SN/T 4675.23-2016.Determination of ammonium nitrogen in wine and grape juice for export-Continuous flow analysis(CFA) method.
1范围
SN/T 4675.23规定了出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮含量的连续流动分析仪的测定方法。
SN/T 4675.23适用于葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
样品与试剂在蠕动泵的推动下进人化学反应模块，在密闭的管路中连续流动，被气泡按一定间隔规律地隔开。在碱性介质中,样品中的氨、铵离子与二氯异氰脲酸钠溶液释放出来的次氯酸根反应生成氯胺。在40 °C和亚硝基铁氰化钠存在的条件下,氯胺与水杨酸盐反应形成蓝绿色化合物,于660 nm波长处测量吸光度,外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。
4.1氨氮标准 储备液:准确称取3.819 g氯化铵(4.1)加水溶解并定容至1 000 mL容量瓶中,混匀。或直接购买市售有证标准溶液p(N)=1 000 mg/L。
4.2氨氮标准中间溶液:酒精含量为8%~15%葡萄酒样品的测定:10 mL氨氮标准储备液(4.15)加人到100 mL容量瓶中,用12%乙醇-水溶液定容至刻度,混匀。酒精含量高于15%或低于8%的葡萄酒样品的测定:10 mL氨氮标准储备液(4.15)加入到100 mL容量瓶中,用与样品酒精度相同的乙醇-水溶液定容至刻度,混匀;葡萄汁样品的测定:10 mL氨氮标准储备液(4.15)加人到100 mL容量瓶中,用水定容至刻度,混匀。
4.3滤膜(水系):孔径为0.45 μm。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4675.23—2016
出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法
Determination of ammonium nitrogen in wine and grape juice for export-Continuous flow analysis(CFA) method2016-12-12发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-07-01实施
SN/T4675《出口葡萄酒质量安全分析方法》共分为30个部分：SN/T4675.1
SN/T4675.2
SN/T4675.3
-SN/T4675.4
SN/T4675.5
-SN/T4675.6
SN/T4675.7
SN/T4675.8
SN/T4675.9
SN/T4675.10
SN/T4675.11
SN/T 4675.12
SN/T 4675.13
SN/T4675.14
SN/T4675.15
SN/T4675.16
SN/T4675.17
SN/T4675.18
SN/T4675.19
SN/T4675.20
SN/T 4675.21
SN/T 4675.22
SN/T4675.23
SN/T 4675.24
SN/T4675.25
SN/T 4675.26
SN/T4675.27
SN/T4675.28
SN/T4675.29
SN/T4675.30
出口葡萄酒中甘油的测定酶法：出口葡萄酒中2，3-丁二醇的测定气相色谱法；出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定；出口葡萄酒中乳酸的测定酶法：出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法；出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定；出口葡萄酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法；出口葡萄酒中5羟甲基糠醛的测定液相色谱法：出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法：SN/T4675.232016
出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法：出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法；出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法；出口葡菊酒中2.4，6三氯甲苯醚残留量的测定气相色谱-质谱法；出口葡萄酒中纳他霉索的测定液相色谱-质谱/质谱法：出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法；出口葡萄酒中富马酸的测定液相色谱质谱/质谱法：出口葡萄酒中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法：出口葡葡酒中二硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法；出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定；出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法：出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法，出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法；出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法；出口葡萄酒福林-肖卡指数的测定分光光度计法：出口葡萄酒颜色的测定CIE1976（Lab*）色空间法：出口葡萄酒浊度的测定散射光法；出口葡萄酒碱性灰分的测定；
