ICS 67.040 X 04 中华人民共和国国家标准 GB/T 37512—2019 粮油检验 实际与理论ECN42甘三酯含量差值的测定 （Inspection of grain and oils—Determination of the difference between actual and theoretical content of triacylglycerols with ECN42） 发布：2019-05-10 实施：2019-12-01 发布单位：国家市场监督管理总局、中国国家标准化管理委员会 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家粮食和物资储备局提出，由全国粮油标准化技术委员会（SAC/TC 270）归口。 本标准起草单位：国家粮食局科学研究院。 主要起草人：张蕊、薛雅琳、张冰。 1 范围 本标准规定了油脂中实际等效碳数42（ECN42HPLC）甘三酯含量与理论等效碳数42（ECN42理论）甘三酯含量之间绝对差值的测定方法。 本标准适用于橄榄油，可用于检测各类橄榄油中是否掺入少量富含亚油酸的籽油。 注：ECN42HPLC由高效液相色谱法测得，ECN42理论由气相色谱法测定脂肪酸组成后计算得到。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡注明日期的引用文件，仅该版本适用于本文件；凡未注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB 5009.168 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定 GB/T 23347 橄榄油、油橄榄果渣油 COI/T.20/Doc.No.24 橄榄油和橄榄果渣油脂肪酸甲酯制备（Preparation of the fatty acid methyl esters from olive oil and olive-pomace oil） 3 原理 ECN42理论甘三酯含量及其与ECN42HPLC甘三酯含量的差值，通过多种方法协同计算获得，包括：气相色谱法测定脂肪酸组成、计算理论ECN42甘三酯含量以及高效液相色谱法测定实际ECN42甘三酯含量。 对于真实橄榄油，高效液相色谱法测得的实际ECN42甘三酯含量与由脂肪酸组成计算得到的理论值之间的差值应在规定范围内。当差值超过相应等级橄榄油的限值时，表明样品中可能掺入籽油。 4 仪器设备 4.1 圆底烧瓶：250 mL和500 mL。 4.2 烧杯：100 mL。 4.3 玻璃色谱柱：内径21 mm，长度450 mm，带旋塞，上端为标准内磨口。 4.4 分液漏斗：250 mL，底部为标准外磨口，与色谱柱配套。 4.5 玻璃棒：长度600 mm。 4.6 玻璃漏斗：直径80 mm。 4.7 容量瓶：50 mL。 4.8 容量瓶：20 mL。 4.9 旋转蒸发器。 4.10 高效液相色谱仪：配备柱温控制装置。 4.11 注射器：10 μL。 4.12 检测器：示差折光检测器，灵敏度折光指数至少为10⁻⁴。 4.13 不锈钢色谱柱：长度250 mm，内径4.5 mm，填料粒径5 μm，含碳量22%～23%的十八烷基键合硅胶，应保证三油酸甘油酯与相邻色谱峰良好分离。 4.14 样品瓶：2 mL，带孔旋盖（Teflon垫）。 5 试剂 除另有说明外，所用试剂均为分析纯。 5.1 石油醚：沸程40℃～60℃，色谱纯，或正己烷。 5.2 乙醚：无过氧化物，新蒸馏。 5.3 洗脱液：用于柱色谱纯化油脂，石油醚与乙醚按体积比87:13配制。 5.4 硅胶：70目～230目，型号Merck 7734，含水量5%（质量分数）。 5.5 玻璃棉。 5.6 丙酮：色谱级。 5.7 乙腈或丙腈：色谱级。 5.8 流动相：乙腈与丙酮按适当比例混合（初始比例50:50，可调整以获得最佳分离效果），或使用丙腈。使用前需脱气，必要时反复脱气。 5.9 溶剂：丙酮。 5.10 甘三酯参考物质：可选用商品化甘三酯（如三棕榈酸甘油酯、三油酸甘油酯等），用于确定保留时间；也可参考附录中相关色谱图。 注：甘三酯的洗脱顺序可根据等效碳数（ECN）确定。ECN定义为ECN = CN - 2n，其中CN为碳原子数，n为双键数。若进一步区分油酸、亚油酸和亚麻酸的双键数，可采用更精确的计算公式进行修正。