农业农村部公告第323号-12-2020 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂玉米G1105E-823C及其衍生品种定性PCR方法

中华人民共和国国家标准

农业农村部公告第323号—12—2020

转基因植物及其产品成分检测
耐除草剂玉米G1105E-823C及其衍
生品种定性PCR方法

Detection of genetically modified plants and derived products—
Qualitative PCR method for herbicide-tolerant maize G1105E-823C
and its derivates

2020-08-04 发布 2020-11-01 实施

中华人民共和国农业农村部  发  布

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由中华人民共和国农业农村部提出。

本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：农业农村部科技发展中心、黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所、中国农业科学院生物技术研究所、天津市农业科学院、农业农村部环境保护科研监测所。

本标准主要起草人：温洪涛、张秀杰、关海涛、梁晋刚、丁一佳、张瑞英、章秋艳、李亮、兰青阔。

转基因植物及其产品成分检测

耐除草剂玉米 G1105E-823C 及其衍生品种定性 PCR 方法

1 范围

本标准规定了转基因耐除草剂玉米 G1105E-823C 转化体特异性普通 PCR 和实时荧光 PCR 两种检测方法。

本标准适用于转基因耐除草剂玉米 G1105E-823C 及其衍生品种，以及制品中 G1105E-823C 转化体成分的定性 PCR 检测。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

农业部 1485 号公告—4—2010 转基因植物及其产品成分检测 DNA 提取和纯化

农业部 1861 号公告—3—2012 转基因植物及其产品成分检测 玉米内标准基因定性 PCR 方法

农业部 2031 号公告—9—2013 转基因植物及其产品成分检测 抽样

NY/T 672 转基因植物及其产品检测 通用要求

3 术语和定义

农业部 1861 号公告—3—2012 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1

G1105E-823C转化体特异性序列 event-specific sequence of G1105E-823C

G1105E-823C 的外源插入片段 3'端与玉米基因组的连接区序列，包括转化载体 T-DNA 部分序列和玉米基因组序列。

4 原理

根据耐除草剂玉米 G1105E-823C 转化体特异性序列设计特异性引物及探针，对试样进行 PCR 扩增。依据是否扩增获得预期的 DNA 片段或典型扩增曲线，判断样品中是否含有耐除草剂玉米 G1105E-823C 转化体成分。

5 试剂和材料

除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水。

5.1 琼脂糖。

5.2 10 g/L 溴化乙锭(EB)溶液:

称取 1.0 g 溴化乙锭，溶解于 100 mL 水中，避光保存。

警告——溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废物。

注：根据需要可选择其他效果相当的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。

5.3 10 mol/L 氢氧化钠(NaOH)溶液:

在 160 mL 水中加入 80.0 g 氢氧化钠，溶解后，冷却至室温，再加水定容至 200 mL。

5.4 500 mmol/L 乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na₂)溶液(pH 8.0):

称取 18.6 g 乙二胺四乙酸二钠，加入 70 mL 水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液（见 5.3）直至 EDTA-Na₂完全溶解，用氢氧化钠溶液（见 5.3）调 pH 至 8.0，加水定容至 100 mL。在 103.4 kPa(121℃)条件下灭菌 20 min。

5.5 1 mol/L 三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)溶液(pH 8.0):

称取 121.1 g 三羟甲基氨基甲烷溶解于