜、制冰机、维织粉碎机、凝胶成像系统紫外分光光度计、低温冰箱、研体、微量加样器（2μL、10μ20200
5.2试剂
00离心管液氮罐
PCR反应常用试剂、电泳试剂和核酸分子量标准等，除另有规定外，均为分析纯或生化纯，水按照GB/T6682规定的执行。
6现场查验
现场查验按照SN/T1584执行.
实验室鉴定
7.1形态学鉴定方法（参见附录C）7.1.1禾本科Grannineae形态特征一年生或多年生草本，少数为木本，植株散生或丛生，有地下茎。地上茎特称为“杆”，常为圆形，有明显的节和节间，节间多中空·很少实心。单叶互生，排成2列，由叶片和叶销组成，在叶片和叶的连接处有时有叶舌和叶耳，叶鞘包围茎杆，常一侧开裂。叶片与叶鞘连接处增厚的部分是叶颈。花小，两2
KAoNiKAca
SN/T32972012
性，稀单性，组成小穗。小穗由一至数朵小花、内颖和外颖组成。由小穗组成穗状花序或圆锥花序。小花由外程、内秤、浆片、雄蕊、雌蕊组成。雄蕊16枚，常为3枚，花丝细长，花药丁字着生。雌蕊由2～3心皮组成，胚珠1枚，柱头羽毛状。果实多为颖果，稀为浆果或坚果。种子具丰富的胚乳，胚乳粉状，占种子的比例大。
7.1.2禾亚科Agrostidoideae形态特征一年生或多年生草本，秆草质。叶片大多数狭长，披针形或线形，有中脉，通常无叶柄，叶鞘和叶片之间无明显关节，不易从叶鞘脱落。7.1.3玉蜀黍属Zea形态特征
年生、高大草本。茎实心，叶大，周面肩平，花单性同株，花序生于秆顶，为总状花序式排列的具柄，一无柄，颗有睫毛·内外程均极薄。雄蕊3，雄花序单生于叶穗状花序。小穗成对，有2小花，一小穗有1小花，无柄，密排于圆柱状的总轴上而腋内，为粗厚、具叶状苞片的穗状花厅，总轴厚，海绵质成多数的纵列。花柱丝状，长突出花序外，顶端短2裂7.1.4玉米形态特征
7.1.4.1概述
一年生高大草本，杆实心。花单性，蛀娃同株，雄花序圆锥状，顶生，，每一小穗有2朵小花。雕花序
肉穗状，单生叶腋，外有数层苞片，每一小穗有2朵小花，1花结实，雌恋1枚。颖果。玉米籽粒的颜色有黄白、红紫，黄褐、黑色等，以黄白两色最多，多呈圆形或长方形，有光泽。其籽粒的形态，不同类型和品种之间差异很大，即使来自同一果穗的种子，亦因着生部位的不同，其粒型和大小也很不一致。但其基本构造则是相同的，都包括种皮、服乳和压胚三部分7.1.4.2根的形态特征
玉米根系可分初生根（胚根）次生粮（节根）气生糖（支柱根7.1.4.3茎的形态特征
玉米茎有明显的节和节间，茎粗自下而上逐渐变细，节间长度逐新增长，至果位附近为最长，后又递减。基由表皮、机械组织基本组织和维管束组成。表皮外有明显的角质层，维管束在茎中星散排列。7.1.4.4叶的形态特征
着生在茎的节上，呈不规则的互生排列·分叶鞘叶枕、叶片，叶舌四部分。7.1.4.5花的形态特征
玉米是雌雄同株异花作物，雄穗着生在植株顶端，雌穗着生在叶腋内，又有雄花先熟现象，天然杂交率高达95%以上，是典型的异花授粉作物。雄穗（雄花序）为圆锥花序，由主轴和多行成对小穗组成：雕穗（果穗）为肉穗花序。
7.1.4.6种子的形态特征
颗果·由种皮、胚乳和胚构成。种皮由外果皮、中果皮、海绵状薄壁组织和管细胞（内表皮）组成。胚乳位于籽实皮以内，占籽实质量的80%～85%，胚乳的外围为糊粉层，其内侧由角质和粉质胚乳组成。胚位于颖果基部的一侧由胚芽、胚轴、胚根和子叶组成，约占整个籽粒的1/4～1/3，占籽实总质量的KAoNiKAca
S>/T 3297—2012
10%~~15
7.1.5玉米的九种类型
按照玉米籽粒形状、肽乳性质与有无尧，将.K米分为儿种类型，具体参照（GB3133。马型(Zramays Lindentata strurr）、f马齿型(Zea mays L.semindentutuKutesh、硬粒型(Zea mays Iinduruta sturt).粉质型(Zea maysT..umylacea Sturi)又名软特型，甜质型(Zeu maysE.eccharatuSiurt)又名甜F米，糯压型又名蜡型（Zeanasl.sinesisKutesh）、爆裂型义名奏天米(Zea mnys I.. ererta sturt),甜粉型(ze moyx I anglucea-sccharua Sturt)，有型(Zea maysI, tunietaShurt).
