GB/T 22971-2008牛奶和奶粉中安乃近代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

前 言

本标准附录 A、附录 B为资料性附录。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口

本标准负责起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。

本标准主要起草人:沈金灿、谢丽琪、肖陈贵、朱玉兰、熊贝贝、林燕奎、庞国芳。

牛奶和奶粉中安乃近代谢物
残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

1 范围

本标准规定了牛奶和奶粉中安乃近代谢物4-甲酰氨基安替比林(4-formylaminoantipyrine)、4-乙酰氨基安替比林(4-acetylaminоantipyrine)、4-甲基氨基安替比林(4-methylaminoantipyrine)和4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine)的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛奶和奶粉中4-甲酰氨基安替比林、4-乙酰基氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-氨基安替比林残留量的测定。

本标准的方法检出限为：对于牛奶，4-甲酰氨基安替比林、4-氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-乙酰基氨基安替比林均为5.0 $\mu g/kg$；对于奶粉，4-甲酰氨基安替比林、4-氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-乙酰基氨基安替比林均为40.0 $\mu g/kg$。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1—2004, ISO 5725-1:1994, IDT)

GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004, ISO 5725-2:1994, IDT)

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682—2008, ISO 3696:1987, MOD)

3 原理

牛奶和奶粉中安乃近代谢物残留加入Tris溶液后用乙腈提取，提取液经正己烷脱脂净化，液相色谱-串联质谱仪测定。4-乙酰氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-氨基安替比林采用外标法定量，4-甲基氨基安替比林采用内标法进行定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇：色谱纯。

4.2 异丙醇。

4.3 乙腈：色谱纯。

4.4 三羟甲基氨基甲烷(Tris)。

4.5 乙酸铵：色谱纯。

4.6 1.0 mol/L Tris溶液：准确称取12.1 g三羟甲基氨基甲烷，用水定容至100 mL

4.7 样品定容溶液：甲醇-水(1+19)。

GB/T 22971—2008

4.8 5 mmol/L 乙酸铵溶液：准确称取 0.385 g 乙酸铵，用 950 mL 水溶解，用乙酸将溶液调至 pH 3.0，再加水定容至 1 000 mL。

4.9 4-甲基氨基安替比林(4-methylaminoantipyrine, C₁₂H₁₅N₃O, CAS: 519-98-2)、4-乙酰氨基安替比林(4-acetylaminоantipyrinc, C₁₃H₁₅N₃O₂, CAS: 83-15-8)、4-甲酰氨基安替比林(4-formylaminoanti-pyrine, C₁₃H₁₃N₃O₂, CAS: 1672-58-8)和 4-氨基安替比林(4-aminoantipyrinc, C₁₁H₁₃N₃O, CAS: 83-07-8)标准物质：纯度≥99%。

4.10 内标标准物质：4-异丙基氨基安替比林(4-isopropylantipyrine, C₁₄H₁₉N₃O)，纯度≥99%。

4.11 100 mg/L 标准储备溶液：准确称取适量的各种安乃近代谢物标准物质(4.9)，用甲醇(4.1)配制成浓度为 100 mg/L 的标准储备溶液，避光 -18 ℃保存。

4.12 1.0 mg/L 混合标准储备溶液：吸取每种适量标准储备溶液(4.11)，用甲醇稀释成 1.0 mg/L 的混合标准工作溶液，避光 -18 ℃保存。

4.13 100 mg/L 内标储备溶液：准确称取适量的内标标准物质(4.10)用甲醇(4.1)配制成浓度为 100 mg/L 标准储备溶液，避光 -18 ℃保存。

4.14 1.0 mg/L 内标工作溶液：吸取适量的内标储备溶液(4.13)，用甲醇稀释成 1.0 mg/mL 的内标标准工作溶液，避光 -18 ℃保存。

4.15 基质混合标准工作溶液：吸取适量的混合标准储备溶液(4.12)和适量内标工作溶液(4.14)，用空白样品提取液配成浓度为 1.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L、40.0 μg/L、100 μg/L 和内标浓度为 10.0 μg/L 的基质混合标准工作溶液。当天配制。

4.16 滤膜：0.2 μm

5 仪器和设备

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。

5.2 旋转蒸发仪。

5.3 旋涡混匀器。

5.4 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。

5.5 移液器：10 μL～100 μL 和 100 μL～1 000 μL。

5.6 带刻度聚丙烯离心管：15 mL 和 50 mL，具塞。

5.7 低温离心机：转速大于 5 000 r/min，可制冷到 4 ℃。

5.8 容量瓶：25 mL。

5.9 鸡心瓶。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

取不少于 500 g 有代表性的牛奶或奶粉，充分混匀，分为两份，置于样品瓶中，密封，并作上标记。

6.2 试样保存

牛奶置于 4 ℃冰柜中避光保存，奶粉则在室温下置于干燥器保存。

7 测定步骤

7.1 提取

7.1.1 牛奶

称取 5 g 试样，精确至 0.01 g，置于 50 mL 带刻度的聚丙烯离心管(5.6)中，加入 100 μL 内标工作