本文件描述了指画颜料中柚皮苷和苯甲酸地那铵含量的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于指画颜料中柚皮苷和苯甲酸地那铵含量的测定。

ICS97.200.50
CCSY57
中华人民共和国国家标准
GB/T41437—2022
指画颜料中苦味剂柚皮苷和苯甲酸地那铵含量的测定
高效液相色谱法
Determination of naringin and denatonium benzoate in finger paints-High performance liquid chromatography2022-04-15发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2022-04-15实施
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GB/T41437—2022
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指画颜料中苦味剂柚皮苷和苯甲酸地那铵高效液相色谱法
含量的测定
GB/T41437-—2022
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本文件描述了指画颜料中柚皮苷和苯甲酸地那铵含量的高效液相色谱测定方法。本文件适用于指画颜料中柚皮苷和苯甲酸地那铵含量的测定。2规范性引用文件bzxz.net
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2分析实验室用水规格和试验方法GB/T6682
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。4原理
采用乙醇作为提取溶剂，经超声提取10min，离心，取出清液，残留物再次提取，合并两次提取清液，蒸至近干，加人50%甲醇水溶液溶解残留物，过滤后，采用高效液相色谱进行分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。
5试剂和材料
以下试剂除非另有规定，仅使用色谱纯试剂及以上。实验室用水符合GB/T6682规定的一级水要求。
5.1乙醇。
5.2甲醇。
5.350%甲醇水溶液（体积分数）。5.4乙睛。
5.5磷酸二氢钾。
5.6磷酸。
5.70.02mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=4.3）：称取2.72g磷酸二氢钾（5.5），溶于符合GB/T6682规定的一级水中，定容至1L，用磷酸（5.6）调至pH值为4.3。1
GB/T41437—2022
5.8柚皮苷（CAS号：10236-47-2）和苯甲酸地那铵（CAS号：3734-33-6）标准品：纯度不低于98%。5.9柚皮苷标准储备溶液：称取适量柚皮苷（精确到0.1mg）标准品，以甲醇（5.2）配制成质量浓度为1000mg/L的标准储备溶液，置于一18℃冰箱中，有效期为6个月。5.10苯甲酸地那铵标准储备溶液：称取适量苯甲酸地那铵（精确到0.1mg）标准品，以符合GB/T6682规定的一级水配制成质量浓度为1000mg/L的标准储备溶液，置于4℃冰箱中，有效期为6个月。5.11柚皮苷标准工作溶液：以50%甲醇水溶液（5.3）逐级稀释柚皮苷标准储备溶液（5.9）制备一组标准工作溶液质量浓度为0.08mg/L、0.2mg/L.0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L和10mg/L。有效期为24h。
5.12苯甲酸地那铵标准工作溶液：以50%甲醇水溶液（5.3）逐级稀释苯甲酸地那铵标准储备溶液（5.10）制备一组标准工作溶液质量浓度为0.08mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L和10mg/L。有效期为24h
仪器设备
高效液相色谱仪：配置二极管阵列检测器或满足条件的紫外检测器6.2超声波清洗器：35kHz。
6.3离心机：离心能力为16000g+g=9.806.65m/s。6.4电加热板：配温度控制显示装置。分析天平：精确至0.1mg。
尼龙膜过滤器：孔径0.22um。
50mL具盖离心管。
7试验步骤
试样制备
