本标准规定了具有特殊卫生功能的日化产品抗菌、抑菌效果的检测方法及评价标准。 本标准适用于常见洗涤用品、人体皮肤清洁用品的抗菌、抑菌性能测试，其它日化产品也可根据用途选择采用。

ICS71.040.99
分类号：Y40
备案号：36712-2012
中华人民共和国轻工行业标
QB/T2738-2012
代替QB/T2738—2005
日化产品抗菌抑菌效果的评价方法Test methods for evaluating daily chemical products in antibacterial andbacteriostaticefficacy
2012-05-24发布
中华人民共和国工业和信息化部发布PDF文件使用“pdfFactory Pro”试用版本创建www.fineprint.cn2012-11-01实施
QB/T2738-2012
本标准按照GB/T1.1一2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准代替QB/T2738—2005《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》本标准与QB/T2738—2005相比主要变化如下：修订了抗菌、抑菌作用浓度和时间：修订了抗菌、抑菌操作步骤中的试验菌种：规定了培养血中培养基的量：
一修订了部分文字表述。
本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国表面活性剂和洗涤用品标准化技术委员会归口本标准起草单位：国家洗涤用品质量监督检验中心（太原）、西安开米股份有限公司、广东省微生物分析检测中心。
本标准主要起草人：公培龙、张宝莲，高欢泉、欧阳友生。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：QB/T2738-2005
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日化产品抗菌抑菌效果的评价方法QB/T2738-2012
本标准规定了具有特殊卫生功能的日化产品抗菌、抑菌效果的检测方法及评价标准。本标准适用丁常见洗涤用品、人体皮肤清洁用品的抗菌、抑菌性能测试，其他日化产品也可根据用途选择采用。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件消毒技术规范[2002]
GB.15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准GB15981-1995消毒与灭菌效果的评价方法与标准QB/T2739一2005洗涤用品常用试验方法滴定分析（容量分析）用试验溶液的制备3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
抗菌antibacterial
采用化学或物理方法杀灭细菌或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程。抑菌bacteriostasis
采用化学或物理方法抑制或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程载体carrier
试验微生物的支持物
生物负载bioburden
被测试的一个单位物品上承载活微生物的总数。杀灭率killingrate，（KR）
在微生物杀灭试验中，用百分率表示微生物数量减少的值杀灭时间killingtime，（KT）
用于生物指示物抗力鉴定时，指受试指示物样本，经杀菌因子作用后全部样本无菌生长的最短作用时间（min）。
菌落形成单位colonyformingunit，（efu）1
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在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落，称为菌落形成单位，以其表达活菌的数量。3.8
中和剂neutralizer
在微生物杀灭试验中，用以消除试验微生物与杀菌剂的混悬液中和微生物表面上残留的杀菌剂，使其失去对微生物抑制和杀灭作用的试剂。3.9