出口葡萄酒细菌、霉菌及酵母的计数；出口葡萄酒中酒香酵母检验实时荧光PCR法；出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验实时荧光PCR法。本部分为SN/T4675的第23部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：刘萤、韩深、程甲、刘熙岩、王玥、程超、刘青、李志勇。1范围
出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法
SN/T4675.23—2016
SN/T4675的本部分规定了出口葡萄酒及葡葡汁中氨氮含量的连续流动分析仪的测定方法。本部分适用于葡萄酒及葡萄汁中氨的演2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
样品与试剂在蠕动泵的推动下进人化学反应模块，在密闭的管路中连续流动，被气泡按一定间隔规律地隔开。在碱性介质中，样品中的氨、铵离子与二氯异氰脲酸钠溶液释放出来的次氯酸根反应生成氯胺。在40℃和亚硝基铁氰化钠存在的条件下，氯胺与水杨酸盐反应形成蓝绿色化合物，于660nm波长处测量吸光度，外标法定量。参考工作流程图，见图1。
缓冲液
缓冲液
进样器
水杨酸钠
二氟异氰尿酸钠
反应线圈
检测器
数据处理
图1连续流动分析法测定葡萄酒及葡萄汁中氨氨含量流路图4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。氯化铵（NH,CI)：优级纯，在105℃土1℃下干燥恒重后，保存在干燥器中。4.1
乙醇(C,H,OH)。
SN/T4675.23—2016
4.3氢氧化钠(NaOH)。
4.4柠檬酸三钠（C.H.O,Nas2H,O)。4.5水杨酸钠（NaC,HO）。
4.6二氯异氰脲酸钠（C,Cl2N,O,Na2H,O）4.7亚硝基铁氰化钠(Naz[Fe(CN)。NO]·2H,O)。4.8十二烷基聚乙二醇醚（Brij35，CHusO24）4.9乙醇溶液：12%乙醇溶液。量取120mL乙醇（4.2），用水定容至1000mL，混匀4.10十二烷基聚乙二醇醚（Brij35）溶液：30%Brij35溶液。称取30.0gBrij35（4.8）溶于100ml水中，混勾。
4.11氢氧化钠溶液：5mol/L氢氧化钠溶液。称取200.0g氧氙化钠（4.3）溶于适量水中，冷却后.用水稀释至1000mL.混勺。
4.12缓冲溶液：称取40.0g柠檬酸三钠（4.4），用水定容至1000mL，加入1mL30%Brij35（4.10），混匀。
4.13水杨酸钠溶液：称取34.0g水杨酸钠（4.5）及0.4g亚硝基铁氰化钠（4.7），用水定容至1000mL，加人1mL30%Brij35（4.10），混匀。4.14二氯异氰脲酸钠溶液：称取2.0g二氯异氰尿酸钠（4.6），加入氢氧化钠溶液（4.11)50mL，加水定容至1000mL，混匀。
4.15氨氮标准储备液：准确称取3.819g氯化铵（4.1)加水溶解并定容至1000mL容量瓶中，混勾。或直接购买市售有证标准溶液o（N）=1000mg/L。4.16氨氮标准中间溶液：酒精含量为8%15%葡萄酒样品的测定：10mL氨氮标准储备液（4.15）加入到100mL容量瓶中，用12%乙醇-水溶液定容至刻度，混勺。酒精含量高于15%或低于8%的葡萄酒样品的测定：10ml.氨氮标准储备液（4.15）加人到100ml.容量瓶中，用与样品酒精度相同的乙醇-水溶液定容至刻度，混勾；葡萄汁样品的测定：10mL氨氮标准储备液（4.15）加入到100mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。
4.17滤膜（水系）：孔径为0.45μm。5
仪器和设备
5.1天平：精度为0.1g.0.1mg。
5.2实验仪器：连续流动分析仪，配有透析器。5.3容量瓶：100mL.200mL1000mL5.4移液器：100l~1000μ，500μl~5000，6操作步骤
样品前处理
不带气泡样品经滤膜（4.17）过滤后直接进样：起泡葡萄酒需预先脱气。将100mL试样倒入带排气塞的瓶中，在室温下使用水平振荡器或超声波水浴脱气，直至无气泡逸出。6.2测定步骤
6.2.1标准曲线的绘制
乙醇含量为8%～15%的葡萄酒样品标准曲线的配制：量取适量的氨氮标准中间溶液（4.16），用2
-KAoNIKAca
SN/T4675.23-—2016
12%乙醇-水溶液稀释定容至100mL，制备6个浓度点的标准系列，氨氮浓度分别为：0mg/L、10mg/L、20mg/L.30mg/L、40mg/L和60mg/L。乙醇含量低于8%或高于15%的葡萄酒样品标准曲线的配制：量取适量的氨氮标准中间溶液（4.16），用与检测样品标示的乙醇含量等同的乙醇-水溶液稀释氨氮标准中间溶液（4.16）并定容至100mL，制备6个浓度点的标准系列，氨氮浓度分别为：0mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L和60mg/L。
葡萄汁样品标准曲线的配制：量取适量的氨氮标准中问溶液（4.16），用水稀释定容至100mL，制备6个浓度点的标准系列，氨氮浓度分别为：0mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L40mg/L和60mg/Lc手动进样标准曲线最高浓度，待出峰后设置自动增益调节（般为90%）。再按编排好的程序开始运行，包括标准曲线、基线校正、带过校正、漂移校正等，软件会按峰高和浓度值自动绘制标准曲线。6.2.2测定
按照与绘制标准曲线相同的条件，量取适量样品进行测定。若样品的氨氮含量超出标准曲线检测范围，应取适量样品稀释后上机测定。6.2.3空白试验
用实验用水代替样品，按照6.2.2步骤进行空白试验。结果计算与表示
样品中氨氮的含量（以氮计，mg/L），按照式（1）进行计算r=cc)Xf
式中：
样品中氨氮的含量，单位为毫克每升（mg/）：由标准曲线得到的样液中氨氨氮的浓度，单位为毫克每升（mg/）：C
c。由标准曲线得到的空白试验中氨氮的浓度，单位为毫克每升（mg/L)；于—稀释倍数，
7.2结果保留3位有效数字。
定量限
角萄汁和葡萄酒的定量限为1mg/L。精密度
在重复性条件下获得两次独立测定结果差值的绝对值不得超过算术平均数的5%。10回收率
葡萄酒、葡萄汁基质中的添加水平及回收率数据见表1。（1）
irkAoNiKca
SN/T4675.23—2016
