SC/T 7229-2019鲤浮肿病诊断规程

中华人民共和国水产行业标准

SC/T 7229—2019

鲤浮肿病诊断规程

Code of diagnosis for carp edema virus disease(CEVD)

2019-08-01 发布2019-11-01 实施

前 言

SC/T 7229—2019

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由农业农村部渔业渔政管理局提出。

本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC 156)归口。

本标准起草单位:全国水产技术推广总站、北京市水产技术推广站。

本标准主要起草人:徐立蒲、余卫忠、张文、曹欢、王静波、王妹、潘勇、张锋、梁艳、王立新、李清。

鲤浮肿病诊断规程

1 范围

本标准给出了鲤浮肿病的缩略语、试剂和材料、仪器和设备以及临床症状，规定了采样、核酸检测及综合判定。

本标准适用于鲤浮肿病的流行病学调查、诊断、监测和检疫。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 18088 出入境动物检疫采样

SC/T 7103 水生动物产地检疫采样技术规范

3 缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CEV：鲤浮肿病毒（Carp edema virus, CEV）；

CEVD：鲤浮肿病（Carp edema virus disease, CEVD）。

4 试剂和材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

4.1 CEV阳性物质：由农业农村部指定的水生动物病原微生物菌（毒）种保藏机构提供。

4.2 水：符合GB/T 6682中一级水的要求。

4.3 无水乙醇：分析纯，使用前预冷到-20℃。

4.4 荧光PCR（TaqMan探针合成法）试剂（probe master mix）：商业试剂盒，-20℃保存。

4.5 套式PCR（Touchdown PCR）试剂（master mix）：商业试剂盒，-20℃保存。

4.6 缓冲液等温扩增反应体系组分（预混酶、探针试剂），-20℃保存。

4.7 Bst酶：-20℃保存，终浓度为8U/μL，避免反复冻融。

4.8 引物：荧光PCR和套式PCR引物浓度为10 μmol/L；TMAMP引物浓度为100 pmol/L，-20℃保存。

4.8.1 荧光PCR引物

上游引物 qF1：5'-AGTTTTTGTAACATTGTAGCATTTCG-3'；

下游引物 qR1：5'-GATTCCTCAAGGCAGTTTACAGTAAA-3'；

探针：5'-FAM-AGAGTTTGTTTTCTTGCCATACAAACT-BHQ1-3'；

扩增 CEV P4a 蛋白基因中 76 bp 的片段。

4.8.2 套式PCR引物

4.8.2.1 F1和R1扩增CEV P4a蛋白基因中的548bp片段，F2和R2从该片段中再扩增180 bp片段。

上游引物 F1：5'-GCTGGTTGCAACCATTTGGAGA-3'；

下游引物 R1：5'-TGCAGGTTGCTCCTAATTCCT-3'；

上游引物 F2：5'-GCTGGCTGCACTTTTAGGAGG-3'；

下游引物 R2：5'-TGCAAGTTTATTTCGATGCCA-3'。

4.8.2.2 BF和BR扩增CEV P4a蛋白基因中的528bp片段，IF和IR从该片段中再扩增478 bp片段。

上游引物 BF：5'-ATGGAGTATCCAAAGTACTTAG-3'；