GB/T42821—2023 贝类包纳米虫病诊断方法 中华人民共和国国家标准 发布机构：国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会 实施日期：2024-03-01 前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。文件由中华人民共和国农业农村部提出，全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。起草单位包括中国检验检疫科学研究院、中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站、广州海关。本文件主要起草人：吴绍强、王彩霞、白昌明、李清、邓艳、冯春燕、王崇明、阴鸿达、袁向芬、许晓琳、柏建山。 1 范围 本文件规定了贝类包纳米虫病（bonamiosis）的诊断方法，包括缩略语、试剂和材料、器材和设备，描述临床症状、采样、组织印片检查、组织病理检查、PCR检测、荧光PCR检测及综合判定方法。适用于牡蛎包纳米虫（Bonamia ostreae）和杀蛎包纳米虫（Bonamia exitiosa）引起的贝类包纳米虫病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用构成本文件必不可少的条款。注日期的引用文件，仅该日期对应版本适用；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。 - GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 - GB/T 18088 动物检疫采样 - GB/T 19495.2 转基因产品检测 3 术语与定义 本文件未新增需界定的术语和定义。 4 缩略语 - bp：碱基对（base pair） - Ct：扩增循环数（cycle threshold） - DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid） - dNTPs：脱氧核糖核苷三磷酸混合物（deoxyribonucleoside triphosphate mixture） - EDTA：乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid） - FAM：羧基荧光素（carboxyfluorescein） - PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction） - SDS：十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate） - Taq：水生栖热菌（Thermus aquaticus） - TE：Tris盐酸和EDTA缓冲溶液（EDTA·Tris·HCl） - Tris：三羟甲基氨基甲烷（tris(hydroxymethyl)aminomethane） 5 试剂和材料 本文件中所有化学试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 - 水：符合GB/T 6682中规定的一级水 - 丙酮：常温保存 - 中醇：常温保存 - 无水乙醇：常温保存 - 生理盐水（0.9%）：常温保存 - 10X PCR缓冲液（无Mg²⁺）：-20℃保存 - MgCl₂溶液（25 mmol/L）：-20℃保存 - dNTPs（A、T、G、C各2.5 mmol/L）：-20℃保存 - Taq DNA聚合酶（5 U/μl）：-20℃保存 - 姬姆萨染液、戴维森氏固定液：按附录A配制 - 蛋白酶K（20 mg/ml）：按附录A配制 - 10% SDS：按附录A配制 - 乙酸铵（10 mol/L）：按附录A配制 - 酚/三氮甲烷/异戊醇混合液：配制比例25:24:1 - 乙醇溶液（75%）：按附录A配制 - TE缓冲液：按附录A配制 - 1X电泳缓冲液：按附录A配制