SN/T 1632.3-2005奶粉中阪崎肠杆菌检验方法　第3部分:荧光PCR方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1632.3—2005

奶粉中阪崎肠杆菌检验方法

第3部分：荧光PCR方法

Detection of Enterobacter sakazakii from dehydrated powdered milk—
Part 3: Real-time PCR method

2005-08-18发布2006-02-01实施

中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局发布

前 言

SN/T 1632《奶粉中阪崎肠杆菌检验方法》分为三个部分：

• ——第1部分：分离与计数方法；
• ——第2部分：PCR方法；
• ——第3部分：荧光PCR方法。

本部分为SN/T 1632的第3部分。

本部分的附录A、附录B为规范性附录。

本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳太太基因工程有限公司。

本部分起草人：吕敬章、赵贵明、谢丽琪、郑卫平、林镜中、肖性龙。

本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

奶粉中阪崎肠杆菌检验方法
第3部分:荧光PCR方法

1 范围

SN/T 1632的本部分规定了奶粉中阪崎肠杆菌的荧光PCR检验方法。

本部分适用于奶粉中阪崎肠杆菌的快速检验,其他食品可参照执行。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过SN/T 1632本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本部分。

SN/T 1632 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第1部分:分离与计数方法

3 定义、术语和缩略语

下列术语、定义和缩略语适用于SN/T 1632的本部分。

3.1

阪崎肠杆菌 Enterobacter sakazakii

肠杆菌科肠杆菌属革兰氏阴性无芽孢杆菌,周身鞭毛有动力,大多数产黄色素,具有α-葡萄糖苷酶活性。

3.2

聚合酶链式反应 polymerase chain reaction

聚合酶链式反应,简称PCR。使用两段(20个~24个核苷酸)寡核苷酸作为反应的引物,这两段寡核苷酸引物的序列应不发生互补作用。但它们可以和称为模板的待测DNA两条链上的位点分别发生互补。反应液由包括含有镁离子的反应缓冲液、4种单核苷酸(dNTP)、模板DNA及引物。在DNA聚合酶催化下,通过温度的变化(DNA变性、退火及延伸)而合成两个互补位点之间的DNA片断。这样的反应反复进行,使第一个循环产生的DNA片段得以扩增。经30左右个循环,扩增倍数达$10^6$。

3.3 缩略语

3.3.1 PCR;polymerase chain reaction,简称PCR。

3.3.2 DNA;deoxyribonuleic acid,脱氧核糖核酸。

3.3.3 dNTP;deoxyribonucleoside triphosphate,脱氧核苷酸三磷酸。

3.3.4 dATP;deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。

3.3.5 dCTP;deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸。

3.3.6 dGTP;deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。

3.3.7 dTTP;deoxythymidine triphosphate,脱氧胸苷三磷酸。

3.3.8 dUTP;deoxyuridine triphosphate,脱氧乌苷三磷酸。

3.3.9 UNG:uracil N-glycosylase,尿嘧啶N-糖基化酶。

3.3.10 Tris;tris(hydroxymethyl) aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。

3.3.11 Ct值:每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。