GB/T 35946-2018l.Determination of thimerosal in eye cosmetics-High performance liquid chromatography.
GB/T 35946规定了眼部化妆品中硫柳汞含量的高效液相色谱(HPLC)测定方法的试验方法结果计算、回收率与精密度、允许差等内容。
GB/T 35946适用于卸妆液、眼影、眼霜、睫毛膏、眼线液、眼线膏、眉笔等眼部化妆品中硫柳汞含量的测定。
GB/T 35946的方法检出限和定量限:卸妆液的检出限为1mg/kg,眼影、眼霜.眼线液等检出限为2 mg/kg.卸妆液的定量限为3 mg/kg,眼影、眼霜、眼线液等定量限为6 mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注8期的引用文件,仅注8期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3试验方法
3.1 原理
样品经甲醇溶液超声提取、离心后,上清液经固相萃取小柱净化,用高效液相色谱法测定和确证,外标法定量。
3.2试剂 与材料
除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一-级水。
3.2.1甲 醇:色谱纯。.
3.2.2甲 酸:色谱级。
3.2.3乙腈 :色谱纯。
3.2.4乙酸铵。
3.2.5 2%甲 酸甲醇溶液:准确移取2 mL甲酸于100 mL容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度,混匀后备用。
3.2.6 10%甲 酸甲醇溶液:准确移取10 mL甲酸于100 mL容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度,混匀后备用。
3.2.7 0.05 mol/L乙酸铵溶液:准确称取乙酸铵3.85 g,置1 000 mL容量瓶中,加水溶解并定容至刻度,混匀过滤后备用。
3.2.8 50%甲醇溶液:准确移取 50 mL甲醇于100 mL容量瓶中,用水稀释并定容至刻度，混匀后

ICS71.100.70
中华人民共和国国家标准
GB/T35946—2018
眼部化妆品中硫柳汞含量的测定高效液相色谱法
Determination of thimerosal in eye cosmetics-High performance liquid chromatography2018-02-06发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2018-09-01实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257)归口。GB/T35946—2018
本标准起草单位：江苏省产品质量监督检验研究院（国家化妆品质量监督检验中心）、上海市日用化学工业研究所（国家香料香精化妆品质量监督检验中心）、广东华鑫检测技术有限公司、苏州世谱检测技术有限公司、完美（中国）有限公司、欧诗漫生物股份有限公司、广州质量监督检测研究院、江苏省食品药品监督检验研究院。wwW.bzxz.Net
本标准主要起草人：卢剑、车文军、沈敏、李晓敏、代丹、廖华勇、寻知庆、杨洋、张丽华、李海、杨安全、张征、康薇、武中平、袁利文、方萍、刘园、王小丹。I
1范围
眼部化妆品中硫柳汞含量的测定高效液相色谱法
GB/T35946—2018
本标准规定了眼部化妆品中硫柳汞含量的高效液相色谱（HPLC)测定方法的试验方法、结果计算、回收率与精密度、充许差等内容。本标准适用于卸妆液、眼影、眼霜、睫毛膏、眼线液、眼线膏、眉笔等眼部化妆品中硫柳汞含量的测定。
本标准的方法检出限和定量限：卸妆液的检出限为1mg/kg，眼影、眼霜、眼线液等检出限为2mg/kg。卸妆液的定量限为3mg/kg，眼影、眼霜、眼线液等定量限为6mg/kg。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试验方法
3.1原理
样品经甲醇溶液超声提取、离心后，上清液经固相萃取小柱净化，用高效液相色谱法测定和确证，外标法定量。
3.2试剂与材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.2.1甲醇：色谱纯。
3.2.2甲酸：色谱级。
3.2.3乙睛：色谱纯。
3.2.4乙酸铵。
3.2.52%甲酸甲醇溶液：准确移取2mL甲酸于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混勾后备用。
3.2.610%甲酸甲醇溶液：准确移取10mL甲酸于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀后备用。
3.2.70.05mo1/L乙酸铵溶液：准确称取乙酸铵3.85g，置1000mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，混匀过滤后备用。
3.2.850%甲醇溶液：准确移取50mL甲醇于100mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，混匀后备用。
3.2.9固相萃取柱：LNH2500mg，6mL固相萃取柱上填充混合型强阳离子交换填料（PXC)150mg1
-TKAONTKAca
GB/T35946—2018
或相当者，使用前依次用5mL甲醇、10mL10%甲酸甲醇溶液、10mL甲醇活化。3.2.10固相萃取柱：NH，200mg/3mL（聚合物基质）或相当者，使用前依次用3mL甲醇、6mL10%甲酸甲醇溶液、6mL甲醇活化。
