SN/T 4624.5-2016.Methods for examination of import microbial blends in the environmental protection-Part 5:β Stre ptococcus hemolyticus.
1范围
SN/T 4624.5规定了人境环保用微生物菌剂卫生学检验β型溶血性链球菌的形态学鉴定、生化鉴定。
SN/T 4624.5适用于人境环保用微生物菌剂卫生学检验β型溶血性链球菌的检测和鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3主要试剂和培养基.
3.1 实验用水:应符合GB/T 6682中一级水的规格。
3.2生理盐水:见附录 A中A.1。
3.3 改良胰蛋白胨大豆肉汤培养基(mTSB):见A.2。
3.4 哥伦比亚CNA血琼脂:见A.3。
3.5 哥伦比亚血琼脂:见A.4。
3.6 草酸钾血浆:见A.5.
4主要仪器和设备
4.1电子天平:感量0.01 g。
4.2恒温培养箱:36℃±1℃。
4.3厌氧培养装置。
4.4 高压灭菌锅。
4.5无菌培养 皿:直径90 mm。
4.6 水浴装置:36 °C±1℃。
4.7微生物生化鉴定 系统。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4624.5—2016
入境环保用微生物菌剂检测方法第5部分：β型溶血性链球菌
Methods for examination of import microbial blends in theenvironmental protectionPart 5:β Streptococcus hemolyticus2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
SN/T4624入境环保用微生物菌剂检测方法》共分为17部分：第1部分：地衣芽孢杆菌；
第2部分：短小芽孢杆菌；
第3部分：巨大芽孢杆菌；www.bzxz.net
-第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌；第5部分：β型溶血性链球菌；
第6部分：金黄色葡萄球菌；
第7部分：沙门氏菌；
第8部分：志贺氏菌；
第9部分：致泻大肠埃希氏菌；
第10部分：淡紫拟青霉；
第11部分：雅致小克银汉霉；
第12部分：哈茨木霉；
第13部分：黄孢原毛平革菌；
第14部分：焦曲；
第15部分：解淀粉芽孢杆菌：
第16部分：类产碱假单胞菌；
第17部分：恶臭假单胞菌。
本部分为SN/T4624的第5部分。
本部分按照GB/T11—-2009给出的规则起草本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本部分主要起草人：李成铺、崔妍、赵颖、蒋施、张明、雷佳、王芳SN/T4624.5—2016
1范围
入境环保用微生物菌剂检测方法第5部分：β型溶血性链球菌
SN/T4624.52016
SN/T4624的本部分规定了入境环保用微生物菌剂卫生学检验β型溶血性链球菌的形态学鉴定生化鉴定。
本部分适用于人境环保用微生物菌剂卫生学检验β型溶血性链球菌的检测和鉴定。2
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。2分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682
主要试剂和培养基
实验用水：应符合GB/T6682中一级水的规格生理盐水：见附录A中A.1。
改良胰蛋白陈大豆肉汤培养基（mTSB）：见A.2。哥伦比亚CNA血琼脂：见A.3。
哥伦比亚血琼脂：见A.4。
草酸钾血浆：见A.5。
0.25%氯化钙（CaCl）溶液：见A.6。3%过氧化氢（H2O2）溶液：见A.7。生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡。主要仪器和设备
电子天平：感量0.01g。
恒温培养箱：36℃±1℃。
厌氧培养装置。
高压灭菌锅。
无菌培养血：直径90mm。
水浴装置：36℃±1℃。
微生物生化鉴定系统。
样品制备
以无菌操作取1g（mL）样品加人到100mL生理盐水中混勾，从中移取25mL加人到225mL灭1
SN/T4624.5-—2016
菌生理盐水中混勾。取样过程中，在样品旁边放置1个营养琼脂平板作为空白对照。6
形态学及生化鉴定
6.1增菌
从上述样品勾液中取25mL加人到盛有225mLmTSB的均质袋中混匀，于36℃士1℃培养18h24h。
6.2分离培养
将增菌液划线接种于哥伦比业CNA血琼脂平板36℃形态。
庆氧培养18h24h观察菌落
溶血链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2mm~3mm，灰白色、半透明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血6.3革兰氏染色
将6.2中平板上的菌落做涂片进行革兰氏染色，镜检β型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，呈球形或卵圆形，常排列成短链状。6.4生化鉴定法
