本标准规定了食品中常见的常见产毒霉菌的鉴定方法。本标准适用于曲霉属、青霉属、镰刀菌属及其他菌属的产毒霉菌鉴定。 GB/T 4789.16-2003 食品卫生微生物学检验 常见产毒霉菌的鉴定 GB/T4789.16-2003 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS07.100.30
中华人民共和国国家标准
GB/T4789.16—2003
代替GB/T4789.16—1994
食品卫生微生物学检验
常见产毒霉菌的鉴定
Microbiological examination of food hygiene-Identification of common mycotoxin producing fungi2003-08-11发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
GB/T4789.16—2003
本标准对GB/T4789.16—一1994《食品卫生微生物学检验常见产霉菌的鉴定》进行修订。本标准与GB/T4789.16—1994相比主要修改如下：按照GB/T1.1一2000对标准文本的格式和文字进行修改。修改并规范原标准中的“设备和材料”。本标准自实施之日起，GB/T4789.16一1994同时废止。本标准的附录A、附录B、附录C和附录D为资料性附录本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人：刘兴介、罗雪云、李风琴、李玉伟。本标准于1984年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。108
1范围
食品卫生微生物学检验
常见产毒霉菌的鉴定
本标准规定了食品中常见的常见产毒霍菌的鉴定方法。本标准适用于曲霖属、青藓属、镰刀菌属及其他菌属的产毒霖菌鉴定。2规范性引用文件
GB/T4789.16—2003
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标推的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.28—2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料
冰箱0℃~4℃。
3.2恒温培养箱：25℃~28℃。
3.3显微镜：10×～100×。
3.4目镜测微计。
3.5物镜测微计。
3.6无菌接种罩。
3.7放大镜。
3.8滴瓶。
3.9接种勾针。
3.10分离针。
3.11载玻片。
2盖玻片：18mm×18mm。
3.13灭菌刀子。
4培养基和试剂
4.1乳酸-苯酚液：按GB/T4789.28-2003中3.24规定。4.2察氏培养基：按GB/T4789.28—2003中4.77规定。4.3马铃薯-葡萄糖琼脂培养基：按GB/T4789.28--2003中4.78规定。4.4马铃薯琼培养基：按GB/T4789.28—2003中4.79规定。4.5玉米粉琼脂培养基：按GB/T4789.28—2003中4.81规定。109
GB/T4789.16—2003
5操作步骤
5.1菌落的观察：为了培养完整的巨大菌落以供观察记录，可将纯培养物点植于平板上。方法是：将平板倒转，向上接种一点或三点，每菌接种两个平板，倒置于25℃～28℃温箱中进行培养。当刚长出小菌落时，取出个平血，以无菌操作，用小刀将菌落连同培养基切下1cm×2cm的小块，置菌落一侧，继续培养，于5d～14d进行观察。此法代替小培养法，可直接观察子实体着生状态。5.2斜面观察：将霉菌纯培养物划线接种（曲霉、青霉）或点种（链刀菌或其他菌）于斜面，培养5d～14d，观察菌落形态，同时还可以将菌种管置显微镜下用低倍镜直接观察孢子的形态和排列。5.3制片：取载玻片加乳酸-苯酚液一滴，用接种针钩取一小块霉菌培养物，置乳酸-苯酚液中，用两支分离针将培养物撕开成小块，切总涂抹，以免破坏霉菌结构；然后加盖玻片，如有气泡，可在酒精灯上加热排除。制片时最好是在接种罩内操作，以防孢子飞扬。5.4镜检：观察霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的排列等，并做详细记录。5.5报告：根据菌落形态及镜检结果，参照以下各种霉菌的形态描述及检索表，确定菌种名称。6各种霉菌的形态特征
6.1曲霉属（Aspergillus)
本属的产霉菌主要包括黄曲、寄生曲、杂色曲舞、构巢曲霉和棕曲霉。这些霉菌的代谢产物为黄曲舞毒素、杂色曲素和棕曲霉毒素。曲霉属的颜色多样，而且比较稳定。营养菌丝体由具横隔的分枝菌丝构成，无色或有明亮的颜色，一部分埋伏型，一部分气生型。分生孢子梗大都无横隔，光滑、粗糙或有麻点。梗的顶端膨大形成棍棒形、椭圆形、半球形或球形的顶囊，在顶囊上生出一层或二层小梗，双层时下面一层为梗基，每个梗基上再着生两个或几个小梗。从每个小梗的顶端相继生出一串分生孢子。由顶囊、小梗以及分生孢子链构成一个头状体的结构，称为分生孢子头。分生孢子头有各种不同颜色和形状，如球形、放射形、棍棒形或直柱形等。曲属只少数种形成有性阶段，产生封闭式的闭壳。某些种产生菌核或菌核结构。少数种可产生不同形状的壳细胞。