3.2.11微孔滤膜：0.22μm，有机相。3.2.12硫柳汞标准样品：纯度不小于97.0%，其中文名称、英文名称、INCI名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量及结构式参见附录A中的表A.1。3.2.13硫柳汞标准储备溶液：1000mg/L。精密称取硫柳汞标准品（3.2.12）10mg（精确到.1mg）置10mL容量瓶中，加甲醇（3.2.1)使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为1000mg/L的硫柳汞标准储备溶液，冷藏避光保存，有效期为一个月3.2.14中间浓度硫柳汞标准储备溶液，50mg/L。精密量取硫柳汞标准储备溶液（3.2.13)0.5mL，置10mL容量瓶中，加10%甲酸甲醇溶液（3.2.6）定容至刻度摇匀，即得质量浓度为50mg/L的中间浓度硫柳汞标准储备溶液，临用前现配。3.2.15硫柳汞标准作溶液：分别精密量取一定体积的中间浓度硫柳秉标准储备溶液（3.2.14），以10%甲酸甲醇溶液(3.2.6）配制成0.0mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L50mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L不同浓度的硫柳汞标准工作溶液，临用前现配。仪器和设备
高效液相色谱仪（二极管阵列检测3.3.1
分析天平：感量0.000
超声波清洗仪。
固相萃取装置。
3.3.5涡旋混合器。
3.3.6离心机。
试样制备
3.4.1提取
3.4.1.1眼部卸妆液
摇勾样品，准确称取试样0.5g，加人3mL甲醇，涡旋分散2min，加人甲醇是容至5mL，待净化。眼影、眼霜、睫毛言、眼部凝胶、眼线液、眼线膏、眉笔等3.4.1.2
称取样品约0.5g（精确至0.0001g）加人10.0ml50%甲醇溶液（3.2.8），充分振荡1min（较粘样品可适当超声辅助溶解）.6000r/min下离心5min，取5mL上清液待净化。3.4.2净化
3.4.2.1眼部卸妆液
将3.4.1.1中的提取液转移至固相萃取柱（3.2.9），用5mL甲醇（3.2.1）淋洗，弃去流出液，用3mL2%甲酸甲醇（3.2.5）洗脱，收集流出液，并用2%甲酸甲醇定容至3mL，混勾，过微孔滤膜（3.2.11)，供HPLC分析。
3.4.2.2眼霜、眼线液、眼线膏、睫毛膏、眼部凝胶、眉笔、眼影等将3.1.1.2中的提取液转移至固相萃取杜（3.2.10），用3mL甲醇（3.2.1)淋洗，弃去流出液，用3mL2
TKAONiKAca
GB/T35946—2018
10%甲酸甲醇（3.2.6）洗脱，收集流出液，并用10%甲酸甲醇定容至3mL，混勾，过微孔滤膜（3.2.11），供HPLC分析。
3.5高效液相色谱法测定
液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
色谱柱：Chz柱，250mmX4.6mm(i.d.），5μm，或相当者；流动相：0.05mol/L乙酸铵（3.2.7）：甲醇=60：40（体积比）；b)
柱温：35℃；
进样量：20L；
流速：1.0mL/min
检测波长：240
标准工作曲
自线的绘制
示准工作溶液（3.2.15）进行HPLC测定，以浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，作出取硫柳汞标
标准曲线，求得标准曲线回归方程3.5.3测定步骤
样品待测液中硫柳汞的响应值应在标准曲
硫柳汞标准样品色谱图参见附录小的图B3.5.4
空自武验
除不加试样外，均按上述测定条件和结果计算
过线压范围则应稀释后再进样测定。内，超
样品中硫柳录（以Hg计)含量按式(1)计算，计算结果保留小数点后两位X
式中：
XfX10-X100
样品中硫柳汞质量含量（以Hg计)，%测试液中硫柳汞的浓度，单位为毫克每升（mg定容体积，单位为毫升（mL）；稀释倍数；
硫柳汞折算为汞的系数0.4955；样品质量，单位为克（g）。
5回收率与精密度
......
....(1)
在添加浓度35mg/kg~140mg/kg范围内，回收率在90%110%之间，相对标准偏差小于5%。3
YKAoNirKAca
GB/T35946—2018
6充许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。4
riYKAoNirKAca
附录A
（资料性附录）
GB/T35946—2018
标准物质的中文名称、英文名称、INCI名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量及结构式硫柳汞中文名称、英文名称、INCI名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量及结构式参见表A.1。表A.1
硫柳汞中文名称、英文名称、INCI名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量及结构式中文名称
硫柳汞
英文名称
Thiomersal
thimerosal
登录号
54-64-8
分子式
C,H,HgNaO,S
相对分子
结构式
-iKAoNrKAca
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附录B
（资料性附录）
硫柳汞标准样品色谱图
硫柳汞标准样品色谱图参见图B.10
时间/min
硫柳汞标准样品色谱图
TTKAoNrKAca
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中华人民共和国
国家标准
眼部化妆品中硫柳汞含量的测定高效液相色谱法
GB/T35946—2018
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开本880×12301/16印张0.75字数14千字2018年2月第一次印刷
2018年2月第一版
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