GB 31610.2-2023
基本信息
标准号： GB 31610.2-2023
中文名称：食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中异尖线虫的检验
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
发布日期：2023-09-06
实施日期：2024-03-06
出版语种：简体中文
下载格式：.pdf .zip
下载大小：2837614
标准分类号
中标分类号：食品>>食品综合>>X09卫生、安全、劳动保护
关联标准
出版信息
出版社：中国标准出版社
页数：16页
标准价格：31.0
相关单位信息
发布部门：国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局
标准简介
本标准规定了动物性水产品及其制品中异尖线虫幼虫的形态学和PCR检验方法。
本标准适用于动物性水产品及其制品中异尖线虫幼虫的检验。
标准图片预览
标准内容
中华人民共和国国家标准
GB31610.2—2023
食品安全国家标准
动物性水产品及其制品中异尖线虫的检验2023-09-06发布
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
2024-03-06实施
1范围
食品安全国家标准
动物性水产品及其制品中异尖线虫的检验GB31610.2—2023
本标准规定了动物性水产品及其制品中异尖线虫（Anisakidae)幼虫的形态学和PCR检验方法。本标准适用于动物性水产品及其制品中异尖线虫幼虫的检验。原理
动物性水产品及其制品中的异尖线虫幼虫主要寄生于海洋鱼类、甲壳类、软体类动物的肌肉和脏器表面等组织内。解副分离或用胃蛋白酶消化动物性水产品及其制品的肌肉或脏器等组织获得虫体，根据幼虫的形态特征，判断异尖线虫科幼虫。对可疑虫体通过扩增异尖线虫核糖体DNA内转录间隔区(ITS)基因片段并测序，进行常见异尖线虫幼虫的鉴定。3
仪器和设备
3.1生物显微镜：100×～400×。3.2体视显微镜：7.5×150×。
3.3PCR扩增仪。
凝胶成像系统。
5电泳仪。
恒温培养箱：37℃土1℃。
高速离心机：转速≥12000r/min网筛：孔径2mm（10目）。
锥形量杯：1000mL。
微量移液器：0.2μL~2.5μL、1μL~10μL、10L100μL、100μL~1000μL试剂和材料
盐酸：36%~38%HCI溶液。
生理盐水：0.85%NaCI溶液。
1mol/LTris-HCI溶液（pH8.0)。0.5mol/LEDTA溶液（pH8.0）。
10%SDS溶液。
5mol/LNaCI溶液。
3000U/mg胃蛋白酶。
20mg/mL蛋白酶K。
GB31610.2—2023
4.1.9苯酚/三氯甲烷/异戊醇（25：24：1)。5U/uL耐热DNA聚合酶
10XPCR缓冲液。
25mmol/LMgCl2。
dNTPs：dATP、dTTP、dCTP、dGTP，每种浓度为2.5mmol/L。琼脂糖：电泳级。
50XTAE缓冲液：使用前用去离子水稀释成1XTAE缓冲液1XTE溶液（pH8.0）。
10mg/mL溴化乙锭（EB)或其他核酸染料。6×上样缓冲液。
100bp~2000bpDNA分子量标准
PCR引物：浓度为20μmol/L。
正向引物NC5：5'-GTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATT-3反向引I物NC2：5-TTAGTTTCTTTTCCTCCGCT-3扩增异尖线虫ITS基因片段长度为800bp~1100bp4.2试剂配制
4.2.1生理盐水：称取8.5gNaCl溶解于900mL去离子水，再加去离子水至1000mL。4.2.21mol/LTris-HCl溶液：称取121.1gTris（三羟甲基氨基甲烷）溶解于800mL去离子水，用盐酸调节pH至8.0，加去离子水至1000mL。4.2.30.5mol/LEDTA溶液：称取186.1gNaEDTA·2H,O（二水合乙二胺四乙酸二钠）溶解于800mL去离子水，搅拌溶解，用NaOH调节pH至8.0，加去离子水至1000mL。4.2.45mol/LNaCl溶液：称取292.5gNaCl溶解于900mL去离子水，再加水至1000mL。4.2.5胃蛋白酶消化液：取胃蛋白酶5g，溶解于900mL生理盐水中，加盐酸7mL，混勾，再加生理盐水至1000mL，临用现配。
4.2.6裂解液：10%SDS溶液100mL、1mol/LTris-HCI溶液10mL、0.5mol/LEDTA溶液200mL、5mol/LNaCl溶液20mL，加灭菌去离子水至1000mL。4.2.71.5%琼脂糖凝胶：琼脂糖1.5g，加1×TAE缓冲液至100mL，加热至完全融化后冷却至60℃～70℃，加入10mg/mL溴化乙锭5μL，混匀，制备凝胶。5检测方法
形态学方法
5.1.1直接解剖观察法
5.1.1.1样品制备
取动物性水产品或其制品，剖解，肉眼或体视显微镜观察腹腔、消化道、肠系膜、肝、生殖腺等器官及肌肉等组织。动物性水产品及其制品中的异尖线虫为第三期幼虫，虫体多以包囊形式寄生于宿主体内：包囊往往是一种圆形或长形套，紧包住虫体，若发现黄白色，无色微透明或乳白色的虫体或包囊，用镊子轻轻取出虫体或从包囊内分离出虫体，将虫体置于加有生理盐水的培养皿中，清除虫体周围杂物。5.1.1.2镜检
用生物显微镜观察分离到的虫体形态，异尖线虫第三期幼虫的虫体呈黄白色、乳白色或无色微透2
GB31610.2—2023
明，外形皇长纺锤形，体长10mm～30mm不等，头端较尾端尖细，头部有唇块，在腹侧有一明显的钻齿，中肠部体宽为430um~550um，无侧翼；活虫肉眼可见距头端2mm~3mm处有一个1mm的白点，即为长形小胃，显微镜下观察呈深色不透明，异尖线虫第三期幼虫模式图见图A.1，实物图见图A.2～图A.10。具备以上特征的虫体，可判定为异尖线虫科幼虫。对疑似异尖线虫科幼虫虫体立即用于DNA提取或一20℃保存备用
注：如直接解剖观察法未检出异尖线虫科幼虫，则需用蛋白酶消化法进行检测。5.1.2胃蛋白酶消化法
5.1.2.1取样
如果用直接解剖法未检出异尖线虫科幼虫，需采集动物性水产品或其制品的肌肉或脏器等组织用剪刀剪成小块。
5.1.2.2消化
取处理好的样品200g，按照样品与胃蛋白酶消化液1：5的质量体积比加入消化液混匀，于37℃士1℃恒温培养箱放置4h～16h，使肌肉或脏器等组织完全消化，可根据不同水产品种类以及消化时间对胃蛋白酶浓度和使用量进行调整。5.1.2.3过滤
消化后的悬液用网筛过滤，并用生理盐水冲洗网筛上的残留物，用肉眼或放大镜观察残留物是否附着可疑虫体。收集滤液置于锥形量杯内，搅拌后沉淀15min~30min。轻轻倾去上清液，加人适量生理盐水，搅拌后再沉淀15min~30min。重复洗涤3次~5次，直至上清液透明为止，沉淀备用。5.1.2.4镜检
全部沉淀物分次转移至玻璃平皿，在体视显微镜下去除沉淀中的杂质，分离收集疑似虫体，用生物显微镜观察分离到的虫体形态。具备5.1.1.2特征的虫体，可判定为异尖线虫科幼虫。对疑似异尖线虫科幼虫虫体立即用于DNA提取或一20℃保存备用。5.2PCR方法
5.2.1DNA提取
取5.1.1.2或5.1.2.4判断为疑似异尖线虫科幼虫的虫体，放入1.5mL离心管中，加人无菌生理盐水200uL，匀浆后加裂解液500uL、蛋白酶K10uL，混匀，55℃温浴至虫体被完全消化（1h～3h）。加入苯酚/三氯甲烧/异戊醇（25：24：1）500L，混匀，4℃12000r/min离心5min。吸取上清液加人等体积的三氯甲烷，混匀，4℃12000r/min离心5min。吸取上清液加人0.8倍体积的异内醇，充分混，4℃12000r/min离心10min，弃上清。加入75%乙醇700uL冲洗沉淀，4℃12000r/min离心5min，弃上清液，干燥后加人50μL1XTE溶液溶解DNA，立即用于检测或一20℃保存备用。注：根据实验室实际情况，可使用经验证的商品化组织DNA提取试剂盒提取DNA。5.2.2PCR反应体系