7.2分子鉴定方法
玉米的PCR鉴定方法见刚录D,防污染措施应符合.SN/T1193的规定。8结果判定
以形态特征为主要依据：符个7.1.1~7.1.4时可判定为玉米，形态特征不确定时，以常规PCR检测结果为依据，并检测结果在226bP处有条带，所性对照和空凹对照光条带山现，而判定为玉米。9样品保存和复核
9.1样品保存
物种资源的样品保存方法按（B/F14072称ASTME1342执行。9.2结果记录与资料保存
记录好样品的米源，种类、编号.取样时间、实验的时间、地点、方法和结果等：间时.原始效锯应凹档，妥善保管，以备复验，谈判和仲裁。9.3复核
山国家质里监督检验检疫总局植物检疫主管部门指定的中位或人员复核，必要尉进行复核实验。KAoNiKAca
A.1玉米及其野生近缘种的分类
A.1.1玉米分类地位
英文名：curn.maize
学名:Zea nys L.
附录A
（资料性附录）
玉米及其野生近缘种
SN/T3297—2012
分类地位：玉米（ZeamaysL.）属于禾本科（Grannineae）禾亚科（Agrostido>ideae）下蜀添族（Mayda:)k蜀黍属(Zeu.）,俗称玉蜀黍、苞米、苞谷,玉菱,棒了、三友、珍珠米A.1.2玉蜀黍属分类地位
天蜀牵属的分类一直变动较：目前得到公认的是埃特斯（lltis)和德埃布雷（Loebley)的分奖系统，埃特斯利德埃布由依雄分枝和雄小穗外额的10个数量性状，7个质量性状和雌小穗壳斗的形状将玉蜀黍属分为玉蜀黍亚属和繁茂亚属。Genus Zeα（玉蜀黍属）
ScctionZea（玉蜀黍业属）
Zra mays(玉米种)
ssp.huehuetenangensis（委委特南戈类玉米业,2n—20)sp.mec（墨西哥类玉米亚种，2n=20)ssp.paruiglumis（小颖类卡米亚种.2n-20）ssp.mays（栽培玉米亚种.2n-20）Section Lucuriantes(繁茂亚属）Zea tururiuns(繁茂类玉米种,2n=20)Zca perennis(四倍体多年牛类卡米种,2n40)Ze iptaennis(二倍体多年生类米种,2n=20)Zeanicaraguensis（尼加拉瓜类玉米种，2n--20）A.2玉米及其野生近缘种的分类特征及特性A,2.1墨西哥类米亚种_Zea mays Lssp.mexicanu(Schrader)Iltis;又称墨西哥-年牛大台，士要分布在墨西册巾部和北部海平面高度大约」700㎡～260m。西哥年牛大台草为年生，白然环境下从种了发芽到成熟大约~6个月，植袜-般1.1m~-4m高.雄花分枝10-~20个以上，雄花序和种子相对长米种巾的其他大草较大，种子三角形，A.2.2小额类玉米亚种（Zeamays.ssp.ParvigumixlltisandDoebley)：也称为墨四哥一年生人台草，于要分布在举西哥西部海乎面高度大约400m～1800m。它为·年生持性.白然环境下从种了发芽到成熟大约6.~7个月，植物兵有典型的微红渐绿色特征，帮无毛，植殊一般2m~5m高。其雄花额苞较小，但雄花分枝数多，通常超过20个分枝。种子相对较小，望一角形，A.2.3委委特南戈类玉米亚种_ZeumaysL.ssp,Huehuetenangensis(Iltis andDoebley)Doebley：义:
TKAoNiKAca
SN/T3297—2012
