中华人民共和国农业行业标准 NY/T 300—1995 有机肥料速效磷的测定 柠檬酸浸提-钒钼黄比色法 1 主题内容与适用范围 本标准规定了测定有机肥料速效磷的柠檬酸浸提-钒钼黄比色法。本标准适用于含泥质有机肥料中速效磷含量的测定。 2 引用标准 GB/T 6682 分析实验室用水规格及试验方法 3 测定原理 柠檬酸是一种弱酸，它提取的磷被认为对作物有效。在一定酸度下，溶液中的磷与偏钒酸盐和钼酸盐作用，形成黄色三元杂多酸。在一定范围内其黄色深浅与磷的浓度正相关。 4 试剂 所用试剂除注明者外，均为分析纯。实验用水应符合 GB/T 6682 第五章中三级水的规格。 4.1 硫酸 (GB 625)。 4.2 柠檬酸：2% (m/V) 溶液 称取 20g 柠檬酸 (HG 3-1108) 溶于水并稀释至 1L。此液使用前配制。 4.3 硫酸：5% (V/V) 溶液 吸取 5mL 硫酸 (4.1) 缓缓加入到 90mL 水中，冷却后加水至 100mL。 4.4 氢氧化钠：10% (m/V) 溶液 称取 10g 氢氧化钠 (GB 629) 溶于 100mL 水中。 4.5 钒钼酸铵试剂 A液：称取 25g 钼酸铵 (GB 657) 溶于 400mL 水中； B液：称取 1.25g 偏钒酸铵 (HG 3—941) 溶于 300mL 沸水中，冷却后加 250mL 硝酸 (GB 626)，冷却。 在搅拌下将 A 液缓缓倾入 B 液中，用水稀释至 1L，混匀，贮于棕色瓶中。 4.6 二硝基酚指示剂：0.2% (m/V) 溶液 称取 0.2g 2,4-或 2,6-二硝基酚溶于 100mL 水中。 4.7 磷标准贮备溶液：0.1mg/mL 称取 0.4390g 经 105℃ 烘干 2h 的磷酸二氢钾 (GB 1274)，用水溶解后，转入 1L 容量瓶中，加入 5mL 硫酸 (4.1)，冷却后加水定容。此溶液 1mL 含磷 (P) 0.1mg。 4.8 磷标准溶液：50μg/mL 吸取 50.0mL 磷标准贮备溶液 (4.7) 放入 100mL 容量瓶中，加水定容。此溶液 1mL 含磷 (P) 50μg。 5 仪器、设备 通常用实验室仪器和设备。 5.1 天平：感量 0.01g。 5.2 振荡机（往返式，160～170r/min）或其他相同效果的振荡机。 5.3 分光光度计。 6 试样的制备 取风干的实验室样品充分混匀后，按四分法缩减至约 100g，粉碎，全部通过 1mm 孔径筛，装入样品瓶中，备用。 7 分析步骤 7.1 试样溶液制备 称取试样 5.00g 置于 200mL 塑料瓶或 250mL 三角瓶内，加入 100.0mL 25±1℃ 的柠檬酸溶液 (4.2)，加塞，在 25±1℃ 下振荡 30min，用无磷滤纸干过滤入干燥的三角瓶中，弃去最初少量滤液。同一试样做两个平行测定。 7.2 空白溶液制备 除不加试样外，应用的试剂和操作步骤同 7.1。 7.3 校准曲线绘制 吸取磷标准溶液 (4.8) 0，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00mL 于 7 个 50mL 容量瓶中，加入与吸取试验溶液等体积的空白溶液，加水至 30mL 左右，加入 2 滴 2,4-或 2,6-二硝基酚指示剂溶液 (4.6)，用氢氧化钠溶液 (4.4) 和硫酸溶液 (4.3) 调节溶液至刚呈微黄色，加入 10.0mL 钒钼酸铵试剂 (4.5)，摇匀，加水定容。此溶液为 1mL 含磷 (P) 0，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00μg 的标准溶液系列。在室温 15℃ 以上条件下，放置 20min 后（最长不超过 4h），在分光光度计上波长 440nm 处用 2cm 光径比色皿，以空白溶液调节仪器零点，进行比色，读取吸光度。根据磷浓度和吸光度绘制校准曲线或求出直线回归方程。 7.4 测定 吸取 5.00mL 试样溶液 (7.1) 放入 50mL 容量瓶中，加水至 30mL 左右，与标准溶液系列同条件显色、比色，读取吸光度。 8 分析结果的表述 速效磷 (P) 含量以 mg/kg 表示，按下式计算： 速效磷 (P) = (C · V · D) / m 式中： C ——— 由校准曲线查得或由回归方程求得显色液磷浓度，μg/mL； V ——— 显色液体积，50mL； D ——— 分取倍数，试样提取液体积/分取体积，100/5； m ——— 称取试样质量，g。 所得结果保留整数。 9 允许差 9.1 两平行测定结果的算术平均值作为测定结果。 9.2 两平行测定结果的差不得超过平均值的 5%。 附加说明： 本标准由农业部全国土壤肥料总站提出。 本标准由农业部全国土壤肥料总站、长沙土壤肥料测试中心负责起草。 本标准主要起草人：苏云辉、何平安、唐昆、蒋琛、陈守伦。 中华人民共和国农业部 1995-11-23 批准 1996-05-01 实施