在PCR管中依次加入10XPCR缓冲液5.0μL、MgCl，5.0μL、dNTPs2.0μL、正向引物和反向引物各1.0μL、耐热DNA聚合酶0.5μL、DNA模板2.5μL，加灭菌去离子水至总体积50uL。每次试验需设阳性和空白对照。阳性对照用异尖线虫DNA或含有目标基因序列的质控品，空白对照用灭菌去离子水做模板。
GB31610.2—2023
5.2.3PCR反应条件
95℃预变性4min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，进行35个循环；72℃延伸10min；4℃保存。
5.2.4电泳
取PCR扩增产物10L与6×上样缓冲液2L混合，加样于1.5%琼脂糖凝胶中，其中一孔加人DNA分子量标准，1XTAE电泳缓冲液，5V/cm恒压电泳30min～40min，用凝胶成像系统观察和记录结果。
5.2.5PCR结果判定
阳性对照出现预期大小的条带（800bp～1100bp），空白对照无条带，待测样品扩增出预期大小的条带，可判PCR结果为阳性；无扩增条带或未扩增出预期大小的条带均判为PCR结果阴性。取PCR结果为阳性的PCR产物进行基因序列双向测序，将测序结果与异尖线虫ITS参考序列（见附录B)进行同源性比对。
结果报告
6.1形态学方法检出异尖线虫科幼虫，报告检出异尖线虫幼虫。6.2形态学方法检出疑似异尖线虫科幼虫、PCR结果为阳性且扩增片段基因序列与任何一条异尖线虫参考序列同源性≥95%，报告检出异尖线虫幼虫3形态学方法未检出异尖线虫科幼虫、或PCR结果为阴性、或扩增片段基因序列与异尖线虫参考序6.3
列同源性均<95%，报告未检出异尖线虫幼虫。4
附录A
异尖线虫第三期幼虫形态
A.1异尖线虫第三期幼虫模式图见图A.1Ep
说明：
海豹线虫A型：
异尖线虫I型；
针蛔线虫：
钻齿（Boringtooth）；
排泄孔（Excretorypore)；
胃（Ventriculus）：
肠管（Intestine）：
尾棘（Mucron）。
GB31610.2—2023
食道肌（Oesophagealmuscle)：Nr
神经环（(Nervering)；
肠盲囊（Intestinalcecum）：
侧尾腺（Asidecaudalgland)：
图A.1异尖线虫第三期幼虫模式图（仿罗朝科，2005）GB31610.2-2023
A.2异尖线虫第三期幼虫实物图见图A.2~图A.10。图A.2鱼体内的
异尖线虫wwW.bzxz.Net
图A.5白色背景观察的
异尖线虫
图A.8不同显微镜视野下的
异尖线虫（45×）
图A.3不同形态的
异尖线虫
图A.6黑色背景观察的
异尖线虫
图A.9不同显微镜视野下的
异尖线虫（78.2×）
图A.4蓝色背景观察的
异尖线虫
图A.7透射光观察的
异尖线虫
图A.10紫外灯下观察的
异尖线虫
附录B
异尖线虫ITS参考序列
简单异尖线虫（Asimplexcomplex）参考序列，长度952bpB.1
GB31610.2—2023
TAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACGAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCTTCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCACATGGAAACTCGTACACACGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTTTTTAGGCAGACAATGGCTTACGAGTGGCCGTGTGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCAGTTGCGATGAAAGATGCGGAGAAAGTTCCTTTGTTTTGGCTGCTAATCATCATTGATGAGCAGTAGCTTAAGGCAGAGTTGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTAGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCGGTCTATTTGACATTGTTATTTCATTGTATGTGTTGAAAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTACGGTGAACTGTCTTCACGGTTTTTCTGGACTGTGAAGCATTCGGCAAGCAATTGCTGTTGTGTTGTTGGTGATTCTATCATGGACAATATGACGAGCGGTTCCTTGCTTAGTGATGACAAAAGAAGACGTCAACACCGAATCTACTATACTACTAATACTAGTATATAGGTGAGGTGCTTTTGGTGGTCACAAAAGTGACAAGTATGCCATTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACGTGATAAGTTGGCTGGTTGATGAAACGGCAACGGAATGACGGACGTCTATGNGATCAAAAATGATACTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAA
典型异尖线虫（A.typica）参考序列，长度955bpB.2
TAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTGTCGAGCGAATCCAAAACGAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCGCCCATTTACATGTTGTTGTGAGCCGCACGGAAACTCGTACACGTTTGTGGTGGTGATAGCCGTCTGCTGTGCGTTCGTTGGGCAGACAATGGCTTACGAGTGGCTGTGCGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCCTCCGCCTGGACCGTCGGTAGCGATGAAAGATGCGGAGGAAGTTCCTCGTCAGAGTTGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTCTAGGTGGCCGCCAGAACCCAAAACACACCAATTGTTGTCATTTGACATTGTTGATGATGTTTATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTGTGCTAGAGCATCTTTGCAATCACTTCTCTCAGATTGTGATTGTGAAGCATTCGGCGAGCGATTGTTGTCGTGTTGTTGCTTAAGGTGACGATTGAATCGGCACCGCGCGACACGACACGGTTCCTTGCTTAGTTTGATGAACAAAAAGACGTCCCGCACACCCAACGTCTGCTAAACACTAGACTAGAGCTGGTGTCTAGAGGTGTTGGGTGTGATTTTGATGGTCACAAAAGTGCCGCCATTTCATAGTGGCAACAACCAGCATACGTCTATGATACTAGTAGGTTGGCTGGTTGATGAAACGGCAACGGAATGTGCGCATGCATGTGATCGAGAAGCGATAATGTTCGTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAA
派式异尖线虫（A.pegreffii）参考序列，长度954bpGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACGAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCTTCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCACATGGAAACTCGTACACACGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTTTTTAGGCAGACAATGGCTTACGAGTGGCCGTGTGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATGB31610.2—2023
TTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCAGTTGCGATGAAAGATGCGGAGAAAGTTCCTTTGTTTTGGCTGCTAATCATCATTGATGAGCAGCAGCTTAAGGCAGAGTCGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTAGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCGGTCTATTTGACATTGTTATTTCATTGTATGTGTTGAAAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTACGGTGAACTGTCTTCACGGTTTTTCTGGACTGTGAAGCATTCGGCAAGCAATTGCTGTTGTGTTGTTGGTGATTCTATCATGGACAATATGACGAGOGGTTCCTTGCTTAGTGATGACAAAAGAAGACGTCAACACCGAATCTACTATACTACTAATACTAGTATATAGGTGAGGTGCTTTTGGTGGTCACAAAAGTGACAAGTATGCCATTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACGTGATAAGTTGGCTGGTTGATGAAACGGCAACGGAATGACGGACGTCTATGTGATCAAAAATGATACTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAAA
B.4小抹香鲸异尖线虫（A.paggiae）参考序列，长度921bpGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCATCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCGCATGGAAACTCATACACGCGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTTTCGTGCAGACAATGGCTTATGAGTGGCCGTGTGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCGGTAGCGATGAAAGATGCGGAGAGAGTTCCTCTGTTTTGGTTCATTCGTGGACCAACGCAGGGTCGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTTGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCAGTCTATTTGACATTGTTTCGTATGTGTTAACATTATGTTAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTATGGCAAACTATCTTCGCAGTTTCGGCTGTGAAGCATTCGGCGAGCAGTTGTTGTGTTGTTGGTCGTTCGTTCGTTCGTTCGATCGGTTGGCAACATGACGGCTCCTTGCTTAGTTGTTGTGAATAGACGTTAACACCGAACTATATGCGGTGATATTGGTGGTCGCAAAAGCGAGAAGTATGCCGCTTCATAGGGGCAACAACCAGCATGCGTGTATGACAAGTTGGCTGGTTGATGAACTGTTGGCAAAGGAGTGACGTGCGTGTAACGGTGCGATCAAGAACGTTTGTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAAAB.5
剑吻鲸异尖线虫（A，ziphidarum）参考序列，长度930bpTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACTAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCGTCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCGCATGGAAACTCGTACACATGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTTTTGTGCAGACAATGGCTTACGAGTGGCTGTGTGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCCGCCTGGACCGTCGGTTGCGATGAAAGATGCGGAGGAAGTTCCTTTGTGTTGGCTTATCATCATTGATCAGCTGATGCAGAGTCGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTAGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCGGTCTATTTGACATTGTTACTTTGTATGTGTTGAAAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTACGGTGAACTGTCTTCGCGGTTTTTAGTGACTGTGAAGCATTCGGCGAGCAATTGTTGCTGTGTTGTTGATGATTGAGTCGACAATATGGCACACGGTTCCTTGCTTAGTTATGAAGAGAAGAAGACGTCAACACCGAACCTACTATACTACTAGTACTAGTGTATAGGTGAGGTGCTTTTGGTGGTCACAAAAGTGAAAAGTATGCCATTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACATGATAAGTTGGCTGGTTGATGAAACGGCAACGGAATGATGTATGTGATCAAAAATGTTTATATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAAoo
抹香鲸异尖线虫（A.physeteris）参考序列，长度899bpB.6
GB31610.2—2023
TAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACAAGTCTCCCAACGTGCATACCGTCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCGCATGGAAACTCATACACATGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTATTGTGCAGACAATGGCTTATGAGTGGCCGTGTGCCTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCAGTAGCGATGAAAGATGCGGAGAAAGTTCCTCTGTTTTGACTCATTCGTGGGCCAACACAGGGTCGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTTGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCAGTCTATTTGACATTGTTCAGTATGCGTTGACATTACGTTAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCATTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCCATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTATGGCAAACTATCTTCGTGGCTCCGGCCGTGAAACATTCGGCAAGCAGTTGTCGTGTTGTTGGTTGGTCGGTCTTTGAATCGGTCGATTGGCGGCTCGACGGCTCCTTGCTTAGTTGTTGTGTGAGGAGACGTCAACACCGAACGACGGTGATATTGGTGATCGCAAAAGCGAAAAGTATGCCACTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACGTGTGTTGGCTGGTTGATGAACTGTTGGCAACGGAGTGACGGTGTGATCAGGAACGTTTGTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAA
娜氏异尖线虫（A，nascettii）参考序列，长度900bpCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACGAAAAAGTCTCCCAACATGCATACCGTCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCGCATGGAAACTCGTACACACATGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTTTTGTGCAGACAATGGCTTACGAGTAGCCGTGTGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCGGTAGCGATGAAAGATACGGAGGAAGTTCCATTGTTTTGGCTTATCATCATTGATAAGTTGAGGCAGTGTCGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTAGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCGGTCTAT
TTACTTTGTATGTGTTGAAAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTACGGTAAACTATGAGCAATTGTTGTTGTGTTG
ACAGCAAGAAGAAGACGTCAACACCTCAOTTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCATCTTAGTGAGTGTGAAGCATTCGGC
ATATGGCGCGTTTCCTCGCTTAGTTATGAATATAAGTGAGGTGCTTGTGATGGTCACAAGAATGACGTGTATGCCATTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACGTAATAAGTTGGCTGGTTGATGAAACGGCAACGGAATGATATACGTGTATGTGATCAAAAAAGTTTATATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAB.8
短棘异尖线虫（A.brevispiculata）参考序列，长度849bpCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACAAGTCTCCCAACGTGCATACCATCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCGCATGGAAACTCATACACATGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTATTGTGCAGACAATGGCTTATGAGTGGCCGTGTGCCTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGCATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCGGTAGCGATGAAAGATGCGGAGAAAGTTCCTCTGTTTTGGCTCGTTCTTCGAGACCAACTCAGGGTTGAGCAGACTTAATGAGCCGCGCTTGGCGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCAGTCTATTTGACATTGTTCAGTATGCGTTTGACATTATGTTAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCATTATGGCAAACTATCTTCGCGG
TCGGTCTCGGTCGGTCGATTGACAGCATGATGGCTCCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGACCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGA
TCGGCAAGCAGTTGCTATGTTGTTGGTCGGTGCTTAGTTGTTGTGTGAAGAGACGTTAACAC9
GB31610.2—2023
CGAACGGCGGTGATATTGGTGATCGCAAAAGCGAGAAGTATGCCACTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACGTATGTTGGCTGGTTGATGAACTGTTGGCAACGGAGTGACGGTGTGATCAGGAACGTTTGTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAA伪新地线虫（Pseudoterranova）参考序列，长度895bpB.9
CTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCATCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCACATAGAAACTCATACACGTGTGGTGGCAGCCGTCTGATGTGCTTTATCGTGCAGACAATGGCTTATGAGTGGCTGTGTGATTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCGGTAGCGATGAAAGATGCGGAGGAAGTTCCTCTGTTTTGGTACGCTAAAGCAGAGTTGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTTGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCAGTCTATTTTAACGTTTGTTGATATGTTAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTATAGTAAACTATCTTCGAGTACTTTTTATGGTCGTGAAGTATTCGGCAAGTAGTGCAGTCGGATTGTTTTTGTTGGTCGTCCGTTCGTTCGGTCGGTCAACAACAATATTCTGAGGCTCCTTGCTTAGTTGTGTTCTAGTAGACGTTAACACCTGAACAATATGTGGTGGTGATATTGGTGATGGCGAGAATCATGCCGCTTCAATGGGGCAGCAACCAGCATACGCTAATGACAGTTGGTTGATTGAAGCCAGGGCAACGGAGTGATGTACGTGTGGCGATCATTTAACGTTTATATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAA
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食品安全国家标准
动物性水产品及其制品中异尖线虫的检验2023-09-06发布
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1范围
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动物性水产品及其制品中异尖线虫的检验GB31610.2—2023
本标准规定了动物性水产品及其制品中异尖线虫（Anisakidae)幼虫的形态学和PCR检验方法。本标准适用于动物性水产品及其制品中异尖线虫幼虫的检验。原理
动物性水产品及其制品中的异尖线虫幼虫主要寄生于海洋鱼类、甲壳类、软体类动物的肌肉和脏器表面等组织内。解副分离或用胃蛋白酶消化动物性水产品及其制品的肌肉或脏器等组织获得虫体，根据幼虫的形态特征，判断异尖线虫科幼虫。对可疑虫体通过扩增异尖线虫核糖体DNA内转录间隔区(ITS)基因片段并测序，进行常见异尖线虫幼虫的鉴定。3
仪器和设备
3.1生物显微镜：100×～400×。3.2体视显微镜：7.5×150×。
3.3PCR扩增仪。
凝胶成像系统。
5电泳仪。
恒温培养箱：37℃土1℃。
高速离心机：转速≥12000r/min网筛：孔径2mm（10目）。
锥形量杯：1000mL。
微量移液器：0.2μL~2.5μL、1μL~10μL、10L100μL、100μL~1000μL试剂和材料
盐酸：36%~38%HCI溶液。
生理盐水：0.85%NaCI溶液。
1mol/LTris-HCI溶液（pH8.0)。0.5mol/LEDTA溶液（pH8.0）。
10%SDS溶液。
5mol/LNaCI溶液。
3000U/mg胃蛋白酶。
20mg/mL蛋白酶K。
GB31610.2—2023
4.1.9苯酚/三氯甲烷/异戊醇（25：24：1)。5U/uL耐热DNA聚合酶
10XPCR缓冲液。
25mmol/LMgCl2。
dNTPs：dATP、dTTP、dCTP、dGTP，每种浓度为2.5mmol/L。琼脂糖：电泳级。
50XTAE缓冲液：使用前用去离子水稀释成1XTAE缓冲液1XTE溶液（pH8.0）。
10mg/mL溴化乙锭（EB)或其他核酸染料。6×上样缓冲液。
100bp~2000bpDNA分子量标准
PCR引物：浓度为20μmol/L。
正向引物NC5：5'-GTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATT-3反向引I物NC2：5-TTAGTTTCTTTTCCTCCGCT-3扩增异尖线虫ITS基因片段长度为800bp~1100bp4.2试剂配制
4.2.1生理盐水：称取8.5gNaCl溶解于900mL去离子水，再加去离子水至1000mL。4.2.21mol/LTris-HCl溶液：称取121.1gTris（三羟甲基氨基甲烷）溶解于800mL去离子水，用盐酸调节pH至8.0，加去离子水至1000mL。4.2.30.5mol/LEDTA溶液：称取186.1gNaEDTA·2H,O（二水合乙二胺四乙酸二钠）溶解于800mL去离子水，搅拌溶解，用NaOH调节pH至8.0，加去离子水至1000mL。4.2.45mol/LNaCl溶液：称取292.5gNaCl溶解于900mL去离子水，再加水至1000mL。4.2.5胃蛋白酶消化液：取胃蛋白酶5g，溶解于900mL生理盐水中，加盐酸7mL，混勾，再加生理盐水至1000mL，临用现配。
4.2.6裂解液：10%SDS溶液100mL、1mol/LTris-HCI溶液10mL、0.5mol/LEDTA溶液200mL、5mol/LNaCl溶液20mL，加灭菌去离子水至1000mL。4.2.71.5%琼脂糖凝胶：琼脂糖1.5g，加1×TAE缓冲液至100mL，加热至完全融化后冷却至60℃～70℃，加入10mg/mL溴化乙锭5μL，混匀，制备凝胶。5检测方法
形态学方法
5.1.1直接解剖观察法
5.1.1.1样品制备
取动物性水产品或其制品，剖解，肉眼或体视显微镜观察腹腔、消化道、肠系膜、肝、生殖腺等器官及肌肉等组织。动物性水产品及其制品中的异尖线虫为第三期幼虫，虫体多以包囊形式寄生于宿主体内：包囊往往是一种圆形或长形套，紧包住虫体，若发现黄白色，无色微透明或乳白色的虫体或包囊，用镊子轻轻取出虫体或从包囊内分离出虫体，将虫体置于加有生理盐水的培养皿中，清除虫体周围杂物。5.1.1.2镜检
用生物显微镜观察分离到的虫体形态，异尖线虫第三期幼虫的虫体呈黄白色、乳白色或无色微透2
GB31610.2—2023
明，外形皇长纺锤形，体长10mm～30mm不等，头端较尾端尖细，头部有唇块，在腹侧有一明显的钻齿，中肠部体宽为430um~550um，无侧翼；活虫肉眼可见距头端2mm~3mm处有一个1mm的白点，即为长形小胃，显微镜下观察呈深色不透明，异尖线虫第三期幼虫模式图见图A.1，实物图见图A.2～图A.10。具备以上特征的虫体，可判定为异尖线虫科幼虫。对疑似异尖线虫科幼虫虫体立即用于DNA提取或一20℃保存备用
注：如直接解剖观察法未检出异尖线虫科幼虫，则需用蛋白酶消化法进行检测。5.1.2胃蛋白酶消化法
5.1.2.1取样
如果用直接解剖法未检出异尖线虫科幼虫，需采集动物性水产品或其制品的肌肉或脏器等组织用剪刀剪成小块。
5.1.2.2消化
取处理好的样品200g，按照样品与胃蛋白酶消化液1：5的质量体积比加入消化液混匀，于37℃士1℃恒温培养箱放置4h～16h，使肌肉或脏器等组织完全消化，可根据不同水产品种类以及消化时间对胃蛋白酶浓度和使用量进行调整。5.1.2.3过滤
消化后的悬液用网筛过滤，并用生理盐水冲洗网筛上的残留物，用肉眼或放大镜观察残留物是否附着可疑虫体。收集滤液置于锥形量杯内，搅拌后沉淀15min~30min。轻轻倾去上清液，加人适量生理盐水，搅拌后再沉淀15min~30min。重复洗涤3次~5次，直至上清液透明为止，沉淀备用。5.1.2.4镜检
全部沉淀物分次转移至玻璃平皿，在体视显微镜下去除沉淀中的杂质，分离收集疑似虫体，用生物显微镜观察分离到的虫体形态。具备5.1.1.2特征的虫体，可判定为异尖线虫科幼虫。对疑似异尖线虫科幼虫虫体立即用于DNA提取或一20℃保存备用。5.2PCR方法
5.2.1DNA提取
取5.1.1.2或5.1.2.4判断为疑似异尖线虫科幼虫的虫体，放入1.5mL离心管中，加人无菌生理盐水200uL，匀浆后加裂解液500uL、蛋白酶K10uL，混匀，55℃温浴至虫体被完全消化（1h～3h）。加入苯酚/三氯甲烧/异戊醇（25：24：1）500L，混匀，4℃12000r/min离心5min。吸取上清液加人等体积的三氯甲烷，混匀，4℃12000r/min离心5min。吸取上清液加人0.8倍体积的异内醇，充分混，4℃12000r/min离心10min，弃上清。加入75%乙醇700uL冲洗沉淀，4℃12000r/min离心5min，弃上清液，干燥后加人50μL1XTE溶液溶解DNA，立即用于检测或一20℃保存备用。注：根据实验室实际情况，可使用经验证的商品化组织DNA提取试剂盒提取DNA。5.2.2PCR反应体系
在PCR管中依次加入10XPCR缓冲液5.0μL、MgCl，5.0μL、dNTPs2.0μL、正向引物和反向引物各1.0μL、耐热DNA聚合酶0.5μL、DNA模板2.5μL，加灭菌去离子水至总体积50uL。每次试验需设阳性和空白对照。阳性对照用异尖线虫DNA或含有目标基因序列的质控品，空白对照用灭菌去离子水做模板。
GB31610.2—2023
5.2.3PCR反应条件