称为委委特南戈大鱼草，主要分布在危地马拉西部海平面高度900m1650m。它为一年生特性，具有较长的生命周期，区别于玉米种中的其他大鱼草，自然环境下从种子发芽到成熟大约需要7一8个月。由于生命周期相对较长，该材料比其他大鱼草植株要高，植株一般高5m，其雄花形态与小颖类玉米亚种极其相似，两者的种子和雄花序相对较小，种子均呈三角形。A.2.4栽培玉米亚种（ZeamawsL.ssp.Mays）即玉米：又称印地安玉米。起源于墨西哥，现在成为世界第三大粮食作物。栽培玉米与同一亚属的其他3个大鱼草雄花极其相似，因此把它与小颖类玉水亚种，墨西哥类玉米亚种和委委特南戈类玉米亚种归为同一亚属。但是，玉米与大白草在植株和果穗的形态上存在显著的区别。
A2.5繁茂类玉米种［Zealuxurians(DurieuandAscherson)Birdl：又称危地马拉或佛罗里达大草，主要分布在危地马拉东南、洪都拉斯和尼加立瓜海面高度1100m以下。为一年生特性·无根状茎植株一般是3m4m高，雄花分枝相对较少（420）而直，罐小穗外额具有许多区别于其他玉蜀委属材料的细纹，其种子外部呈梯形。特性。
它与四倍体利二倍体多年生类玉米种特性具有许多相似的特征和A.2.6四倍体多年生类玉米种[Zeaperennis（Hirehcoek）ReevesEndMangelsdor：又称为多年生大草，于1910年在墨西哥的哈利斯科洲发现，它主要分布在海平面高度1500m～2000㎡的狭窄地带，是玉蜀泰属唯一的一个四倍体（n一2一20），具有多年生特性，可忍耐重霜冻，在寒冷、潮湿等不利条件下生存多年，具有发达的形似鞭的根状茎，植株属的二倍体多年生大鱼草植株与特征，特性及其相似。一般1.5m~2m高。四倍体多年生大台草与同A，2.7二倍体多年生类玉米种（Zeudiptoperennus lltis，DoebleyandGuzman）：于1978年在墨西哥南部哈利斯科洲一个山容中发现的，券布在海平面高度1400m~2400m。二倍体多年生大草是该属中唯一的一个二倍体（n=10）多年生植物，具有发达的根系，根似竹鞭，根茎有很多节，植株一般2m～5m高。其植物学特征、特性与四倍体多年生大鱼草十分相近。A.2.8尼加拉瓜类玉米种（Zeaniearaguensis）：是最近发现的的尼加拉瓜Fonseca海湾、海岸线或者出海口。个大当草种质，生长在地理相对隔离它为一年生特性，植株
2.5m~4m高，叶鞘表面无毛，
穗，小秘的外颗具明显的长横细纹，其种子外部雄花分枝相对较长而多，并且每手个分枝有较多数量的小
呈梯形。尼加拉瓜类玉米种与繁茂玉米种、四倍体和倍体多年生类王米种特性具有许多相似的特征特性，它的染色体数目只是最近才得以确认，分类归属还存在争论。6
TKAoNKAca
附录B
（资料性附录）
玉米及其野生近缘种种子形态特征图图B.1玉米（7×）
图B.3花粘玉米（7×）
墨西哥类玉米亚种（8×）
SN/T3297—2012
图B.2爆玉米（7×）
图B.4垦粘玉米（7×）
图B.6四倍体多年生类玉米种（8×）SN/T3297-2012
图B.7二倍体多年生类玉米种（8×）图B.9摩擦禾（7×）
图B.8繁茂类玉米种（7x）
说明：
玉米秆叶与腋生雌花序：
项生雄性圆锥花序：
雄小穗李生：
附录C
（资料性附录）
玉米及其野生近缘种外部形态特征图摩擦草花序分枝，雕花序位于雄花序的下部：类蜀泰花序为苞郁所包藏
图C.1玉米及其野生近缘种外部形态特征图（仿张泰利）SN/T3297—2012
SN/T32972012
玉米基因组DNA提取
附录D
（规范性附录）
分子鉴定
称取2g粉样于10mL离心管中，加入5mLCTAB裂解液（含适量RNA酶），混匀.65℃水浴振荡保温1h:2c001/min离心5min：取上清滚·加等体积免费标准下载网bzxz