中和产物product of neutralization指中和剂与杀菌剂作用后的产物。4检验抗菌、抑菌日化产品效果的实验室及无菌操作的基本要求4.1微生物实验室应采取封闭式布局，建筑应便于清洁、消毒。为避免污染应在相对正压洁净条件下进行。因特殊需要用致病菌作指示菌时，则应在生物安全柜（负压）内进行。4.2试验开始前，应以湿式方法清洁台面和打扫室内地面，然后以紫外线或其他方法对实验室内空气进行消毒。
4.3实验人员应穿戴工作服、口罩、帽子，进行无菌检验时，需经风淋后进入实验室。然后，正确穿戴好无菌隔离衣、帽和口罩。
4.4每吸取一次不同样液应更换无菌吸管，接种环（针）需在火焰上烧灼灭菌后，方可再次使用。4.5除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸增水或去离子水或相当纯度的水4.6要求无菌的试剂，如蒸馏水、磷酸盐缓冲液、培养基、牛血清白蛋白、标准硬水、中和剂等，均需灭菌或过滤除菌。
4.7无菌器材和试剂，使用前须检查容器或包装是否完整，有破损者不得使用。4.8正在使用的无菌器材和试剂不得长时间暴露于空气中。4.9
移液或接种时，应将试管口和琼脂平板靠近火焰，防止污染。4.10所有用过的污染器材，应立即放入盛有消毒液的容器中，以防止对周围环境和清洁物品造成污染4.11若不慎发生微生物培养物摔碎或其他试验微生物泄漏事故时，不论是否具有致病性，均应立即对污染及可能波及的区域进行消毒处理。4.12全部试验结束后，应按常规对室内空气和环境表面进行消毒处理5样品采集
为使样品具有良好的代表性，应于同一批号三个运输包装中至少随机抽取12件最小销售包装样品，其中4件留样，4件做抑菌或杀菌性能测试，4件做稳定性测试。抽样的最小包装不应有破裂，检验前不得启开。
6日化产品抗菌、抑菌效果评价原则6.1杀菌试验测定方法
标准中杀菌试验测定方法用于考核产品的抗菌作用。6.2抑菌试验测定方法
标准中抑菌试验测定方法用于考核产品的抑菌作用。6.3检验用指示微生物
依据产品执行标准或说明书适用范围进行表1中试验菌（由国家级或省级菌种保藏管理中心提供）的选择检测，也可根据产品的使用要求增加其他菌种作为检验菌种。2
PDF文件使用\pdfFactory Pro”试用版本创建www.fineprint.cn试验南名称
金黄色葡萄球菌
(Staphylocodcus aureus)
大肠埃希氏
(Escherichiacolt)
白假丝醇母菌（白色念味菌）
(Candida albicans)
铜绿假单脚菌（绿肤柱
(Pseudomonas aerugino
表抗菌、抑菌日化产品试验中微生物的选择黄珠标准号
ATCC6538或AReC-27217
8099或ATCC25922域ATCO
ATCC10231
ATCO15442
抗菌、种菌
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化产品适用范围
手、起、皮肤荐
黏膜，织物及一般
物品表匾
手、餐饮具
般物品装面
手、足、
和蔬菜，织物及
皮肤机膜
皮肤和氨
6.4作用浓度
按产品明示的标准要求进行。（未明示的参照QB/T2850-2007《抗菌抑茵型洗涤剂》）6.5作用时间
按产品明示的标准要求进
6.6结果报告
（未明示的参照QB/T2850-2007（抗菌抑菌型洗涤剂》）测试结果报告是试验情况和结展的书面表达，a）试验菌种：
b）作用浓度：
）作用时间：
d）效果评价结果：
e）对测定结果有影响的其他因素。7白化产品抗菌、抑菌效果检验方汽日化产品抗菌、
日化产品抗菌
杀菌试验
抑菌试验
抑菌效果检验方法分类
结束报告至少应包括
抑茵效果村验方法分美见表2
日化产品抗菌、抑菌检验方法
方法名称
悬液定量法
模拟法
滞留法
悬液定量法
模拟法
表示形式
计时杀菌
计时杀菌
滞抑菌
计时抑菌
计时抑菌
计时抑菌
适用起围
抗菌型日化
抗菌型织物类洗
抑菌型人体皮肤
抑菌型日化产
抑菌型织物
生条箱
抱菌型白化产品
7.2抗菌型日
化产品的杀菌效果检验方法惠液定备法7.2.1设备
a）锥形烧瓶：
b）平（直径9cm）
e）量筒：
d）精密pH试纸：
e）无菌试管：
PDF 文件使用\pdfFactory Pro”试用版本创建 www.fineprint.cn本
崔对应章节
QB/T2738-2012
f）无菌刻度吸管（1.0mL、5.0mL、10.0ml）g）恒温培养箱：
h）冰箱：
1）茵落计数器：
）酒精灯：
k）电动混合器：
）恒温干燥箱：
m）恒温水浴锅：
nY湿热火菌锅：
