本标准规定了食品中纳他霉素的液相色谱测定方法。 本标准适用于干酪和再制干酪及其类似品、酱卤肉制品、肉类(熏、烧、烤)、油炸肉类、西式火腿类、 肉灌肠类、发酵肉制品类、蛋黄酱、沙拉酱、糕点、果蔬汁(浆)、果汁饮料、发酵酒中纳他霉素的测定。
本标准代替GB/T 21915-2008《食品中纳他霉素的测定 液相色谱法》。
本标准与GB/T 21915-2008相比，主要变化如下：
——标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中纳他霉素的测定”；
——修改了标准的适用范围；
——增加了试样预处理方法；
——增加了油炸肉类、蛋黄酱、沙拉酱和发酵酒等样品处理方法。

中华人民共和国国家标准
GB5009.286—2022
食品安全国家标准
食品中纳他霉素的测定
2022-06-30发布
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
2022-12-30实施
本标准代替GB/T21915一2008《食品中纳他霉素的测定液相色谱法》。
本标准与GB/T21915一2008相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中纳他霉素的测定”；修改了标准的适用范围；
增加了试样预处理方法；www.bzxz.net
一增加了油炸肉类、蛋黄酱、沙拉酱和发酵酒等样品处理方法。GB5009.286—2022
1范围
食品安全国家标准
食品中纳他霉素的测定
本标准规定了食品中纳他霉素的液相色谱测定方法。GB5009.286—2022
本标准适用于干酪和再制干酪及其类似品、酱卤肉制品、肉类（熏、烧、烤）、油炸肉类、西式火腿类、肉灌肠类、发酵肉制品类、蛋黄酱、沙拉酱、糕点、果蔬汁（浆）、果汁饮料、发酵酒中纳他霉素的测定、2原理
样品经！提戈稀亚外皇今油或国样品，后，·离心的方一除样品中的脂肪或固体颗粒」是耳液过患之相夜包普紫「，享测定外法量试剂和材料
除非另有兑，A方氵所月试J均分斤纯水斗GP←6682规的一级小3.1试剂
3.1.1甲醇（CH4O)：色谱1。
3.1.2冰乙酸（C,HOz）
3.2标准品
纳他霉素（C33H4NC。，：18113-~，.纠度=9，空F家；授予标准物质证书的标准物质。
3.3标准溶液配制
3.3.1纳他霉素标准储备液（250mg/L）：准确称取25mg纳他霉素标准品（精确至0.1mg），加入适量甲醇及1mL冰乙酸超声溶解，用甲醇定容至100mL，配成浓度为250mg/L标准储备液，0℃～4℃低温冰箱密封保存，3周内使用。
3.3.2纳他霉素标准中间液（50mg/L）：准确吸取10.0mL纳他霉素标准储备液（3.3.1）于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度混匀，配成浓度为50mg/L标准中间工作液，现用现配。3.3.3纳他霉素系列标准工作液：分别吸取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL纳他霉素标准中间液（3.3.2）于5个10mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成0.5mg/L、1.0mg/L、2.5mg/L、5.0mg/L、10mg/L纳他霉素系列标准工作液，现用现配。4仪器和设备
4.1高效液相色谱仪：配紫外检测器。GB 5009.286—2022
电子天平：感量为0.1mg和0.01g。4.3走
超声波清洗器。
4.4离心机（转速≥4000r/min）。4.5食物粉碎机。
涡旋振荡器。
有机针头式过滤器：0.22um。
5分析步骤
5.1试样预处理
取多个预包装的样品，其中非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆；固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀，均匀的液体直接混匀，取其中的200g装入玻璃容器中，密封后于4℃保存。5.2样品前处理
5.2.1干酪和再制干酪及其类似品、酱卤肉制品、肉类（熏、烧、烤）、油炸肉类、西式火腿类、肉灌肠类、发酵肉制品类、蛋黄酱、沙拉酱称取5.0g样品（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加人15.0mL甲醇超声提取20min，加人5.0mL水混匀，以4000r/min离心10min，于一20℃冰箱中冷冻1h，上清液经0.22um有机针头式过滤器过滤，收集滤液约2mL上机测定。5.2.2糕点样品
称取5.0g样品（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加人15.0mL甲醇超声提取20min，加人5.0mL水混匀，以4000r/min离心10min，上清液经0.22um有机针式过滤器过滤，收集滤液约2ml上机测定。
5.2.3果蔬汁（浆）、果汁饮料
称取5.0g样品（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加入15.0mL甲醇超声提取20min，以4000r/min离心10min，将上清液定量转移至25mL容量瓶，用水定容至刻度混匀，经0.22μm有机针式过滤器过滤，收集滤液约2mL上机测定。5.2.4发酵酒
量取适量的酒类样品，经0.22um针式过滤器过滤，收集滤液约2mL上机测定。5.3仪器参考条件
5.3.1色谱柱：C1g色谱柱（4.6mm×250mm，5um），或性能相当者。5.3.2流动相：A：甲醇，B：乙酸十水=5十95（体积比）。5.3.3流速：1.0mL/min。
5.3.4检测波长：305nm。
5.3.5柱温：30℃。
5.3.6进样量：10μL
5.3.7梯度洗脱程序见表1。
时间/min
5.4标准曲线的制作
梯度洗脱程序表
将纳他，系，！标准二作八别注，浮色谱GB5009.286—2022
，：，相厂：牢西只，以系列标工作液中纳他霉素的浓度：1，专坐二以纳“更的峰积为”坐板“示准由线：他等素示准滤演的色谱图参见附录A中图.1
5.5试样溶活的迎
将经过52w法育外寺测
液主，、液相它首1中，得到：泌夜中每的峰面积，根据标准曲线得到等叫液口纳也霉詹浓度6
分析结果的表述
试样中纳他霉素的含里按式（1)计算，泥类样品中纳也霉素的含量安式、2)计算：X
式中：
>1（）
试样中纳他霉素的含量，单位为笔克每干克（mg/kg）；由标准曲线得到待测溶液中纳他霉素的含量，单位为毫克每升（mg/L）；样品中提取溶剂总体积或定容体积，单位为毫升（mL）；样品质量，单位为克（g）；
单位换算系数。
计算结果保留两位有效数字。
式中：
试样中纳他霉素的含量，单位为克每升（g/L）；由标准曲线得到待测溶液中纳他霉素的含量，单位为毫克每升（mg/L）；单位换算系数。
计算结果保留两位有效数字。
（1）
（2）
GB5009.286—2022
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他
试样称取5.0g，按照试验方法操作并定容，发酵酒直接测定，各类食品的检出限和定量限如下：干酪和再制干酪及其类似品、酱卤肉制品、肉类（熏、烧、烤）、油炸肉类、西式火腿类、肉灌肠类、发酵肉制品类、蛋黄酱、沙拉酱、糕点的检出限为0.14mg/kg，定量限为0.48mg/kg；果蔬汁（浆）、果汁饮料检出限为0.18mg/kg，定量限为0.60mg/kg；发酵酒的检出限为0.035mg/L，定量限为0.12mg/L。4
附录A
纳他霉素标准品液相色谱图
纳他霉素标准品液相色谱图见图A.1。纳他霉素
纳每量标隹品
，)液相“图
GB 5009.286—2022
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