戊醇（体积比：24/1）混匀，静置宇
5min，8000r/min，离心5min上清液加0.65倍体积的异内，混，12000r/min4℃离心10min；弃上清液，加500L70%冰乙醇洗涤一次.12000+/min4C离心5min：弃上清液，将沉淀室温晾干，加人50uLTE溶解沉淀，备用（可放于4C冰中），此即为总DNA提取液。也可用相应市售DNA提取试剂盒提取模板DNA常规PCR扩增反应
玉米常规PCR扩增引物序列见表D.1表D.1
正向引物
反向引物
反应体系
反应体系见表D.2。
试剂名称
样品DNA
5XPCR缓冲液（含MgCL）
dNTP溶液，10mmol/L
正向引物，10mol/L
反向引物，10pmol/L
TagDNA聚合酶，5U/μL
引物序列
uckgigt
iggage
aCtgR3
egtgtagngoatgicgat
常规PCR反应体系
终浓度
10ng50ng
0.2mmol/L
0.4μmol/L
0.4pmol/L
注：反应体系中各试剂的量可根据反应体系的总体积进行适当调整。10
扩增片段长度/bp
加样体积/uL
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植物种质资源鉴定方法
玉米的鉴定
Detection and identification of Zea ma ys L2012-10-23 发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2013-05-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起常SN/T3297-—2012
请注意木文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准山国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局本标准参加起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国安徽出人境检验检疫局、中华人民共和国湖北山人境检验检疫局。本标准主要起草人：魏春艳、刘金华、刘阳、徐涛、姚剑、孟庆峰、王伟利、计振华、许瑾、曾宪东。1
1范围
植物种质资源鉴定方法
本标准规定了进出境玉米种质资源鉴定的方法，本标准适用丁进出境玉米种质资源的检洲和鉴定，2规范性引用文件
玉米的鉴定
SN/T3297—2012
下列文件对于木文件的应用是必不而少的，凡是注日期的引用文件，仅注H谢的版本适用于本文件。比是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用下本文件。(GF13 1353玉米
GB/T6682分析实验室用水规格和战验方法GB/T14072林木种质资源保存原则与方法SN/T 1193 基因检验实验室技术要求SN/T1584出境下米检疫操作规释ASTM F1342用冷冻、冷冻「燥和低温养护法保存细菌、真菌、原生生物、病毒、遗传要素以及动物利植物组织的保存
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
种质germplasm
亲代通过有性生殖过程或休细跑直接传递给了代并决定固有特性的遗传物质。3.2
种质资源germplasmresources
