本文件描述了饲料中泰拉霉素的液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中泰拉霉素的测定。 本文件的检出限为10.0 μg/kg，定量限为20.0 μg/kg。

ICS65.120
CCSB 46
中华人民共和国国家标准
GB/T43714—2024
饲料中泰拉霉素的测定
液相色谱-串联质谱法，
Determination of tulathromycin in feeds-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry2024-03-15发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2024-10-01 实施
GB/T43714—2024
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承扭识别专利的责任。本文件由余国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本文件起草单位：浙江正明检测有限公司、宁波市农产品质量检测中心。本文件主要起草人：吴银良、付岩、徐峰、朱勇、马艳、应永飞、王全胜、吴市学、黄玲、史西志。1范围
饲料中泰拉霉素的测定
液相色谱一串联质谱法
本文件描述了饲料中泰拉霉素的液相色谱一联质谐测定方法GB/T43714—2024
本文件适用于配合饲料、浓缩铜啊、精料补充料和添加剂预混合饲料中泰拉霉素的测定。本文件的检出限为10.0g/kg，定最限为20.0μg/kg。2规范性引用文件
下列文件中的内省通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。具中，日期的引用文件，仅该日期又应的表本道用于天文作，不江且期的要用义件，真最新版术（包括所有的修单)适用于本文件
6682分析实验用水规格和育方流GB/T2019
3术语和定义
动物饲料零武能的制备
本文件没有需要界定的
4原理
试样中的泰我霉素（泰拉霉素A和泰拉霉素B）用甲酸甲醇溶液提取，经固相萃顺柱净化后，用液相色谱-串联质谱仪测定，泰拉霉素A和泰拉霉素B响应一致。以泰拉霉素人为标难品，基质匹配标准溶液校准，外标法定量。
5试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。5.1水：GB/T6682,
2甲酸：色谱纯
5.3甲醇：色谱纯。
5.4乙腈：色谱纯。
一级。
5.5甲酸甲醇溶液（0.25%，体积分数）：移取2.5mL甲酸（5.2），用甲醇（5.3）稀释至1000mL，混匀。5.6甲酸溶液（0.1%，体积分数）：移取1mL甲酸（5.2），用水稀释至1000mL，混匀，5.7甲醇-甲酸溶液：移取90mL0.1%甲酸溶液（5.6)和10mL甲醇（5.3），混匀。5.8标准储备溶液（1mg/mL)：称取泰拉霉素A（CAS:217500-96-4，纯度不低于97.0%）10mg（精确
至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲醇（5.3）溶解并定容，混匀。-18℃以下保存，有效期6个月。5.9标准中间溶液（10μg/mL)：准确移取1mL标准储备溶液（5.8）于100mL容量瓶中，用甲醇（5.3）GB/T43714—2024
稀释定容，混匀。-18℃以下保存，有效期2个月。5.10标准系列溶液：准确移取适量标准中间溶液(5.9)于容量瓶中，分别用甲醇-甲酸溶液(5.7)稀释定容，混匀，配制成质量浓度分别为0.5ng/mL、1ng/mL、2.5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL和50ng/ml的标准系列溶液。临用现配。
5.11增强型脂肪去除固相萃取柱：300mg/3mL，或相当者。5.12微孔滤膜：0.22μm,有机系。6仪器设备
液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。6.1
分析天平：精度为0.01mg和0.01g。6.2
6.3离心机：转速不低于9000r/min。6.4振荡器：转速不低于300r/min。6.5涡旋混合仪。
6.6固相萃取装置。
6.7氮吹仪。
7样品
按GB/T20195制备样品，至少200g，粉碎使其全部通过0.425mm孔径的试验筛，充分混匀，装入磨口瓶中，备用。选取类型相同、均匀一致，且在待测物保留时间处，仪器响应值小于方法定量限30%的饲料样品，作为空白样品。
8试验步骤
8.1提取
平行做2份试验。称取试样2.5g（精确至0.01g）于50mL，离心管中，准确加入20mL甲酸甲醇溶液（5.5），300r/min振荡提取15min,9000r/min离心3min，移取上清液于另一离心管中。重复提取1次，合并上清液，混匀，备用。8.2净化