。）电子天平：
P）生物安全柜等微生物试验必备仪器7.2.2试剂
a）营养琼脂培养基
称取蛋白陈10.0g、牛肉膏5.0g，氧化钠5.0g，加蒸馏水1000mL溶解，调pH至7.2~7.4，然后加入琼脂胎15.0g加热溶解，分装，于121℃压力蒸汽灭菌20min后备用。b)沙堡琼脂培养基
称取葡萄糖40.0g蛋白陈10.0g、琼脂20.0g、加蒸馏水1000mL，将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH至5.6土0.2，于115℃压力蒸汽灭菌30min后备用。c）0.03mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）称取无水磷酸氢二钠2.83g、磷酸二氢钾1.36g，加蒸馏水1000mL，待完全溶解后，调pH至7.2~7.4，经121℃压力蒸汽火菌20min后备用，d）标准硬水（硬度342mg/L）
称取氯化钙（CaCl）0.034g、氯化镁（MgCl26H.0）0.139g，加蒸馅水1000mL，经121C压力蒸汽灭菌20min后备用
e）中和剂
几种带见中和剂：
1）硫代硫酸钠5.0g、蒸馏水1000mL。2）磷酸二氢钾1.36g、磷酸氢二钠2.83g.卵磷脂10.0g、甘氨酸10.0g、吐温（80）30.0g蒸馏水1000mL。3）磷酸二氢钾1.36g磷酸氢钠2.83g、卵磷脂3.0g、吐温（80）20.0g、蒸馏水1000mL.4）叶温（80）20.0g、硫代硫酸钠10.0g、PBS1000mL注：1用于氯型杀菌剂：2）、3）用于非氧化型杀菌剂：4）用于氧型杀菌剂菌液制备
（1）细菌繁殖体悬液的制备
1）取冻干菌种管，在无菌操作下打开，以毛细吸管加入适量营养肉汤，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取含5.0mL~10.0mL营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液：置37C培养18h～24h用接种环取第1代培养的菌悬液：划线接种于营养琼脂培养基平板土，于37℃培养18h~24h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，于37℃C培养18h~24h，即为第3代培养物。2）取菌种第3代～14代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（18h~24h），用5.0mL吸管吸取3.0mL~5.0mL稀释液加入斜面试管内，反复吹吸洗下菌苔。随后，用5.0mL吸管将洗液移至另一无菌试管中，用电动混合器混合（振荡）20s，或在手掌上振敲80次，以使细菌悬浮均，3）初步制成的菌悬液，先用细菌浓度比浊测定法粗测其含菌浓度，然后以稀释液稀释至所需使用的浓度
4）细菌繁殖体悬液应保存在4℃C冰箱内备用。应当天使用不得过夜。PDF文件使用\pdfFactory Pro\试用版本创建 www.fineprint.cn5）怀疑有污染时，应以菌落形态、革兰染色与生化试验等法进行鉴定。（2）白假丝酵母菌（白色念株菌）悬液制备QB/T2738-2012
1）取冻干菌种管，以无菌操作打开，用毛细吸管吸加适量沙堡液体培养基于管中，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取含5.0mL~10.0mL沙堡液体培养基试管，滴入少许菌种悬液，置37℃培养18h~24h。用接种环取第1代培养的菌悬液，划线接种于沙堡琼脂培养基平板上，于37℃培养18h～24h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，接种于沙堡琼脂斜面，于37℃培养18h~24h，即为第3代培养物。将其密封后在4℃保存，时间不得超过6周。2）试验时，取第3代斜面培养物在沙堡琼脂斜面上连续传代，方法与第3代相同。取第5代或6代的沙堡琼脂培养基斜面新鲜培养物（18h24h），用5.0mL吸管吸取3.0mL5.0mLPBS稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后，用5.0mL吸管将洗液移至另一无菌试管中，用电动混合器混合20s，或在手掌上振敲80次，以使白色念珠菌浮均匀。3）菌悬液保存在4℃冰箱内备用，当天使用不得过夜。4）怀疑有污染时，应以菌落形态、革兰染色与生化试验等法进行鉴定，菌落形态可直接用显微镜观察。菌体形态可在涂片后直接用高倍显微镜观察，也可用墨水阴地法染色（将菌与黑墨水在玻片上混匀，推成薄膜）后观察。