农作物、备、离，色、草、花卉等栽培植物和驯化动物的人工培育品种资源及其野生近缘种，3.3
木科小穗上的小花其外面具有两片危片,在外，片称为外,包着的内部一片称为内辞。3.4
胚 embryo
由卵细胞和一个精了妥精后发育而成.是种子内未发育的幼小植物体,包括胚芽、胚轴、胚根和子叶四部分。
颖果taryopsis
单粒种子形成的果实·成熟时果皮，种皮不易分离·吡为不木科植物特有的果实，1
SN/T3297—2012
叶舌ligule
叶片与叶鞘交界处内侧的膜状突起。叶舌是叶鞘的延长，其大小，形状和毛茸的有无，可作分类依据之一。禾本科的叶舌，常见的有撕裂状叶舌，二深裂叶舌，短叶舌，具毛叶舌和长叶舌等。3.7
叶耳falcate
叶鞘与叶片接连处叶缘两侧的伸延物。常将茎杆卷抱着，末端分离·有时弯曲·多呈耳状或镰刀状。单子叶植物中，部分的禾本科植物具有叶耳，如大麦、小麦、水稻、竹等。在分类上，常根据是否有叶耳，作为区分物种的依据之一
4方法原理
玉蜀黍族共有7个属，包括慧欣属Con）鞭颖草局（Seterachne、多商属（Polutoca）葫芦草属（Chionachne）三裂草属（Trilobuchne），玉蜀黍属（Zeu）、摩擦禾属（Tripsacum），其中玉蜀黍属是玉蜀泰族最重要的种属·除栽培玉米亚种外，其他玉米野生近缘材料统称为大草。玉米与大鱼草在植株和果穗的形态上存在显著的区别（参见附录A和附录B。玉米进出境时，可能存在的形态有：种子、植株、叶片、花、花粉、胚、组培苗、原生重体、组织、细胞、核酸（基因组DNA、RNA）等，以形态学方法为主，并借助分子生物学手段作为其分类鉴定的依据，因IVR为主米内源基因，故将其作为分了鉴定的靶标基因。
5仪器、用具和试剂
5.1仪器和用具
生物显微镜、体视显微镜、光照培养箱、天平，高压灭南器、台式高速离心机、PH计、水浴锅、PCR扩增仪、电泳仪、生物安全柜、制冰机、维织粉碎机、凝胶成像系统紫外分光光度计、低温冰箱、研体、微量加样器（2μL、10μ20200
5.2试剂
00离心管液氮罐
PCR反应常用试剂、电泳试剂和核酸分子量标准等，除另有规定外，均为分析纯或生化纯，水按照GB/T6682规定的执行。
6现场查验
现场查验按照SN/T1584执行.
实验室鉴定
7.1形态学鉴定方法（参见附录C）7.1.1禾本科Grannineae形态特征一年生或多年生草本，少数为木本，植株散生或丛生，有地下茎。地上茎特称为“杆”，常为圆形，有明显的节和节间，节间多中空·很少实心。单叶互生，排成2列，由叶片和叶销组成，在叶片和叶的连接处有时有叶舌和叶耳，叶鞘包围茎杆，常一侧开裂。叶片与叶鞘连接处增厚的部分是叶颈。花小，两2
KAoNiKAca
SN/T32972012
性，稀单性，组成小穗。小穗由一至数朵小花、内颖和外颖组成。由小穗组成穗状花序或圆锥花序。小花由外程、内秤、浆片、雄蕊、雌蕊组成。雄蕊16枚，常为3枚，花丝细长，花药丁字着生。雌蕊由2～3心皮组成，胚珠1枚，柱头羽毛状。果实多为颖果，稀为浆果或坚果。种子具丰富的胚乳，胚乳粉状，占种子的比例大。
7.1.2禾亚科Agrostidoideae形态特征一年生或多年生草本，秆草质。叶片大多数狭长，披针形或线形，有中脉，通常无叶柄，叶鞘和叶片之间无明显关节，不易从叶鞘脱落。7.1.3玉蜀黍属Zea形态特征
年生、高大草本。茎实心，叶大，周面肩平，花单性同株，花序生于秆顶，为总状花序式排列的具柄，一无柄，颗有睫毛·内外程均极薄。雄蕊3，雄花序单生于叶穗状花序。小穗成对，有2小花，一小穗有1小花，无柄，密排于圆柱状的总轴上而腋内，为粗厚、具叶状苞片的穗状花厅，总轴厚，海绵质成多数的纵列。花柱丝状，长突出花序外，顶端短2裂7.1.4玉米形态特征
