HG 3618—1999 前言 本标准是根据我国以往制定的苏云金杆菌企业标准等有关材料，结合我国实际情况而制定。本标准对苏云金杆菌悬浮剂的要求、试验方法、抽样以及包装、运输等作了具体规定，为苏云金杆菌产品的生产提供统一技术依据。 本标准由中华人民共和国原化学工业部技术监督司提出，由化学工业部沈阳化工研究院归口。 本标准主要起草单位：中国农业大学应用化学系。参加起草单位包括湖北省生物农药工程研究开发中心、济南科贝尔生物工程有限公司等。主要起草人包括刘丰茂、王开梅、钱传范等。 中华人民共和国化工行业标准 苏云金杆菌悬浮剂（Bacillus thuringiensis suspension concentrate） HG 3618—1999 苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，B.t.）是目前应用最广泛的一种微生物杀虫剂，其主要有效成分为伴孢晶体中的毒素蛋白，其中对鳞翅目害虫具有毒力的蛋白相对分子质量约为130000。 1 范围 本标准规定了苏云金杆菌悬浮剂的要求、试验方法以及标志、标签、包装、贮运等内容。 本标准适用于由苏云金杆菌原药和助剂制成的悬浮剂，主要用于防治鳞翅目害虫。 2 规范性引用文件 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成本标准条文。本标准出版时所列版本均为有效。GB/T 1250—1989 极限数值的表示方法和判定方法；GB/T 1601—1993 农药pH值的测定方法；GB/T 1604—1995 商品农药验收规则；GB/T 1605—1979（1989）商品农药采样方法；GB 3796—1983 农药包装通则；GB/T 14825—1993 农药可湿性粉剂悬浮率测定方法；GB/T 16150—1995 农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法；HG 3617—1999 苏云金杆菌原粉。 3 要求 3.1 外观：棕黄色至褐色悬浮液体。 3.2 苏云金杆菌悬浮剂应符合表1要求。 毒素蛋白（%）：0.8 / 0.4 / 0.2（对应不同毒力效价水平） 毒力效价（IU/μL）：8000 / 4000 / 2000 pH值范围：4.5～6.5 细度（150μm）：98% 悬浮率（有效成分）：80% 注：Px和Ha分别为小菜蛾（Plutella xylostella）和棉铃虫（Heliothis armigera）的缩写。 4 试验方法 除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，溶液均为水溶液。 4.1 抽样 按照GB/T 1605—1979（1989）中“乳剂和液体状态的采样”方法进行，用随机数表法确定抽样包装件数，最终抽样量不少于250mL。 4.2 鉴别试验 当生物测定法对产品质量产生疑问时，可采用SDS-PAGE方法测定有效毒素蛋白相对分子质量是否为130000，并测定毒素蛋白含量是否符合标准要求。 4.3 毒素蛋白含量测定 毒素蛋白含量可采用SDS-PAGE-扫描法和SDS-PAGE-洗脱比色法，两者精密度接近，其中扫描法为仲裁法。 4.3.1 SDS-PAGE-扫描法（仲裁法） 4.3.1.1 方法提要：用碱性溶液处理伴孢晶体，使其降解为毒素蛋白，再通过SDS-PAGE按相对分子质量分离蛋白质，通过扫描仪对蛋白区带面积进行定量分析。 4.3.1.2 仪器设备：电泳仪、垂直电泳槽、薄层扫描仪或图像扫描仪、离心机、分析天平等。 4.3.1.3 试剂：包括过硫酸铵、十二烷基硫酸钠、四甲基乙二胺、氢氧化钠、丙烯酰胺溶液及相关缓冲液等。