ICS 01.040.65
CCS B 16
DB34
安徽省地方标准
DB34/T 4198—2022

梨黑斑病菌的LAMP检测方法
Detection of Alternaria species involved in pear black spot using LAMP

2022-06-29 发布
2022-07-29 实施
安徽省市场监督管理局 发布

前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。
本文件由安徽省农业农村厅归口。
本文件起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、巢湖市农机管理中心、安徽省农业科学院园艺研究所、怀远县农业技术推广中心。
本文件主要起草人：杨雪、谷春艳、潘锐、翟承勋、徐会永、吴昱、戚仁德、高正辉、齐永杰、王同岁。

1 范围
本文件规定了梨黑斑病菌的LAMP检测方法。
本文件适用于梨黑斑病菌检测的组织和人员。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
梨黑斑病 pear black spot
由链格孢类（Alternaria spp.）真菌引起的一种重要病害，已报道病原菌主要包括Alternaria gaisen K. Nagan、A. alternata (Fr.) Keissler、A. tenuissima (Fr.) Wiltsh、A. infectoria、A. yaliinficiens R.G. Roberts 和 A. ventricosa R.G. Roberts。

4 原理
根据梨黑斑病病原菌的ctb序列设计的特异性引物进行LAMP（Loop-mediated isothermal amplification，环介导等温扩增技术）检测作为判断梨黑斑病菌的依据。

5 仪器设备
5.1 高速离心机：转速 ≤ 15000 r/min
5.2 涡旋振荡器
5.3 恒温金属浴
5.4 光照培养箱：20℃~30℃
5.5 超低温冰箱：-80℃
5.6 电泳仪
5.7 凝胶成像仪
5.8 可调移液器：1~10 μL，10~100 μL，100~1000 μL

6 试剂和培养基