NY/T 2287-2012水稻细菌性条斑病菌检疫检测与鉴定方法

前 言

本标准按照 GB 1.1 给出的规则起草。

本标准由农业部种植业管理司提出。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)归口。

本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、江苏省植物保护站、南京农业大学。

本标准主要起草人：王福祥、龚伟荣、胡白石、刘慧、褚姝频、李潇楠、胡婕、朱莉。

水稻细菌性条斑病菌检疫检测与鉴定方法

1 范围

本标准规定了农业植物检疫中水稻细菌性条斑病菌检测鉴定的技术方法。

本标准适用于水稻细菌性条斑病的检测鉴定。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB 8371—2009 水稻种子产地检疫规程

GB 15569—2009 农业植物调运检疫规程

3 原理

水稻细菌性条斑病是为害水稻的重要细菌病害，属国内植物检疫性有害生物。水稻细菌性条斑病菌的田间症状、菌落形态特征、致病性测试、血清学反应和PCR反应等特征是检测与鉴定的重要依据。

4 试剂与材料

无水磷酸氢二钠（Na₂HPO₄）、无水磷酸氢二钾(K₂HPO₄)、无水磷酸二氢钾(KH₂PO₄)、碳酸钠(Na₂CO₃)、碳酸氢钠(NaHCO₃)、氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、氯化镁(MgCl₂)、无水亚硫酸钠(Na₂SO₃)、氢氧化钠(NaOH)、氢氧化钾(KOH)、碘化钾(KI)、七水硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)、叠氮化钠(NaN₃)、草酸铵[(NH₄)₂C₂O₄]、对硝基苯磷酸二钠(PNPP)、无菌水、乙醇、市售抗体、市售酶标抗体、市售PCR试剂等。检验中所需的其他试剂与培养基，参见附录A。

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。

5 仪器及用具

超净工作台、电子天平、磁力搅拌器、高压灭菌锅、培养箱、水浴锅、生物显微镜、体式显微镜、小型粉碎机、高速台式离心机、酶标仪、电泳仪、紫外分光光度计、常规PCR仪、凝胶成像系统、冰箱、超低温冰箱、超纯水器或纯水器、恒温干燥箱、微量移液器等。

6 取样方法

6.1 叶片取样

田间发现水稻细菌性条斑病典型或疑似症状的叶片时(见附录B)，直接采样检验。

6.2 种子取样

对调运中的种子，按照GB 15569—2009中6.2的要求抽样。

7 检验鉴定

7.1 症状识别

在水稻生长期按照GB 8371—2009中8.1的要求进行田间调查，与水稻细菌性条斑病为害的典型症状进行比较(见附录B)，符合典型症状的可进行症状鉴定。如发现疑似症状，可采用常规鉴定、