准确称取0.2g（精确至0.1mg）待测样品，置于50mL离心管（6.7）中，加人10mL乙醇（5.1）振荡1min使试样充分浸润，在超声波清洗器（6.2）中室温下超声提取10min，使用离心机（6.3）于16000g下离心5min，取出清液，向残留物中再次加入10mL乙醇（5.1），按上述方式提取，离心并取出清液。合并两次提取清液，在电加热板（6.4）上蒸至近干，温度应不高于150℃。加入50%甲醇水溶液（5.3）溶解残留物，将溶液转移至10mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液（5.3）定容至刻度，震荡摇匀。取溶液过膜过滤器（6.6)后，所得滤液经高效液相色谱仪（6.1)测定7.2空白实验
除不加试样外，接7.1步骤进行。7.3高效液相色谱测定
7.3.1高效液相色谱条件
由于测试结果取决于所使用仪器，因此不可能给出高效液相色谱分析的通用参数。设定的参数应保证色谱测定时被测组分与其他组分能够得到有效的分离，下列给出的参数证明是可行的色谱柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.7μm粒径，或相当者；a)
流动相：流动相A为乙睛，流动相B为0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（pH=4.3)（5.7)，梯度洗b）
脱程序见表1；
时间/min
流速：0.3mL/min；
表1流动相梯度洗脱程序
流动相A/%
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流动相B/%
检测波长：柚皮苷测定波长为282nm，苯甲酸地那铵测定波长为210nm（以苯甲酸地那铵分解生产的地那铵离子进行测定)；柱温：40℃：
进样量：10L。
标准工作曲线
按照5.11和5.12配制柚皮苷和苯甲酸地那铵标准工作溶液，按照（7.3.1）色谱条件进行测定，柚皮苷和苯甲酸地那铵标准溶液的色谱图见附录A中图A.1.以色谱峰的峰面积为纵坐标，以其对应的浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线7.3.3
定性分析
取7.1所得样品待测溶液，按照（7.3.1）色谱条件进行测定，记录色谱峰的保留时间，通过对比试样和标准工作溶液中目标化合物的保留时间进行定性分析7.3.4定量分析
记录色谱峰的峰面积响应值，在线性范围内，用外标法定量。若柚皮苷和苯甲酸地那铵的含量超出标准曲线的范围，用适量50%甲醇水溶液稀释至标准曲线范围内8
试验数据处理
指画颜料中柚皮苷和苯甲酸地那铵的含量按式（1)进行计算：X =exvxf
式中：
试样中柚皮苷和苯甲酸地那铵的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；试液中柚皮苷和苯甲酸地那铵的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；试样的定容体积，单位为毫升（mL）；稀释倍数；
试样的质量，单位为克（g）。
按照上述公式计算样品中柚皮苷和地那铵离子的含量，以地那铵离子的含量表示苯甲酸地那铵的3
GB/T41437—2022
含量，结果保留至小数点后一位。9
定量限、回收率和精密度
定量限
本文件中柚皮苷和苯甲酸地那铵的方法定量限均为：4.0mg/kg。回收率
在试样中定量加人适当的已知浓度的标准溶液，按第7章进行回收率分析，回收率应为85%～110%精密度
实验室间精密度试验结果见附录B。10
测试报告
测试报告应至少包括以下信息内容：a)
样品的来源及描述；
本文件的编号（包括年号）；
测定结果，用mg/kg表示；
与本文件的任何偏离；
在测试中观察到的异常现象；
测试日期。
附录A
（资料性）
柚皮苷和苯甲酸地那铵的色谱图GB/T41437-—2022
按7.3.1给出的测定条件得到的柚皮苷和苯甲酸地那铵的高效液相色谱分离图见图A.1。0.18
柚皮苷
地那铵离子
苯甲酸肉子
柚皮苷和苯甲酸地那铵的高效液相色谱分离图8
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附录B
（资料性）
精密度
选取有代表性的实际指画颜料样品，在8间实验室中按照本文件进行测试，参照GB/T6379.1和GB/T6379.2计算精密度，结果见表B.1。表B.1
黄色指画颜料
化合物
柚皮苷
苯甲酸
地那铵
结论平均值；
重复性标准偏差：
重复性变异系数；
重复性限，r=2.8×s+
再现性标准偏差；
再现性变异系数；
再现性限，R=2.8×sk。
精密度试验结果
[1]GB/T6379.1
[2]GB/T6379.2
参考文献
测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）重复性与再现性的基本方法
GB/T41437—2022
第1部分：总则与定义
第2部分：确定标准测量方法
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