中华人民共和国水产行业标准

SC/T 7234—2020

白斑综合征病毒(WSSV)环介导等温扩增检测方法

Detection method by loop-mediated isothermal amplification for white spot syndrome virus

中华人民共和国农业农村部 发布

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由农业农村部渔业渔政管理局提出。

本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC 156)归口。

本标准起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所。

本标准主要起草人:黄健、张庆利、邱亮、徐婷婷、桑松文、万晓媛、梁艳、杨冰、李晨。

白斑综合征病毒(WSSV)环介导等温扩增检测方法

1 范围

本标准给出了白斑综合征病毒(WSSV)环介导等温扩增检测所需试剂和材料、器材和设备、操作步骤和结果判定的要求。

本标准适用于白斑综合征病毒的初筛检测。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 28630.2—2012 白斑综合征(WSD)诊断规程 第2部分：套式PCR检测法

3 缩略语

下列缩略语适用于本文件。

Bst酶：Bst 2.0热启动DNA聚合酶(Bst 2.0 WarmStart DNA Polymerase)

dNTP：脱氧核苷三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)

LAMP：环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification)

WSSV：白斑综合征病毒(white spot syndrome virus)

4 试剂和材料

4.1

除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和去离子水或蒸馏水或相当纯度的水。

4.2 引物：

WSSV-F3：5'-ACG GAC CGA GGA CCC AAA TCG A-3',10 μmol/L,-20℃保存；

WSSV-B3：5'-GCC TCT CCA ACA TCC TTC CC-3',10 μmol/L,-20℃保存；

WSSV-FIP：5'-GCG TGC GGG AAT GTT GCC CAT TTT GGC TAC CGA GTA ATC TGT G-3'，20 μmol/L，-20℃保存；

WSSV-BIP：5'-AA AGG CAA ACC CTC CCT TCC GTT TTC AAA CGG AAG AAA CTG CCT TCT GAC TGA CGC GCA ATA GTA ATG G-3'，20 μmol/L,-20℃保存。

4.3

10×Isothermal Amplification Buffer：商品化产品。稀释为1×工作液时内含 20 mmol/L Tris-HCl,50 mmol/L KCl,10 mmol/L (NH₄)₂SO₄,8 mmol/L MgSO₄,0.1% Tween® 20，或其他等效等温扩增缓冲液。

4.4

dNTP(各20 mmol/L)：含 dATP、dTTP、dCTP、dGTP 各 20 mmol/L，按附录 A 中 A.1 的规定执行，-20℃保存，避免反复冻融。

4.5

甜菜碱(Betaine)：浓度 5 mol/L，按 A.2 的规定执行，-20℃保存，避免反复冻融。

4.6

硫酸镁(MgSO₄)：浓度 100 mmol/L,-20℃保存。

4.7

BstDNA聚合酶：浓度 8 U/μL，-20℃保存。

4.8

核酸染料：100× Eva Green,商品化试剂，4℃保存，或使用其他等效试剂。

4.9

阳性对照为已知感染 WSSV 且 PCR 结果显示明显阳性的对虾组织,-20℃保存。

4.10

阴性对照为已知未感染 WSSV 且 PCR 结果显示阴性的对虾组织，-20℃保存。

4.11

空白对照为灭菌的去离子水。