准确移取2mL备用液（8.1)过周相萃取柱（5.11），用1mL甲醇（5.3)洗脱，收集过柱液和洗脱液于50℃氮气吹干，准确加入2mL.甲醇-甲酸溶液（5.7）溶解残渣，涡旋混匀，微孔滤膜（5.12）过滤，待测。8.3基质匹配标准系列溶液的制备称取空白试样，按照8.1和8.2操作至“50℃氮气吹干”后，分别准确移取2ml.标准系列溶液(5.10)溶解残渣，配制成质最浓度分别为0.5ng/mL、1ng/mL、2.5ng/mL、10ng/mL、25ng/ml.和50ng/ml.的基质匹配标准系列溶液。临用现配。8.4测定
8.4.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：Cs柱，柱长50mm，内径2.1mm，粒度1.7um，或性能相当者；柱温：35℃；
进样量：5μl;
流速：0.3mL/min;
流动相：A相为甲酸溶液（5.6)，B相为甲醇（5.3)，梯度洗脱程序见表1。e
梯度洗脱程序
质谱参考条件
质谱参考条件如下：
电离方式：电喷雾电离，正离子模式(ESI+);a)
检测方式：多反应监测(MRM);
毛细管电压：3.0kV;
离子源温度：150℃；
脱溶剂温度：500℃；
脱溶剂气：氮气1000L/h。
多反应监测(MRM）离子对、锥孔电压及碰撞能量见表2。GB/T43714—2024
表2待测物的多反应监测(MRM）离子对、锥孔电压及碰撞能量参考值待测物名称
泰拉霉素A
“为定量离子对。
监测离子对
806. 8>158. 2免费标准下载网bzxz
806.8>577.6°
基质匹配标准系列溶液和试样溶液测定锥孔电压
碰撞能量
在仪器的最佳条件下，分别取基质匹配标准系列溶液（8.3)和试样溶液（8.2）上机测定。基质匹配标准溶液的定量离子对色谱图见附录A。3
GB/T43714—2024
8.4.4定性
在相同试验条件下，试样溶液与基质匹配标准系列溶液中泰拉霉素A的保留时间一致，其相对偏差在土2.5%之内。根据表2选择的定性离子对，比较试样谱图中泰拉霉素A定性离子对的相对离子丰度与质量浓度接近的基质匹配标准溶液中对应的定性离子对的相对离子丰度，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在泰拉霉素。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
最大允许偏差
8.4.5定量
20～50
>10~2(
以基质度配标准溶液中泰拉霉素A质量浓度为横坐标，定量离子对色谱略面积为纵坐标，绘制标准曲线，其厢关素数应呆低于099、武环溶液业东按保态导见质匹配标准准液中卷拉看素A的响应值流通足。单表按作是量时，最样清液中泰拉霉素均应在仪熟检测的线性范四的，如超田级范确，质量浓度与基质匹配标准资液项正液度相差的路过”9试验数据处理
试程中泰立霉素的含部取质最分数u算；单点概准接公式(2)计篮
式中：
式中：
值以微究每工克
中表委。多康校准按公式(1)计
电基质临配标准曲线得到的试样溶液中泰拉霉素A的所重浓用，单位为纳克每毫升(ngmL);
提取启提取液总体积，单位为毫升(mL);试样的最终定容体积，单位为电师净化用试样提取液体概单位为毫升(mL试样质量，单位为克(g)；
换算系数。
AXp.XV,XVXI000
A. × V. X w X1 000
试样溶液中泰拉霉素的峰面积；基质匹配标准溶液中泰拉霉素A的峰面积；基质匹配标准溶液中泰拉霉素A的质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);提取后提取液总体积，单位为毫升(mL);试样的最终定容体积，单位为毫升(mL);净化用试样提取液体积，单位为毫升(mL);. (2)
——试样质量，单位为克(g);
1000——换算系数。
测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。10精密度
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在重复性条件下，2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的15%5
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附录A
(资料性)
基质匹配标准溶液定量离子色谱图基质匹配标准溶液定量离子色谱图见图A.1。100-
标引序号说明：
泰拉霉素 A。
基质匹配标准溶液(1.0ng/mL)定量离子色谱图图A.1：
43714-2024
中华人民共和国
国家标准
饲料中泰拉霉素的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T437142024
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2024年3月第一版
5字数12千字
印张0.75
2024年3月第一次印刷
书号：155066·1-75425定价29.00元如有印装差错
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