SN/T 3932-2014出口食品中蜡样芽孢杆菌快速检测方法 实时荧光定量PCR法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 3932—2014

出口食品中蜡样芽孢杆菌快速检测方法
实时荧光定量 PCR 法

Rapid detection of Bacillus Cereus for export foods—
Real-time PCR method

2014-04-09 发布2014-11-01 实施

中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局 发 布

前 言

本标准依照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、上海交通大学、中华人民共和国湖北出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。

本标准起草人：杨捷琳、施春雷、谌鸿超、曾宪东、杨柳、贾俊涛、何宇平、潘良文、张继伦、姜英辉。

出口食品中蜡样芽孢杆菌快速检测方法
实时荧光定量 PCR 法

1 范围

本标准规定了出口食品中蜡样芽孢杆菌的实时荧光定量 PCR 检测方法。

本标准适用于出口食品中蜡样芽孢杆菌的快速检测。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 4789.14 食品卫生微生物学检验 蜡样芽孢杆菌检验

3 测定方法

3.1 方法提要

本标准采用锁核酸苷（LNA）探针特异性检测蜡样芽孢杆菌。该探针利用了单核苷酸多态性（SNP, Single Nucleotide Polymorphism）的原理，利用蜡样芽孢杆菌区别于其他种芽孢杆菌的特异位点进行检测。

3.2 试剂和材料

除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，水为无菌双蒸水。

3.2.1 引物：

5'-CCTTCTTCAAGTTCAAATCTCG-3'

5'-GTYGTAATGACAGGTGATGGA-3'

3.2.2 锁核酸苷（LNA）探针：

FAM-5'-FAM-TGTAAT*GG*TGTTT*CG*CAA-BHQ1-3'

注：*表示该位点为锁核酸苷位点。

3.2.3 Taq DNA 聚合酶。

3.2.4 dNTP：dATP、dTTP、dCTP、dGTP。

3.2.5 DNA 提取试剂：0.1% Chelex 100 水溶液。

3.2.6 10 \times PCR 缓冲液：200 mmol/L Tris-HCl (pH 8.4), 200 mmol/L氯化钾，15 mmol/L氯化镁。

3.2.7 LB培养基：称取酪蛋白胨 10 g，酵母提取物 5 g, NaCl 10 g，溶于 1 L水中，调节 pH值至 7.0，高压灭菌。

3.2.8 蜡样芽孢杆菌质控菌株：ATCC 14579或等效菌株。

3.3 仪器和设备

3.3.1 荧光 PCR 仪。

3.3.2 离心机：20\,000 r/min。