本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。本标准适用于各类食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。 GB/T 4789.14-2003 食品卫生微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验 GB/T4789.14-2003 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 07.100.30
中华人民共和国国家标准
GB/T4789.14--2003
代替GB/T4789.14—1994
食品卫生微生物学检验
蜡样芽胞杆菌检验
Microbiological examination of food hygiene-ExaminationofBacilluscereus
2003-08-11发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
GB/T4789.14—2003
本标准对GB/T4789.14—1994《食品卫生微生物学检验本标准与GB/T4789.14—1994相比主要修改如下：蜡样芽胞杆菌检验》进行修订。按照GB/T1.1一2000对标准文本的格式和文字进行修改。修改并规范原标准中的“设备和材料”本标准自实施之日起，GB/T4789.14--1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人：白竞玉、付萍、杨宝兰、姚景会。本标准于1984年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。96
1范围
食品卫生微生物学检验
蜡样芽胞杆菌检验
本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。本标准适用于各类食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。2规范性引用文件
GB/T4789.14—2003
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB/T4789.28—2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料
3.1冰箱：0℃~4℃。
3.2恒温培养箱：36℃士1℃。
3.3恒温水浴锅：46℃土1℃。
3.4显微镜：10X100×。
3.5均质器或灭菌乳钵。
3.6架盘药物天平：0g~500g，精确至0.5g。3.7灭菌锥形瓶：500mL。
3.8灭菌试管：16mm×160mm。
灭菌吸管：1mL(具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。3.93
灭菌平培养血：直径90mm。
灭菌刀、剪、镊子等。
4培养基和试剂
4.1肉浸液肉汤培养基：GB/T4789.28—2003中4.1。4.2酪蛋白琼脂培养基：GB/T4789.28—2003中4.65。4.3动力-硝酸盐培养基：GB/T4789.28--2003中4.72。4.4缓冲葡萄糖蛋白陈水：GB/T4789.28—2003中3.4。4.5血琼脂培养基：GB/T4789.28-2003中4.6。4.63%过氧化氢溶液。
4.7甲萘胺-乙酸溶液：GB/T4789.28--2003中3.17。4.8对氨基苯磺酸-乙酸溶液：GB/T4789.28—2003中3.17。4.9革兰氏染色液：GB/T4789.28—2003中2.2。4.10甘露醇卵黄多粘菌素（MYP)琼脂培养基：GB/T4789.28—2003中4.64。4.110.5%碱性复红染色液：GB/T4789.28—2003中2.8。97
GB/T4789.14—2003
4.12木糖-明胶培养基：GB/T4789.28—2003中4.66。5检验程序
蜡样芽胞杆菌检验程序见图1。
25g(mL)加225mL生理盐水
微成101~10-5的稀释液
37℃,18h~24h
选择性培养基
(菌数测定）
12h~20h
菌数计算
生长及菌落观察
6操作步骤
染色镜检
选择性培养基
(分离培养）
36℃±1
12h~20h
营养琼脂培养基
生化试验
菌株保存
6.1菌数测定
以无菌操作将检样25g（mL)，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1～10-的稀释液按GB/T4789.2测定。取各稀释液0.1mL，接种在两个选择性培养基-甘露醇卵黄多粘菌素（MYP)琼脂培养基上，用L形棒涂布于整个表面，置36℃士1℃培养12h~20h，选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇）周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。计数后，从中挑取五个此种菌落做证实试验，根据证实的蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克（毫升）样品中所含蜡样芽胞杆菌数。例如：将0.1mL10-4样品稀释液涂布于MYP平板上，其可疑菌落为25个，取五个鉴定，证实四个菌落为蜡样芽胞杆菌，则1g(mL)检样中所含蜡样芽胞杆菌数为：25×4/5×10°×10=2×106
6.2分离培养
取检样或稀释液划线分离于选择性培养基（MYP）上，置37℃培养12h～20h，挑取可疑的蜡样芽胞杆菌菌落（见6.1)接种于肉汤和营养琼脂做成纯培养，然后做证实试验。6.3证实试验
6.3:1形态观察
本菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在1μm或1um以上，芽胞呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中98
GB/T4789.14—2003
央或稍偏于端。
6.3.2培养特性
本菌在肉汤中生长混浊，常微有菌膜或壁环，振摇易乳化；在普通琼脂平板上其菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状，边缘不整齐。6.3.3生化性状及生化分型
6.3.3.1生化性状
本菌有动力：能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖，常能液化明胶和使硝酸盐还原；在厌氧条件下能发酵葡萄糖。6.3.3.2生化分型
根据蜡样芽胞杆菌对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验，分成不同型别，见表1。
表1蜡样芽胞杆菌生化分型
明胶液化
V-P反应
淀粉水解
硝酸盐还原
柠檬酸盐利用
与类似菌鉴别
本菌与其他类似菌的鉴别见表2。蜡样芽胞杆菌与其他类似菌的鉴别表2
炭疽芽胞杆菌
覃状芽胞杆菌
苏云金芽胞杆菌Www.bzxZ.net
蜡样芽胞杆菌
巨大芽胞杆菌
过氧化氢酶
硝酸盐还原
酪蛋白分解
卵黄反应
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葡萄糖利用（厌氧）
甘露醇
已知致病菌特性
巨大芽胞杆菌
表2（续）
蜡样芽胞杆菌
产生肠毒素
苏云金芽胞托菌
对昆虫致病
的内毒紊结晶
草状芽胞杆菌
假根样生长
炭疽芽胞杆菌
对动物和人致病
注：+90%～100%的菌株阳性；-90%～100%的菌株阴性！±大多数菌株阳性；干大多数菌株阴性。本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似，但后者可籍细胞内产生蛋白质毒素结晶加以鉴别。其检查方法如下：取营养琼脂上纯培养物少许，加少量蒸馏水涂于玻片上，待自然干燥后用弱火焰固定，加甲醇于玻片上，半分钟后倾去甲醇，置火焰上干燥，然后滴加0.5%碱性复红液，并用酒精灯加热至微见蒸气维持1.5min，移去酒精灯，将玻片放置半分钟，倾去染液，置洁净自来水充分漂洗、晾干、镜检。在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶小体（如未形成游离芽胞，培养物应放室温再保存1d～2d后检查），如有即为苏云金芽胞杆菌，蜡样芽胞杆菌检查为阴性。100
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