7.2.3中和剂鉴定试验方法
为了准确评价所测样品对微生物的杀灭作用，杀菌试验中要求选择适当中和剂。所选中和剂不仅能及时中止抗菌洗剂对微生物的抑杀作用：且中和剂本身与所测样品的反应产物（即中和产物）对微生物无抑制或杀灭作用，对培养基无不良影响。7.2.3.1中和剂鉴定试验
7.2.3.1.1中和剂鉴定试验原则见表3。表3中和剂鉴定试验原则
武样处理
第1组
试验分组
试验日的
杀菌剂+菌
液培养
观察试验样
液中的杀菌剂
对试验菌有无
杀灭或抑制能
第2组
（杀菌剂+菌液）+
中和剂一培养
观察样液中残留杀
菌剂被中和后，受到杀
第3组
中和剂+菌液
一培养
观察中和剂
茵剂作用后的试验菌是否抑菌
是否能恢复生长bzxZ.net
7.2.3.1.2中和剂鉴定试验见表4。第4组
（杀菌剂+中和
剂）+菌液一培养
观察中和产物，
或未被完全中和的
第5组
阳性菌数对照
残留杀菌剂对试验阳性对照组
菌的生长紫殖是否
有影响
PDF文件使用“pdfFactoryPro”试用版本创建www.fineprint.cn第6组
虏性对照
阴性对照组
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试验分组
分别取菌悬液0.1mL
加入对应1+5组
取原液或稀秤0.5ml
接种平板（2个/样本）
验样液
作用至预定用
表4中和剂鉴定试验
中和剂（悬液定型法）鉴定试验第2组
试验样液
寸间，分别吸取混
匀液0.5mL加入对应组
用PBS10倍
系列稀释
然后，倾注平板置37
中和剂
作用10min
用中和剂10
倍系列稀释
第3组
中和剂
第4组
中和产物。
第5组
第6组
混约作用
10min，分刷取混匀液0.5mL加
入对应组
中和剂
用中和剂10
倍系列稀释
计数菌落数，
8菌悬液浓度及制备：用PBS将试验语息液722.1确释，Ix10.cf/ml9x10*cfu/mL
中和产物
用中和产物
10倍系列稀
用PBS10低
系列稀释
数计算出回收菌数（c/mL）
按稀晕
要求浓度为取0.1ml滴于5.
OmLPBS液内，
b试验样品用无菌标准硬水稀释至规定浓度，制成（稀释液）试验样液。取试验样液1.0mL与中和剂9.0mL混合，作用10min后制成中和产物7.2.3.2中和剂评价规定
a）1组不长菌或明显少于2组；
b）2组有菌且较第一组为多
同时菌数明显少于3、4、5组，1、2组菌数符合表5中和剂鉴定试验合格标准中对第1组与第2组菌落数的要求第1组平板平均菌落数
>10）
第2组平板平均菌落数
PBS+中剂
各1.0mL接
种平板
回收菌数为
c）3、4×5组菌数相似，回收菌量在1×10~fu/mL~9×10cfu/mL，并且其组间误差率应不未于15%。6维无菌生长
e）三组平均菌数—（3组菌数+4组菌数+5组菌数）+3（三组平均菌数-3组菌数/三组平均菌数-4组南数|+组平均菌数-5组菌数）+3f）误差率（%）
组平均菌激
符合上述所有评价项目的中和剂表明可消除试验样品对指示菌的作用，中和剂与试验样品的中和产物对指示菌无毒害，判定为该试验样品的中和剂。7.2.4杀菌试验操作步骤
a）用PBS液将试验菌悬液（7.2.2.f）稀释，要求浓度为：取0.1mL滴于5.0mL对照样液（PBS)内，回收菌数为1×10°cfu/mL~9×10*cfu/mL；6
PDF文件使用“pdfFactory Pro”试用版本创建www.fineprint.cn匀；
QB/T2738-2012
b）将试验样品用无菌标准硬水稀释至规定的浓度：c）吸取试验样品原液或其稀释液5.0mL放入灭菌试管中，20c恒温5min（皂类产品30℃）：d）吸取试验菌液0.1mL加入到含5.0mL样品的试管中，迅速混匀，并立即计时e）作用至设定时问后，取试验菌与样品的混合液0.5mL，加入到含4.5mL经灭菌的中和剂中，混f）中和10min后，吸取样液（或作适当稀释后，取其中2~3个稀释度的稀释液）mL，置于灭菌平血内，每个样液或稀释液接种两个灭菌平血。月凉至40C～45℃的营养琼脂培养基（细菌）或沙氏琼脂培养基（白色念株菌）15mL作倾注，转动平使其先分均匀，琼脂凝固后翻转平Ⅲ，在（35土2）C培养48元（细菌）或72h（白色念株菌）后，做活菌落计数：g）以PBS代替试验样品，