6.4.1触酶试验
挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β3型溶血性链球菌触酶为阴性。
：6.4.2链激酶试验（选做项目）吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL可疑菌的TSB培养液0.5ml.及
灭菌生理盐水，混勾.再加人经36℃士1℃培养18h~24h的匀，置于36℃1℃水浴中
氯化钙溶液0.25mL，振荡提
10min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动）。继续36℃士1℃培养24h，凝固块重新完全溶解为阳性，不溶解即为阴性型溶血性链球菌为阳性。6.4.3其他试验
使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定7
结果报告
综合以上溶血性链球菌的形态学、生理生化试验的结果，报告1g（mL）样品中检出（或未检出）溶血性链球菌。
-TTKAONKAca
A.1生理盐水
A.1.1成分
氯化钠
蒸馏水
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
1000ml
称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压火菌15mln。A.2
改良胰蛋白陈大豆肉汤培养基（mTSB）A.2.1
基础培养基（胰蛋白陈大豆肉汤TSB）A.2.1.1
胰蛋白陈
大豆蛋白陈
氯化钠
磷酸氢二钾（无水）
葡萄糖
蒸馏水
2制法
1000ml
SN/T4624.5—2016
将A.2.1.1中各成分溶于蒸馏水，加热溶解，校正pH至7.3土0.2.121灭菌15min，备用。
抗生素溶液
多黏菌素溶液
称取10mg多黏菌素B于10mL灭菌蒸馏水中，振摇混，充分溶解后过滤除菌。A.2.2.2
萘啶酮酸钠溶液
称取10mg萘啶酮酸于10ml0.05mol/L氢氧化钠溶液中，振摇混匀，充分溶解后过滤除菌。A.2.3完全培养基
胰蛋白陈大豆肉汤（TSB)
多粘菌素溶液
萘啶酮酸钠溶液
1000mL
-TKAOiKAca
SN/T4624.5—2016
无菌条件下，将A.2.3.1中各成分进行混合，充分混匀，分装备用。A.3
哥伦比亚CNA血琼脂
A.3.1成分
胰酪蛋白陈
动物组织蛋白消化液
酵母提取物
牛肉提取物
玉米淀粉
氯化钠
多粘菌素
萘啶酸
蒸馏水
A.3.2制法
1000mL
将A.3.1中各成分溶于蒸馏水，加热溶解，校正pH至7.3土0.2.121℃灭菌12min，待冷却至约50℃时加50mL，无菌脱纤维羊血，摇匀后倒平板。哥伦比亚血琼脂
基础培养基
动物组织酶解物
氯化钠
蒸馏水
8.0g~18.0g
1000mL
将基础培养基成分溶解于蒸馏水中，加热促其溶解。121℃高压灭菌15min。无菌脱纤维绵羊血
无菌条件下，将绵羊血加人到盛有灭菌玻璃珠的容器中，振摇约10min，静置后除去附有血纤维的玻璃珠即可。
A.4.3完全培养基
基础培养基
1000mL
KAONIKAca
无菌脱纤维绵羊血
A.4.3.2制法
SN/T4624.5-—2016
当基础培养基的温度为45℃左右时，无菌加人绵阳血，混匀。校正pH至7.2士0.2。倾注15mI于无菌平血中，静置至培养基凝固。使用前需预先干燥平板。预先制备的平板未干燥时在室温放置不得超过4h，或在4℃冷藏不得超过7d。草酸钾血浆
A.5.1成分
草酸钾
2制法
草酸钾0.01g放入灭菌小试管中，再加入5mL人血，混勾，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾血浆。
0.25%氯化钙（CaCl2）溶液
A.6.1成分
氯化钙（无水）
蒸馏水
称取22.2g氯化钙（无水）溶于蒸馏水中，分装备用。A.73%过氧化氢（H,02)溶液
A.7.1成分
30%过氧化氢（H,O2）溶液
蒸馏水
2制法
1000ml
吸取100mL30%过氧化氢（Hz0，）溶液，溶于蒸水中，混勾，分装备用。5
-KAONiKAca
SN/T4624.5-2016
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
入境环保用微生物菌剂检测方法第5部分：β型溶血性链球菌
SN/T 4624.5—2016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045)总编室：(010）68533533
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中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*
开本880×12301/16
2017年12月第版
印张0.75
字数14千字
2017年12月第一次印刷
印数1500
书号：155066：2-32343
定价16.00元
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