ICS 07.060；13.020 Z19 中华人民共和国海洋行业标准 HY/T 216—2017 河豚毒素检测方法 Determination of tetrodotoxin 2017-02-21 发布 2017-06-01 实施 国家海洋局 发布 前言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。本标准由国家海洋局第三海洋研究所提出，由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC283）归口。 本标准起草单位：国家海洋局第三海洋研究所、国家海洋局海洋标准计量中心。 本标准主要起草人：陈伟珠、易瑞灶、袁玲玲、洪碧红、张怡评、洪专、晋文慧。 警告 河豚毒素为剧毒固体粉末，使用时应佩戴口罩和手套，避免吸入。配制溶液时避免与人体直接接触，如不慎接触皮肤或眼部，应立即用大量清水冲洗，严重时应及时就医。 1 范围 本标准规定了贝类、鱼类（不含其制品）中河豚毒素的高效液相色谱荧光检测方法。 本标准适用于贝类和鱼类中河豚毒素的测定。 本方法的检出限为 0.1 mg/kg，定量限为 0.25 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅适用于该版本；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法 3 术语和定义 3.1 河豚毒素（tetrodotoxin，TTX） 某些鱼类体内所含的外源性神经毒素，主要存在于血液和内脏中。小剂量具有麻痹和镇痛作用，剂量稍大即可致命。 4 原理 利用河豚毒素在弱酸中可溶的性质进行提取，并在强碱条件下生成具有荧光性的衍生物。采用柱后衍生的高效液相色谱-荧光检测方法，根据保留时间进行定性分析，根据峰面积进行定量分析。 5 试剂 除非另有说明，分析中所用试剂均为分析纯，水为超纯水或同等纯度水。 5.1 辛烷磺酸钠（色谱纯）。 5.2 二水合磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）。 5.3 十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。 5.4 氢氧化钠（NaOH）。 5.5 乙酸（色谱纯）。 5.6 辛烷磺酸钠磷酸盐缓冲液：称取辛烷磺酸钠 0.540 g、二水合磷酸二氢钠 3.900 g、十二水合磷酸氢二钠 8.954 g，加水定容至 500 mL。溶液经 0.45 μm 微孔滤膜过滤。 5.7 氢氧化钠溶液：称取 160 g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至 1 L，浓度为 4 mol/L，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤。 5.8 0.1% 乙酸溶液：乙酸与水按体积比 1:1000 配制，室温保存。 5.9 0.03% 乙酸溶液：乙酸与水按体积比 3:10000 配制，现用现配。 5.10 标准储备液：称取河豚毒素标准样品 10 mg（精确至 0.01 mg），置于 100 mL 容量瓶中，用 0.03% 乙酸溶液溶解并定容至刻度，浓度为 0.100 mg/mL。储存于玻璃容器中，在 4℃±2℃条件下可保存 1 个月。 6 仪器与设备 6.1 组织匀浆器。 6.2 数显控温搅拌器。 6.3 高速离心机（转速不小于 12000 r/min）。 6.4 配有荧光检测器及柱后衍生装置的液相色谱仪。 6.5 微孔滤膜（0.45 μm）。 6.6 分析天平（感量 0.01 mg）。 6.7 分析天平（感量 0.001 g）。 6.8 水浴锅。 7 样品的制备和保存 7.1 样品的保存与预处理 新鲜贝类样品应清洗、沥干并去壳；新鲜鱼类样品应清洗后去皮取鱼肉。未能及时处理的样品应在适当条件下保存，以防止样品变质。