7.1.4.1概述
一年生高大草本，杆实心。花单性，蛀娃同株，雄花序圆锥状，顶生，，每一小穗有2朵小花。雕花序
肉穗状，单生叶腋，外有数层苞片，每一小穗有2朵小花，1花结实，雌恋1枚。颖果。玉米籽粒的颜色有黄白、红紫，黄褐、黑色等，以黄白两色最多，多呈圆形或长方形，有光泽。其籽粒的形态，不同类型和品种之间差异很大，即使来自同一果穗的种子，亦因着生部位的不同，其粒型和大小也很不一致。但其基本构造则是相同的，都包括种皮、服乳和压胚三部分7.1.4.2根的形态特征
玉米根系可分初生根（胚根）次生粮（节根）气生糖（支柱根7.1.4.3茎的形态特征
玉米茎有明显的节和节间，茎粗自下而上逐渐变细，节间长度逐新增长，至果位附近为最长，后又递减。基由表皮、机械组织基本组织和维管束组成。表皮外有明显的角质层，维管束在茎中星散排列。7.1.4.4叶的形态特征
着生在茎的节上，呈不规则的互生排列·分叶鞘叶枕、叶片，叶舌四部分。7.1.4.5花的形态特征
玉米是雌雄同株异花作物，雄穗着生在植株顶端，雌穗着生在叶腋内，又有雄花先熟现象，天然杂交率高达95%以上，是典型的异花授粉作物。雄穗（雄花序）为圆锥花序，由主轴和多行成对小穗组成：雕穗（果穗）为肉穗花序。
7.1.4.6种子的形态特征
颗果·由种皮、胚乳和胚构成。种皮由外果皮、中果皮、海绵状薄壁组织和管细胞（内表皮）组成。胚乳位于籽实皮以内，占籽实质量的80%～85%，胚乳的外围为糊粉层，其内侧由角质和粉质胚乳组成。胚位于颖果基部的一侧由胚芽、胚轴、胚根和子叶组成，约占整个籽粒的1/4～1/3，占籽实总质量的KAoNiKAca
S>/T 3297—2012
10%~~15
7.1.5玉米的九种类型
按照玉米籽粒形状、肽乳性质与有无尧，将.K米分为儿种类型，具体参照（GB3133。马型(Zramays Lindentata strurr）、f马齿型(Zea mays L.semindentutuKutesh、硬粒型(Zea mays Iinduruta sturt).粉质型(Zea maysT..umylacea Sturi)又名软特型，甜质型(Zeu maysE.eccharatuSiurt)又名甜F米，糯压型又名蜡型（Zeanasl.sinesisKutesh）、爆裂型义名奏天米(Zea mnys I.. ererta sturt),甜粉型(ze moyx I anglucea-sccharua Sturt)，有型(Zea maysI, tunietaShurt).
7.2分子鉴定方法
玉米的PCR鉴定方法见刚录D,防污染措施应符合.SN/T1193的规定。8结果判定
以形态特征为主要依据：符个7.1.1~7.1.4时可判定为玉米，形态特征不确定时，以常规PCR检测结果为依据，并检测结果在226bP处有条带，所性对照和空凹对照光条带山现，而判定为玉米。9样品保存和复核
9.1样品保存
物种资源的样品保存方法按（B/F14072称ASTME1342执行。9.2结果记录与资料保存
记录好样品的米源，种类、编号.取样时间、实验的时间、地点、方法和结果等：间时.原始效锯应凹档，妥善保管，以备复验，谈判和仲裁。9.3复核
山国家质里监督检验检疫总局植物检疫主管部门指定的中位或人员复核，必要尉进行复核实验。KAoNiKAca
A.1玉米及其野生近缘种的分类
A.1.1玉米分类地位
英文名：curn.maize
学名:Zea nys L.