红葡萄酒
白葡萄酒
葡萄酒
葡萄汁
表1不同浓度添加水平的添加回收率（n=6）添加水平/（mg/L)
回收率范围/%
90.8~97.7
93.0~97.1
95.9-~99.8
96.3~99.1
96.1-99.1
90.2-97.8
92.6-98.0
96.2~97.4
相对标准偏差/%
KANrKAca
Foreword
Standard(SN/T4675)\Methodsof export wine analysis\includes30 partsSN/T4675.23—2016
—SN/T4675.1Determinationofglycerolinwineforexport-Enzymaticmethod；-SN/T4675.2Determinationof2
GCmethod
3Determination of stable carbon isotope ratio of ethanol in wine for export;—SN/T4675.3
-SN/T4675.4Determinationof lacticacidinwineforexpor
-SN/T4675.5DeterminationoforganicacidinwiEnzymaticmethod；www.bzxz.net
forexport-lonchromatographymethod-SN/T4675.6Determinationofglucose,fructoseand sucrose in wineforexport;—SN/T4675.7
Determination of acetaldeh
—SN/T4675.8
Determination of 5-h
—SN/T4675.9
—SN/T4675.10
—SN/T4675.11
SN/T4675.12
GC/MSmethod;
xymethylfurfural inwineforexport-HPLCmethoddre
Determination of diethylene inwineto
Determinationof ochratoxinA
GC/MSmethod;
wineforexport-
HPLC/MS/MSmethod：
Determination of 7anthyocyaninsDetermination of
ysozymein
-UHPLCmethod
n wine for export-
ineforexport
HPLCmethod;
sN/T4675.13Determinationof2,4.6-trichloroanosoleinwineforexport;SN/T4675.14Determinationofnatamycineinwineforexport—HPLC/MS/MSmethod;SN/T4675.15Determinationof salicylic acid,dehydroacetic acid and4-chlorobenzoic acid inwineforexport-HPLCmethod；
SN/T4675.16Determinationoffumaricacidinwineforexport-HPLC/MS/MSmethod;—SN/T4675.17Determinationofbutyltincompoundsinwineforexport-GC/MS/MSmethod;3Determination of dithiocarbamates(salt)residues in winefor export-Headspace-SN/T4675.18
TTKAONIKAca
SN/T4675.23—2016
GCmethod;
SN/T4675.19Determinationofsodium,magnesium.potassium,calcium,chromium,manganese,iron,copper,zinc,arsenic,selenium,silver.cadmium and lead in wine for export-SN/T4675.20 Determinationof rare-earthelements in wineforexport-ICP-MSmethod;Determination of soluble inorganic salts in wine for export-lon chromatography—SN/T4675.21
method：
—SN/T4675.22Determinationoftotal sulfurdioxide inwineforexport-Colorimetricmethod;SN/T4675.23Determinationof ammoniumnitrogen inwineandgrapejuiceforexport-Continu-ousflowanalysis(CFA)method;
—SN/T4675.24DeterminationofFolin&Ciocalteuindexofwineforexport-Spectrophotometrymethod;
-SN/T4675.25
spacesystem;
Determination of chromatic characteristics of wine for export-ClE Lab color—SN/T4675.26
Determination of turbidity of wine for export-Diffused radiation method;Determinationofalkalineashofwineforexport—SN/T4675.27
SN/T4675.28Method for enumeration of colony-forming units of yeasts,moulds and bacteria incork stoppersandwineforexport;SN/T4675.29Determinationofbrettanomyces inwineforexport-Real-timePCRmethod;—SN/T4675.30
Determination of zygosaccharomyces baili in wine for export-Real-time PcRmethod.
