SN/T 4540.1-2016.Commercial kit method-Malachite green-Test method I.
1范围
SN/T 4540.1规定了虾组织中孔雀石绿，隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫残留的胶体金免疫层析检测方法。
SN/T 4540.1适用于采用胶体金免疫层析试纸条对虾组织中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫残留进行筛选检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T 2775商 品化食品检测试剂盒评价方法
3原理
应用胶体金竞争抑制免疫层析法的原理,样品中残留的孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫与检测线上的孔雀石绿抗原共同竞争胶体金标记的特异性抗体,通过检测线与控制线颜色深浅比较,对样品中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫的含量定性判定。
4试剂与材料
4.1 孔雀石绿检测试剂盒
本试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会进行了评价,评价结果参见附录A.
商品化试纸条、反应杯及反应试剂在2℃~8℃干燥、避光条件下保存,产品有效期不得少于12个月。试剂盒组成如下:
a)孔雀石 绿检测试纸条;
b)白色微孔(主要 成分为牛血清白蛋白); .
c)红色微孔(主要成分为胶体金标记的孔雀石绿抗体);
d) 试剂A(主要成分为乙酸钠和对甲基苯磺酸);
e) 试剂B(主要成分为乙腈、二氯甲烷和冰乙酸);

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4540.1-2016
商品化试剂盒检测方法
孔雀石绿
方法—
Commercialkitmethod
Malachitegreen-TestmethodI
2016-06-28发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-02-01实施
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
商品化试剂盒检测方法
孔雀石绿方法一
SN/T4540.1—2016
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010）68533533
网址spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷善
开本880×12301/16
印张0.5
字数10千字
2017年3月第一次印刷
2017年3月第一版
印数1—1100
书号：155066·2-31181
定价14.00元
本部分为SN/T4540《商品化试剂盒检测方法孔雀石绿》的第1部分。
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T4540.1—2016
本部分主要起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、深圳市易瑞生物技术有限公司、中国检验检疫科学技术研究院、深圳市检验检疫科学研究院、合肥工业大学。本部分主要起草人：薛峰、封振、胡月珍、蒋原、蔡宝亮、付辉、陈伟、蒋鲁岩、余兵、薛强、易丙清。-HTiKAoNni KAca
HiiKAoNhiKAca
1范围
商品化试剂盒检测方法
孔雀石绿方法一
SN/T4540.12016
SN/T4540的本部分规定了虾组织中孔雀石绿，隐性孔雀石绿，结晶紫和隐性结晶紫残留的胶体金免疫层析检测方法。
本部分适用于采用胶体金免疫层析试纸条对虾组织中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫残留进行筛选检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法3原理
应用胶体金竞争抑制免疫层析法的原理，样品中残留的孔雀石绿、隐性孔雀石绿，结晶紫和隐性结晶紫与检测线上的孔雀石绿抗原共同竞争胶体金标记的特异性抗体，通过检测线与控制线颜色深浅比较，对样品中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫的含量定性判定。4试剂与材料
4.1孔雀石绿检测试剂盒
本试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会进行了评价，评价结果参见附录A。
商品化试纸条、反应杯及反应试剂在2℃～8℃、干燥、避光条件下保存，产品有效期不得少于12个月。试剂盒组成如下：
孔雀石绿检测试纸条；
白色微孔（主要成分为牛血清白蛋白）；c)
红色微孔（主要成分为胶体金标记的孔雀石绿抗体）；试剂A（主要成分为乙酸钠和对甲基苯磺酸）试剂B（主要成分为乙腈、二氯甲烷和冰乙酸）：试剂C(主要成分为中性氧化铝）；试剂D(主要成分为磷酸缓冲液）；h)
氧化试剂（主要成分为DDQ)。
4.2试剂
孔雀石绿，隐性孔雀石绿，结晶紫和隐性结晶紫对照品。I
iiiKAoNniKAca
SN/T4540.1—2016
b）正己烷。
5仪器设备与耗材
5.1移液器：200μL。
5.2移液器：10mL。
5.3氮吹仪或空气吹干仪。
5.4匀质器。
5.5涡旋震荡仪。
5.6离心机。
5.7滴管.5mL。
5.8离心管：50mL。
5.9离心管：15mL。
6样品制备
6.1将虾去皮取肉，用匀质器匀质样品至糊状。6.2称取5g士0.1g均质好的样品于干净的50mL离心管中，依次加人2mL提取试剂A和10mL提取试剂B,拧紧盖子充分震荡2min～4min。6.3将试剂C中粉末全部倒人6.2中.拧紧盖子并上下充分摇晃2Cs～30s，室温4000r/min离心5min：从中吸取5mL上清于干净的15mL离心管中.加人50pL氧化剂混匀，柠紧盖子上下颠倒混匀并室温放置1min2min；
6.4加人5mL正已烷，拧紧盖子上下充分颠倒混匀5次6次.室温放置3min；采用5mL滴管吸取3.5mL下层于5mL离心管中，65C氢吹仅或空气吹干仅吹干，注：加人正已烷颠倒混匀后，液体一般情况下会分为上下两层。但是偶尔6.3中样品离心后放置过久后脂肪会漂浮于上层·此情况下取上清样品加人正已烷后可能会形成三层·会出现底部的脂肪层：此时滴管插人下层吸取溶液时请尽量不要吸取底部脂防沉淀或脂肪层。6.5加人200μL样品复溶液，震荡15s～20s即为处理后的样品注：从试剂盒中取出白色微孔试剂.按照每孔加人200μL试剂D.混匀即为样品复溶液。7分析步骤
7.1吸取全部处理后的样品于微孔中，5次10次抽吸，迅速混合均匀并置于室温温育3min，7.2温育结束后，将试纸条插人到微孔中室温温育5min。7.3温育结束，停止计时，从微孔中取出测试条，去掉测试条下端的吸水海绵并进行结果判定。7.4检验完毕，余下的测试条密封好放到试剂盒中，2℃～8℃保存。8结果判定
通过对比控制带和检测带的颜色深浅来进行结果判定。由于长时间放置会引起检测带颜色的变化，需在5min内进行结果判定。目视结果判定依据（如图1所示）：a）无效：控制线(C线）不显色。2
iiiKAoNnikAca
SN/T4540.1—2016
b）阴性：检测线（T线）颜色比控制线（C线）深或者强或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当。
阳性：检测线（T线）不显色，或检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色浅或者弱。吸水纸
控制线
海绵端
试纸条示意图www.bzxz.net
9方法性能指标
9.1检出限
孔雀石绿检测线
空白试纸
目视判定示意图
孔雀石绿：2μg/kg；隐性孔雀石绿：2μg/kg；结晶紫：2μg/kg；隐性结晶紫：2μg/kg。9.2特异性
当浓度<100mg/kg时，磺胺类、硝基呋哺类、β-内酰胺类、四环素类、氯霉素和硝基呋哺类均无交叉反应。
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SN/T4540.1—2016
A.1检出限
附录A
（资料性附录）
孔雀石绿快速检测试纸条评价结果\孔雀石绿：2pg/kg：隐性孔雀石绿：2μg/kg；结晶紫：2μg/kg；隐性结晶紫：2μg/kg。A.2特异性
当浓度≤100mg/kg时，磺胺类、硝基呋喃类、β-内酰胺类、四环素类、氯霉素和硝基呋喃类均无交叉反应。
1）本试剂盒评价结果仅适用于深圳市易瑞生物技术有限公司生产的孔雀石绿快速检测试纸条。书号：155066·2-31181
SN/T4540.1-2016
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