95℃预变性4min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，进行35个循环；72℃延伸10min；4℃保存。
5.2.4电泳
取PCR扩增产物10L与6×上样缓冲液2L混合，加样于1.5%琼脂糖凝胶中，其中一孔加人DNA分子量标准，1XTAE电泳缓冲液，5V/cm恒压电泳30min～40min，用凝胶成像系统观察和记录结果。
5.2.5PCR结果判定
阳性对照出现预期大小的条带（800bp～1100bp），空白对照无条带，待测样品扩增出预期大小的条带，可判PCR结果为阳性；无扩增条带或未扩增出预期大小的条带均判为PCR结果阴性。取PCR结果为阳性的PCR产物进行基因序列双向测序，将测序结果与异尖线虫ITS参考序列（见附录B)进行同源性比对。
结果报告
6.1形态学方法检出异尖线虫科幼虫，报告检出异尖线虫幼虫。6.2形态学方法检出疑似异尖线虫科幼虫、PCR结果为阳性且扩增片段基因序列与任何一条异尖线虫参考序列同源性≥95%，报告检出异尖线虫幼虫3形态学方法未检出异尖线虫科幼虫、或PCR结果为阴性、或扩增片段基因序列与异尖线虫参考序6.3
列同源性均<95%，报告未检出异尖线虫幼虫。4
附录A
异尖线虫第三期幼虫形态
A.1异尖线虫第三期幼虫模式图见图A.1Ep
说明：
海豹线虫A型：
异尖线虫I型；
针蛔线虫：
钻齿（Boringtooth）；
排泄孔（Excretorypore)；
胃（Ventriculus）：
肠管（Intestine）：
尾棘（Mucron）。
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食道肌（Oesophagealmuscle)：Nr
神经环（(Nervering)；
肠盲囊（Intestinalcecum）：
侧尾腺（Asidecaudalgland)：
图A.1异尖线虫第三期幼虫模式图（仿罗朝科，2005）GB31610.2-2023
A.2异尖线虫第三期幼虫实物图见图A.2~图A.10。图A.2鱼体内的
异尖线虫wwW.bzxz.Net
图A.5白色背景观察的
异尖线虫
图A.8不同显微镜视野下的
异尖线虫（45×）
图A.3不同形态的
异尖线虫
图A.6黑色背景观察的
异尖线虫
图A.9不同显微镜视野下的
异尖线虫（78.2×）
图A.4蓝色背景观察的
异尖线虫
图A.7透射光观察的
异尖线虫
图A.10紫外灯下观察的
异尖线虫
附录B
异尖线虫ITS参考序列
简单异尖线虫（Asimplexcomplex）参考序列，长度952bpB.1
GB31610.2—2023
TAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACGAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCTTCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCACATGGAAACTCGTACACACGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTTTTTAGGCAGACAATGGCTTACGAGTGGCCGTGTGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCAGTTGCGATGAAAGATGCGGAGAAAGTTCCTTTGTTTTGGCTGCTAATCATCATTGATGAGCAGTAGCTTAAGGCAGAGTTGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTAGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCGGTCTATTTGACATTGTTATTTCATTGTATGTGTTGAAAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTACGGTGAACTGTCTTCACGGTTTTTCTGGACTGTGAAGCATTCGGCAAGCAATTGCTGTTGTGTTGTTGGTGATTCTATCATGGACAATATGACGAGCGGTTCCTTGCTTAGTGATGACAAAAGAAGACGTCAACACCGAATCTACTATACTACTAATACTAGTATATAGGTGAGGTGCTTTTGGTGGTCACAAAAGTGACAAGTATGCCATTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACGTGATAAGTTGGCTGGTTGATGAAACGGCAACGGAATGACGGACGTCTATGNGATCAAAAATGATACTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAA
典型异尖线虫（A.typica）参考序列，长度955bpB.2
TAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTGTCGAGCGAATCCAAAACGAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCGCCCATTTACATGTTGTTGTGAGCCGCACGGAAACTCGTACACGTTTGTGGTGGTGATAGCCGTCTGCTGTGCGTTCGTTGGGCAGACAATGGCTTACGAGTGGCTGTGCGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCCTCCGCCTGGACCGTCGGTAGCGATGAAAGATGCGGAGGAAGTTCCTCGTCAGAGTTGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTCTAGGTGGCCGCCAGAACCCAAAACACACCAATTGTTGTCATTTGACATTGTTGATGATGTTTATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTGTGCTAGAGCATCTTTGCAATCACTTCTCTCAGATTGTGATTGTGAAGCATTCGGCGAGCGATTGTTGTCGTGTTGTTGCTTAAGGTGACGATTGAATCGGCACCGCGCGACACGACACGGTTCCTTGCTTAGTTTGATGAACAAAAAGACGTCCCGCACACCCAACGTCTGCTAAACACTAGACTAGAGCTGGTGTCTAGAGGTGTTGGGTGTGATTTTGATGGTCACAAAAGTGCCGCCATTTCATAGTGGCAACAACCAGCATACGTCTATGATACTAGTAGGTTGGCTGGTTGATGAAACGGCAACGGAATGTGCGCATGCATGTGATCGAGAAGCGATAATGTTCGTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAA
派式异尖线虫（A.pegreffii）参考序列，长度954bpGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACGAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCTTCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCACATGGAAACTCGTACACACGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTTTTTAGGCAGACAATGGCTTACGAGTGGCCGTGTGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATGB31610.2—2023
TTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCAGTTGCGATGAAAGATGCGGAGAAAGTTCCTTTGTTTTGGCTGCTAATCATCATTGATGAGCAGCAGCTTAAGGCAGAGTCGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTAGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCGGTCTATTTGACATTGTTATTTCATTGTATGTGTTGAAAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTACGGTGAACTGTCTTCACGGTTTTTCTGGACTGTGAAGCATTCGGCAAGCAATTGCTGTTGTGTTGTTGGTGATTCTATCATGGACAATATGACGAGOGGTTCCTTGCTTAGTGATGACAAAAGAAGACGTCAACACCGAATCTACTATACTACTAATACTAGTATATAGGTGAGGTGCTTTTGGTGGTCACAAAAGTGACAAGTATGCCATTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACGTGATAAGTTGGCTGGTTGATGAAACGGCAACGGAATGACGGACGTCTATGTGATCAAAAATGATACTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAAA
B.4小抹香鲸异尖线虫（A.paggiae）参考序列，长度921bpGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCATCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCGCATGGAAACTCATACACGCGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTTTCGTGCAGACAATGGCTTATGAGTGGCCGTGTGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCGGTAGCGATGAAAGATGCGGAGAGAGTTCCTCTGTTTTGGTTCATTCGTGGACCAACGCAGGGTCGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTTGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCAGTCTATTTGACATTGTTTCGTATGTGTTAACATTATGTTAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTATGGCAAACTATCTTCGCAGTTTCGGCTGTGAAGCATTCGGCGAGCAGTTGTTGTGTTGTTGGTCGTTCGTTCGTTCGTTCGATCGGTTGGCAACATGACGGCTCCTTGCTTAGTTGTTGTGAATAGACGTTAACACCGAACTATATGCGGTGATATTGGTGGTCGCAAAAGCGAGAAGTATGCCGCTTCATAGGGGCAACAACCAGCATGCGTGTATGACAAGTTGGCTGGTTGATGAACTGTTGGCAAAGGAGTGACGTGCGTGTAACGGTGCGATCAAGAACGTTTGTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAAAB.5
剑吻鲸异尖线虫（A，ziphidarum）参考序列，长度930bpTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACTAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCGTCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCGCATGGAAACTCGTACACATGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTTTTGTGCAGACAATGGCTTACGAGTGGCTGTGTGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCCGCCTGGACCGTCGGTTGCGATGAAAGATGCGGAGGAAGTTCCTTTGTGTTGGCTTATCATCATTGATCAGCTGATGCAGAGTCGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTAGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCGGTCTATTTGACATTGTTACTTTGTATGTGTTGAAAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTACGGTGAACTGTCTTCGCGGTTTTTAGTGACTGTGAAGCATTCGGCGAGCAATTGTTGCTGTGTTGTTGATGATTGAGTCGACAATATGGCACACGGTTCCTTGCTTAGTTATGAAGAGAAGAAGACGTCAACACCGAACCTACTATACTACTAGTACTAGTGTATAGGTGAGGTGCTTTTGGTGGTCACAAAAGTGAAAAGTATGCCATTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACATGATAAGTTGGCTGGTTGATGAAACGGCAACGGAATGATGTATGTGATCAAAAATGTTTATATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAAoo
抹香鲸异尖线虫（A.physeteris）参考序列，长度899bpB.6
GB31610.2—2023
TAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACAAGTCTCCCAACGTGCATACCGTCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCGCATGGAAACTCATACACATGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTATTGTGCAGACAATGGCTTATGAGTGGCCGTGTGCCTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCAGTAGCGATGAAAGATGCGGAGAAAGTTCCTCTGTTTTGACTCATTCGTGGGCCAACACAGGGTCGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTTGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCAGTCTATTTGACATTGTTCAGTATGCGTTGACATTACGTTAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCATTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCCATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTATGGCAAACTATCTTCGTGGCTCCGGCCGTGAAACATTCGGCAAGCAGTTGTCGTGTTGTTGGTTGGTCGGTCTTTGAATCGGTCGATTGGCGGCTCGACGGCTCCTTGCTTAGTTGTTGTGTGAGGAGACGTCAACACCGAACGACGGTGATATTGGTGATCGCAAAAGCGAAAAGTATGCCACTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACGTGTGTTGGCTGGTTGATGAACTGTTGGCAACGGAGTGACGGTGTGATCAGGAACGTTTGTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAA
