GB 15193.7-2003小鼠精子畸形试验

小鼠精子畸形试验

Mice sperm abnormality test

GB 15193.7—2003

代替 GB 15193.7—1994

前 言

本标准全文强制。

本标准代替 GB 15193.7—1994《小鼠精子畸形试验》。

本标准与 GB 15193.7—1994 相比主要修改如下：

• ——在“范围”中增加了受试物的具体内容；食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加剂（含营养强化剂）、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等；

• ——在“剂量及分组”中：在高剂量组的设计方法中增加“急性毒性试验给予受试物最大剂量（最大使用浓度和最大灌胃容量）动物无死亡而求不出 LD₅₀ 时，则按以下顺序：a) 10 g/kg 体重；b) 人的可能摄入量的 100 倍；或 c) 一次最大灌胃剂量进行设计”；

• ——在“操作步骤”中：增加了“受试物配制”的内容；

• ——将“镜检”改为“阅片”，内容分别为：“阅片要求”、“精子畸形的类型”和“阅片注意事项”三部分；

• ——“统计方法及结果判定”分为为“数据处理”和“结果判定”。

自本标准实施之日起，GB 15193.7—1994 同时废止。

本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。

本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、浙江省医学科学院。

本标准主要起草人：徐晋康、龚幼菊、陈似兰。

本标准于 1994 年首次发布，本次为第一次修订。

小鼠精子畸形试验

1 范围

本标准规定了小鼠精子畸形试验的基本技术要求。

本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素的遗传毒性,检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等。

2 原理

小鼠精子畸形受基因控制,具有高度遗传性,许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常,已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。小鼠精子畸形试验可检测环境因子对精子生成、发育的影响,而且对已知的生殖细胞致突变物有高度敏感性,故本试验可用作检测环境因子在体内对生殖细胞的致突变作用。

3 仪器与试剂

全部试剂除注明外,均为分析纯,试验用水为蒸馏水。

3.1 实验室常用设备。

3.2 生物显微镜。

3.3 甲醇。

3.4 $1\% \sim 2\%$伊红染色液:称取伊红 $1\text{ g} \sim 2\text{ g}$,溶于 $100\text{ mL}$蒸馏水备用。

4 实验动物

成年雄性小鼠,$6$周 $\sim 8$周龄、体重 $25\text{ g} \sim 35\text{ g}$。动物购买后适应环境$3$天$\sim 5$天。

5 剂量及分组

受试物应设三个剂量组,最高剂量组原则上为动物出现严重中毒表现和/或个别动物出现死亡的剂量,一般可取 $1/2 \text{ LD}_{50}$,低剂量组应不表现出毒性,分别取$1/4$ 和$1/8 \text{ LD}_{50}$作为中、低剂量。急性毒性试验给予受试物最大剂量(最大使用浓度和最大灌胃容量)动物无死亡而求不出 $\text{LD}_{50}$时,高剂量组则按以下顺序:a)$10\text{ g/kg}$ 体重;b)人的可能摄入量的$100$倍;或c)一次最大灌胃剂量进行设计,再下设中、低剂量组。另设溶剂对照组和阳性对照组。每组至少有$5$只存活动物。阳性物可采用环磷酰胺 $40\text{ mg/kg}$体重 $\sim 60\text{ mg/kg}$体重、甲基磺酸甲酯(MMS)$50\text{ mg/kg}$ 体重或丝裂霉素C(MMC)$1.0\text{ mg/kg}$体重$\sim 1.5\text{ mg/kg}$ 体重经口或腹腔注射(首选经口)给予。

6 操作步骤

6.1 受试物配制

一般用蒸馏水作溶剂,如受试物不溶于水,可用食用油、医用淀粉、羧甲基纤维素等配成乳化液或悬浊液。受试物应于灌胃前新鲜配制,除非有资料表明以溶液(或悬浊液、乳浊液等)保存具有稳定性。

6.2 实验动物的处理