附录A
（资料性附录）
玉米及其野生近缘种
SN/T3297—2012
分类地位：玉米（ZeamaysL.）属于禾本科（Grannineae）禾亚科（Agrostido>ideae）下蜀添族（Mayda:)k蜀黍属(Zeu.）,俗称玉蜀黍、苞米、苞谷,玉菱,棒了、三友、珍珠米A.1.2玉蜀黍属分类地位
天蜀牵属的分类一直变动较：目前得到公认的是埃特斯（lltis)和德埃布雷（Loebley)的分奖系统，埃特斯利德埃布由依雄分枝和雄小穗外额的10个数量性状，7个质量性状和雌小穗壳斗的形状将玉蜀黍属分为玉蜀黍亚属和繁茂亚属。Genus Zeα（玉蜀黍属）
ScctionZea（玉蜀黍业属）
Zra mays(玉米种)
ssp.huehuetenangensis（委委特南戈类玉米业,2n—20)sp.mec（墨西哥类玉米亚种，2n=20)ssp.paruiglumis（小颖类卡米亚种.2n-20）ssp.mays（栽培玉米亚种.2n-20）Section Lucuriantes(繁茂亚属）Zea tururiuns(繁茂类玉米种,2n=20)Zca perennis(四倍体多年牛类卡米种,2n40)Ze iptaennis(二倍体多年生类米种,2n=20)Zeanicaraguensis（尼加拉瓜类玉米种，2n--20）A.2玉米及其野生近缘种的分类特征及特性A,2.1墨西哥类米亚种_Zea mays Lssp.mexicanu(Schrader)Iltis;又称墨西哥-年牛大台，士要分布在墨西册巾部和北部海平面高度大约」700㎡～260m。西哥年牛大台草为年生，白然环境下从种了发芽到成熟大约~6个月，植袜-般1.1m~-4m高.雄花分枝10-~20个以上，雄花序和种子相对长米种巾的其他大草较大，种子三角形，A.2.2小额类玉米亚种（Zeamays.ssp.ParvigumixlltisandDoebley)：也称为墨四哥一年生人台草，于要分布在举西哥西部海乎面高度大约400m～1800m。它为·年生持性.白然环境下从种了发芽到成熟大约6.~7个月，植物兵有典型的微红渐绿色特征，帮无毛，植殊一般2m~5m高。其雄花额苞较小，但雄花分枝数多，通常超过20个分枝。种子相对较小，望一角形，A.2.3委委特南戈类玉米亚种_ZeumaysL.ssp,Huehuetenangensis(Iltis andDoebley)Doebley：义:
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称为委委特南戈大鱼草，主要分布在危地马拉西部海平面高度900m1650m。它为一年生特性，具有较长的生命周期，区别于玉米种中的其他大鱼草，自然环境下从种子发芽到成熟大约需要7一8个月。由于生命周期相对较长，该材料比其他大鱼草植株要高，植株一般高5m，其雄花形态与小颖类玉米亚种极其相似，两者的种子和雄花序相对较小，种子均呈三角形。A.2.4栽培玉米亚种（ZeamawsL.ssp.Mays）即玉米：又称印地安玉米。起源于墨西哥，现在成为世界第三大粮食作物。栽培玉米与同一亚属的其他3个大鱼草雄花极其相似，因此把它与小颖类玉水亚种，墨西哥类玉米亚种和委委特南戈类玉米亚种归为同一亚属。但是，玉米与大白草在植株和果穗的形态上存在显著的区别。
A2.5繁茂类玉米种［Zealuxurians(DurieuandAscherson)Birdl：又称危地马拉或佛罗里达大草，主要分布在危地马拉东南、洪都拉斯和尼加立瓜海面高度1100m以下。为一年生特性·无根状茎植株一般是3m4m高，雄花分枝相对较少（420）而直，罐小穗外额具有许多区别于其他玉蜀委属材料的细纹，其种子外部呈梯形。特性。