同时按以上步骤操作，作为对照样品h）试验重复3次
7.2.5计算公式。
求其平均值。
杀菌率按公式
杀菌率（%）=
式中：
一对照样品平均菌落数
Ⅱ一试验样品平均菌落数。
结果保留整数。
7.2.6活菌计数中误差评价
活菌计数中平板间菌落数误差率、稀释度间菌落数误差率不宜超过10%，对误差率的自检，可按公式(2)~公式(7)计算
平板间菌落平均数
平板间菌落效平均
各平板脂落数之和
平板总数
平板间菌落平均数-各平板菌落数绝对值之和平板总数
平板间菌落数平均差
平板间菌落数误差率
平板间菌落平均数
新释度间菌落平均数
各稀释度平均菌落数之和
稀释度数
.（3）
...... (5)
稀释度间脂活数平均差-（稀释度间南搭平均数一各稀样度菌落数)的绝对值之和稀释度数
稀释度间菌落数误差率-稀释度间菌落数平均差x100
稀释度间菌落平均数
抗菌型日化产品的抗菌效果评价72.7
PDF文件使用“pdfFactory Pro”试用版本创建www.fineprint.cn（6)
QB/T2738-2012
抗菌效果评价见表6
试验菌种
作用时间/min
表6抗菌效果评价
作用浓度
效果评价（杀菌%）
产品有杀菌作用
试验菌一栏填入具体的测试菌种，对于多个菌种的测定结果，分别进行效果评价7.3抑菌型日化产品的抑菌效果检验方法（悬液定量法）7.3.1设备
同7.2.1。
7.3.2试剂
同722。
7.3.3抑菌试验操作步骤
a）用PBS液将试验菌悬液（7.2.2.D做适当稀释，要求浓度为：取0.1mL滴于5.0mL对照样液（PBS）内，回收菌数为1×10%~9×10*cfu/mLb）将试验样品用无菌标准硬水稀释至规定的浓度：c）吸取试验样品原液或其稀释液5.0mL放入灭菌试管中，20℃恒温5min（皂类产品30℃）：d）吸取试验菌液0.1mL加入到含5.0mL样品的试管中，迅速混匀，并立即计时：e）作用至设定时间后，取试验菌与样品混合液0.5mL，加入到含4.5mL经灭菌的PBS试管中，充分混匀：
f）放置10min后，吸取样液（或作适当稀释后，取其中2~3个稀释度的稀释液）1mL，置于灭菌平血内，每个样液或稀释度接种两个灭菌平血。用凉至40℃~45℃的营养琼脂培养基（细菌）或沙氏琼脂培养基（白色念株菌）15mL作倾注，转动平血，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平血，（35土2）C培养48h（细菌）或72h（白色念株菌）后：做活菌菌落计数：g）以PBS代替试验样品，同时按以上步骤操作，作为对照样品：h）实验重复3次，求其平均值。7.3.4计算公式
抑菌率按公式（8）计算
抑菌率（%）
式中：
1—对照样品平均菌落数
1——试验样品平均菌落数。
结果保留整数。
7.3.5误差评价
同7.2.6。
7.3.6抑菌型日化产品的抑菌效果评价抑菌效果评价见表7
PDF文件使用“pdfFactory Pro”试用版本创建www.fineprint.cn8
试验菌种
作用时间/min
表7抑菌效果评价
作用浓度
QB/T2738-2012
效果评价标准（抑菌率%）
产品有较强抑菌作用
试验菌一栏填入具体的测试菌种，对于多个菌种的测定结果，分别进行效果评价。7.4抗菌或抑菌型织物类洗涤剂抗菌或抑菌效果检验方法（模拟法）7.4.1原理
≥50%~90%
产品有抑菌作用
本方法通过模拟洗衣机的洗衣过程，检测洗衣粉（剂）等织物类洗涤产品的抗菌或抑菌效果。7.4.2设备
a）不锈钢转轴（由一条直径0.16cm不锈钢丝制成，如图1)：5cm
俯视图
侧面图
图1缠绕测试布条的不锈钢转轴
b）有金属螺盖的玻璃罐（容积为470mL，可高压灭菌，并可放入转轴的广口罐），将罐口覆盖牛皮纸，加盖，于121℃灭菌25min备用：c）转动速度为45r/min60r/min的滚动摄床：d）可调恒温水浴箱：
e）吸管（ImL，5mL，10mL）：
f）培养m：
名）铺有滤纸的玻璃培养Ⅲ
h）细菌保存管：
D）细菌培养箱：
）涡流振荡器；
k）棉布（32支纱/cm×32支纱/cm平织棉布）：1D别针、锻子、无菌手套，3mm~5mm玻璃珠，秒表、载体布片2.5cm~3.8cm（见测试棉布制备）9
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