娜氏异尖线虫（A，nascettii）参考序列，长度900bpCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACGAAAAAGTCTCCCAACATGCATACCGTCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCGCATGGAAACTCGTACACACATGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTTTTGTGCAGACAATGGCTTACGAGTAGCCGTGTGCTTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCGGTAGCGATGAAAGATACGGAGGAAGTTCCATTGTTTTGGCTTATCATCATTGATAAGTTGAGGCAGTGTCGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTAGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCGGTCTAT
TTACTTTGTATGTGTTGAAAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTACGGTAAACTATGAGCAATTGTTGTTGTGTTG
ACAGCAAGAAGAAGACGTCAACACCTCAOTTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCATCTTAGTGAGTGTGAAGCATTCGGC
ATATGGCGCGTTTCCTCGCTTAGTTATGAATATAAGTGAGGTGCTTGTGATGGTCACAAGAATGACGTGTATGCCATTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACGTAATAAGTTGGCTGGTTGATGAAACGGCAACGGAATGATATACGTGTATGTGATCAAAAAAGTTTATATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAB.8
短棘异尖线虫（A.brevispiculata）参考序列，长度849bpCTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAACAAGTCTCCCAACGTGCATACCATCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCGCATGGAAACTCATACACATGTGGTGGCAGCCGTCTGCTGTGCTTTATTGTGCAGACAATGGCTTATGAGTGGCCGTGTGCCTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGCATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCGGTAGCGATGAAAGATGCGGAGAAAGTTCCTCTGTTTTGGCTCGTTCTTCGAGACCAACTCAGGGTTGAGCAGACTTAATGAGCCGCGCTTGGCGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCAGTCTATTTGACATTGTTCAGTATGCGTTTGACATTATGTTAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCATTATGGCAAACTATCTTCGCGG
TCGGTCTCGGTCGGTCGATTGACAGCATGATGGCTCCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGACCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGA
TCGGCAAGCAGTTGCTATGTTGTTGGTCGGTGCTTAGTTGTTGTGTGAAGAGACGTTAACAC9
GB31610.2—2023
CGAACGGCGGTGATATTGGTGATCGCAAAAGCGAGAAGTATGCCACTTCATAGGGGCAACAACCAGCATACGTATGTTGGCTGGTTGATGAACTGTTGGCAACGGAGTGACGGTGTGATCAGGAACGTTTGTATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAA伪新地线虫（Pseudoterranova）参考序列，长度895bpB.9
CTGCGGAAGGATCATTATCGAGCGAATCCAAAACGAAAAAGTCTCCCAACGTGCATACCATCCATTTGCATGTTGTTGTGAGCCACATAGAAACTCATACACGTGTGGTGGCAGCCGTCTGATGTGCTTTATCGTGCAGACAATGGCTTATGAGTGGCTGTGTGATTGTTGAACAACGGTGACCAATTTGGCGTCTACGCCGTATCTAGCTTCTGCCTGGACCGTCGGTAGCGATGAAAGATGCGGAGGAAGTTCCTCTGTTTTGGTACGCTAAAGCAGAGTTGAGCAGACTTAATGAGCCACGCTTGGTGGCCGCCAAAACCCAAAACACAACCAGTCTATTTTAACGTTTGTTGATATGTTAATGTACAAATCTTGGCGGTGGATCACTCGGTTCGTGGATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATAAATAGTGCGAATTGCAGACACATTGAGCACTAAGAATTCGAACGCACATTGCGCTATCGGGTTCATTCCCGATGGCACGTCTGGCTGAGGGTCGAATTATAGTAAACTATCTTCGAGTACTTTTTATGGTCGTGAAGTATTCGGCAAGTAGTGCAGTCGGATTGTTTTTGTTGGTCGTCCGTTCGTTCGGTCGGTCAACAACAATATTCTGAGGCTCCTTGCTTAGTTGTGTTCTAGTAGACGTTAACACCTGAACAATATGTGGTGGTGATATTGGTGATGGCGAGAATCATGCCGCTTCAATGGGGCAGCAACCAGCATACGCTAATGACAGTTGGTTGATTGAAGCCAGGGCAACGGAGTGATGTACGTGTGGCGATCATTTAACGTTTATATTTGACCTCAGCTCAGTCGTGATTACCCGCTGAATTTAAGCATATAATTAAGCGGAGGAAAAGAAACTAA
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