This part is part 23 of thestandard.This part is drafted according to GB/T1.1—2009Please note that some of the content of the standard may involve patents. Publication of the presentstandard doesnotbeartheresponsibility ofidentifyingthesepatents.This part was proposed by and was under the jurisdiction of Certification and Accreditation Adminis-trationof thePeople'sRepublicof China6
riikAoNhiKAca
SN/T4675.23—2016
This part wasdrafted by Beijing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People'sRepublic of China,Shanghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People's Republic ofChina,Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People's Republic of ChinaThemain drafters of this part wereLiuYing,Han Shen,Cheng jia,Liu Xiyan,Wang Peiyue,ChengChao，LiuQing，Li Zhiyong.
SN/T4675.23—2016
Determination of ammonium nitrogen in wine andgrapejuicefor export+
Continuousflowanalysis(CFA)methodScope
The standard specifies methods suitable for the determination of ammonium nitrogen in wine andflowanalysis(CFA).
grapejuiceforexport，applyingforcontinuousThis standard is applicable to the determination and quantification of ammonium nitrogen in redwine, white wine, pink wine, sparkling wine, ice wine and grape juice for export by continuousflowanalysis（CFA)
Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document.For date-For undated references.the latest edition of the referenceddreferences,only edition citedapplies.
document (including any amendments) applies.yuse--Specification and testmethodswaterforanalytical laboratoryGB/T6682
3Principle
In a continuouslyflowing,gas-segmented carrierstream,ammonium present inthesample reacts inalkaline solution withhypochlorite(Cio'),whichhas previouslybeen liberated from dichloroisocya-nurate. The chloroamine formed reacts under catalysis of nitroprusside with salicylate at 40 toform a blue-green indophenol dye which is quantitatively measured in a flow photometer at 660 nmby external standardmethod.
Flowanalysissystemisshowedinfigure1.8
Sample
Buffet
Buffer
Sampler
Salicylate
SN/T-4675.23—2016
Detector
DateProcessing
Figure 1-Flow analysis system for determination ammonium in wine and grape juiceReagents and materials
Unless otherwise specified,all reagents shouldterprescribed byGB/T6682.
e of analytical grade.Water is the second grade wa-driedat105±2℃toconstantmass.4.1Ammoniumchloride:NH.Cl:
Ethanol.C,H.OH.
Sodiumhydroxide:NaOH
Trisodium citratedehydrate:Na,C.H.O,2H,04.5
Sodiumsalicylate:NaC,HO3
Sodiumdichloroisocyanuratedehydrate(sodium1,3-dichlorohexahydro-1,3,5-triazine-2,4,6-trione):NaCCl2N,032H,0
Sodiumnitroprussidedihydratesodiumnitrosopentacyanoferrate(l)J:Na,[Fe(CN),No]2H,O4.7
Polyethyleneglycoldodecylether(Brij35,CseHiisO2a）4.8
912%（V/V)ethanol:120mLofethanol(4.2)dilutedto1000mL4.1030%Brij35:dissolve30.0gofBrij35(4.8)in100mLwater.9
SN/T4675.23—2016
Sodium hydroxide solution:dissolve 200.0gof sodium hydroxide(4.3)in water,and makeupto100mLwithwater.
4.12Buffer solution:in a 1000 mL graduated flask,dissolve 40.0 g of trisodium citrate dehydrate(4.4)and1mLof30%Brij35(4.10)inwaterandmakeuptovolumewithwater4.13S
Sodium salicylate solution:in a1000mL graduatedflask,dissolve34.0g of sodium salicylate(4.5),0.4gof sodiumnitroprussidedehydrate(4.7)and1mL30%Brij35(4.10)withwater,andmakeuptovolumewithwater
4.14Sodiumdichloroisocyanuratedehydrate solution:in a1000mL graduated flask,dissolve2.0 gsodium dichloroisocyanurate dehydrate(4.6)and50 mL sodium hydroxide solution(4.11)with waterandmakeuptovolumewithwater.
4.15Ammoniumstocksolution:p(N)=1000mg/L,ina1000mLgraduatedflask,dissolve3.819gammonium chloride (4.1) in water and make up to volume. Or, buy directly the standard solutionwithcertificate
4.16Ammonium standard solution:Forwine with8%~15% ethanol content:add10 mLof stocksolution (4.15) to about 80 mL of 12% ethanol,Dilute to 100 mL and mix thoroughly.For wine withethanol content out of rangeof 8%~15%:Dilutethe stock solution(4.15)withthe ethanol solutionsame to the wine.Dilute to 100 mL and mix thoroughly.For grape juice, add 10 mL of stock solution(4.15)toabout80mLofwater.Diluteto100mLandmixthoroughly.4.17
Membranefilter:0.45μm.hydrophilic.5Apparatus
Analyticalbalance:sensitivityat0.1mg5.2
Equipment,Flow injection systemwith dialysis.3Graduatedflasks：100mL，200mLand1000mL5.3
5.4Graduatedpipettes：100uL~1000μL,500μL~5000μ10
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