它与四倍体利二倍体多年生类玉米种特性具有许多相似的特征和A.2.6四倍体多年生类玉米种[Zeaperennis（Hirehcoek）ReevesEndMangelsdor：又称为多年生大草，于1910年在墨西哥的哈利斯科洲发现，它主要分布在海平面高度1500m～2000㎡的狭窄地带，是玉蜀泰属唯一的一个四倍体（n一2一20），具有多年生特性，可忍耐重霜冻，在寒冷、潮湿等不利条件下生存多年，具有发达的形似鞭的根状茎，植株属的二倍体多年生大鱼草植株与特征，特性及其相似。一般1.5m~2m高。四倍体多年生大台草与同A，2.7二倍体多年生类玉米种（Zeudiptoperennus lltis，DoebleyandGuzman）：于1978年在墨西哥南部哈利斯科洲一个山容中发现的，券布在海平面高度1400m~2400m。二倍体多年生大草是该属中唯一的一个二倍体（n=10）多年生植物，具有发达的根系，根似竹鞭，根茎有很多节，植株一般2m～5m高。其植物学特征、特性与四倍体多年生大鱼草十分相近。A.2.8尼加拉瓜类玉米种（Zeaniearaguensis）：是最近发现的的尼加拉瓜Fonseca海湾、海岸线或者出海口。个大当草种质，生长在地理相对隔离它为一年生特性，植株
2.5m~4m高，叶鞘表面无毛，
穗，小秘的外颗具明显的长横细纹，其种子外部雄花分枝相对较长而多，并且每手个分枝有较多数量的小
呈梯形。尼加拉瓜类玉米种与繁茂玉米种、四倍体和倍体多年生类王米种特性具有许多相似的特征特性，它的染色体数目只是最近才得以确认，分类归属还存在争论。6
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附录B
（资料性附录）
玉米及其野生近缘种种子形态特征图图B.1玉米（7×）
图B.3花粘玉米（7×）
墨西哥类玉米亚种（8×）
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图B.2爆玉米（7×）
图B.4垦粘玉米（7×）
图B.6四倍体多年生类玉米种（8×）SN/T3297-2012
图B.7二倍体多年生类玉米种（8×）图B.9摩擦禾（7×）
图B.8繁茂类玉米种（7x）
说明：
玉米秆叶与腋生雌花序：
项生雄性圆锥花序：
雄小穗李生：
附录C
（资料性附录）
玉米及其野生近缘种外部形态特征图摩擦草花序分枝，雕花序位于雄花序的下部：类蜀泰花序为苞郁所包藏
图C.1玉米及其野生近缘种外部形态特征图（仿张泰利）SN/T3297—2012
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玉米基因组DNA提取
附录D
（规范性附录）
分子鉴定
称取2g粉样于10mL离心管中，加入5mLCTAB裂解液（含适量RNA酶），混匀.65℃水浴振荡保温1h:2c001/min离心5min：取上清滚·加等体积免费标准下载网bzxz
戊醇（体积比：24/1）混匀，静置宇
5min，8000r/min，离心5min上清液加0.65倍体积的异内，混，12000r/min4℃离心10min；弃上清液，加500L70%冰乙醇洗涤一次.12000+/min4C离心5min：弃上清液，将沉淀室温晾干，加人50uLTE溶解沉淀，备用（可放于4C冰中），此即为总DNA提取液。也可用相应市售DNA提取试剂盒提取模板DNA常规PCR扩增反应
玉米常规PCR扩增引物序列见表D.1表D.1
正向引物
反向引物
反应体系
反应体系见表D.2。
试剂名称
样品DNA
5XPCR缓冲液（含MgCL）
dNTP溶液，10mmol/L
正向引物，10mol/L
反向引物，10pmol/L
TagDNA聚合酶，5U/μL
引物序列
uckgigt
iggage
aCtgR3
egtgtagngoatgicgat
常规PCR反应体系
终浓度
10ng50ng
0.2mmol/L
0.4μmol/L
0.4pmol/L
注：反应体系中各试剂的量可根据反应体系的总体积进行适当调整。10
扩增片段长度/bp
加样体积/uL
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