6.1.1黄曲每（A.flavus）
属于黄曲群，在察氏琼脂培养基上菌落生长较快，10d~14d直径3cm～4cm或4cm～7cm，最初带黄色，然后变为黄绿色，老后颜色变暗，平坦或有放射状沟纹，反面无色或带褐色。在低倍显微镜下观察可见分生孢子头疏松放射状，继变为疏松柱状。分生孢子梗多从基质生出，长度一般小于1mm。有些菌丝产生带褐色的菌核。制片镜检观察可见分生孢子梗极粗糙，直径10μm20μm。顶囊烧瓶形或近球形，直径10μm~65um，一般多为25um45um。全部项囊着生小梗，小梗单层、双层或单、双层同时生在-个顶囊上，梗基（6μm~10μm）×（4μm~5.5μm），小梗（6.5μm~10μm）×（3μm~5μm）。分生孢子球形、近球形或稍作洋梨形，3μm～6μm，粗糙（见图1)。黄曲舞产生黄曲霉毒素，该毒素能引起动物急性中毒死亡，如长期食用含微量黄曲毒素的食物，能引起肝癌。
一双层小梗的分生孢子头；
2———单层小梗的分生孢子头；3——分生孢子梗的基部（足细胞）；4—双层小梗的细微结构；
5——分生孢子。
图1黄曲霉
GB/T4789.16—2003
6.1.2寄生曲（A，parasiticus）亦属于黄曲霉群，8d～10d菌落2.5cm～4cm，平坦或带放射状沟纹，幼时带黄色，老后呈暗绿色，反面奶油色至淡褐色。低倍显微镜下观察见分生孢子头疏松放射状，直径400um～500μm，分生孢子梗长短不，一般为200μm～1000μm，制片镜检观察，见分生孢子梗光滑或粗糙，近顶囊处宽10μm~12μm，顶囊近球形或烧瓶形或杆状，直径20μm~35μm，小梗单层，（7μm~9μm）×（3μm~4μm），排列紧密。分生孢子球形，极粗糙，具小刺，直径3.5μm5.5μm，未报道过产生菌核。寄生曲的菌株都能产生黄曲霉毒素。6.1.3杂色曲霉（A.versicolor)属于杂色曲群。在察氏琼脂培养基上菌落生长局限，14d直径2cm～3cm，绒状，絮状或两者同时存在。颜色变化相当广泛，不同菌系可能局部淡绿、灰绿、浅黄甚至粉红色，反面近于无色至黄橙色或玫瑰色，有的菌落有无色至紫红色的液滴。分生孢子头疏松放射状，大小为100um～125um。分生孢子梗长度可达500μm~700um，宽12μm~16um，光滑，无色或略带黄色。顶囊半椭圆形至半球形，上半部或四分之三部位上着生小梗。小梗双层，梗基（5.5μm8μm）×3μm，小梗（5μm～7.5μm）×(2μm~2.5pm），分生孢子球形，粗糙，直径2.5um~3μm或稍大。有些菌系产生球形的壳细胞（见图2)。
杂色曲霉产生杂色曲霉素，该毒索引起肝和肾的损害并能引起肝瘤。111
GB/T4789.16—2003
一分生孢子头：
一分生孢子；
一壳细胞。
6.1.4构巢曲霉（A，nidulans)
图2杂色曲舞
属于构巢曲霉群。菌落生长较快，14d直径5cm～6cm，绒状，绿色，有的菌系由于产生较多的闭囊壳而显现黄褐色，反面紫红色。分生孢子头短柱形，（40μm~80μm）×（25μm~40μm）。分生孢子梗极短，常弯曲，一般75μm~100um，近顶囊处直径3.5μm~5μm，褐色，壁光滑。顶囊半球形，直径8μm~10μm。小梗双层，梗基（5μm~6μm）×（2μm~3μm），小梗（5μm~6μm）×（2μm~2.5μm）。分生孢子球形，粗糙，直径3um~3.5μm。闭囊壳球形，暗紫红色，直径135μm~150μm。子囊孢子双凸镜形，紫红色，约5μm×4μm，有两个鸡冠状突起。闭龚壳外面包围着一层壳细胞，淡黄色，球形，壁厚，直径约25μm（见图3）。构巢曲藓产生杂色曲霉素。
分生孢子头，
足细胞，
一壳细胞。
图3构巢曲霉
6.1.5猪曲霉（A.ochraceus）
GB/T4789.16-—2003
属于赭曲羅群。在察氏琼脂培养基上菌落生长稍局限，10d～14d直径3cm~4cm，褐色或浅黄色，基质中菌丝无色或具有不同程度的黄色或紫色，反面带黄褐色或绿褐色。分生孢子头幼时球形，老后分裂成2个3个柱状分叉。分生孢子梗长达1mm~1.5mm，直径10μm~14μm，带黄色，极粗糙，有明显的麻点。顶囊球形，直径30μm～50μm或更大。小梗双层，自顶囊全部表面密集着生。分生孢子球形至近球形，直径2.5μm～3μm或更大，常略粗糙。有些菌系产生较多的菌核，初期为白色，老后淡紫色，球形、卵形至柱形，直径达1mm(见图4)。赭曲霉产生赭曲霉毒素，该毒素是一种强的肾脏毒和肝脏毒。101
1——分生孢子头；
2—一分生孢子梗。免费标准下载网bzxz
图4曲霉
6.2青霉属（Penicillium）
本属产毒霉菌，主要包括黄绿青霉、桔青霉、圆弧青霉、展开青霉、纯绿青霉、红青、产紫青霉、冰岛青霉和皱褶青霉等。这些霉菌的代谢产物为黄绿青霖素、枯青霉素、圆弧偶氮酸、展青藓素、红青霉素、黄天精、环氯素和皱青霉素。
青霉属的营养菌丝体呈无色、淡色或鲜明的颜色，具横隔，或为埋伏型或部分埋伏型部分气生型。气生菌丝密毡状、松絮状或部分结成菌丝索。分生孢子梗由理伏型或气生型菌丝生出，稍垂直于该菌丝（除个别种外，不象曲霉那样生有足细胞），单独直立或作某种程度的集合乃至密集为一定的菌丝束，具横隔，光滑或粗糙。其先端生有扫帚状的分枝轮，称为帚状枝。帚状枝是由单轮或两次到多次分枝系统构成，对称或不对称，最后一级分枝即产生孢子的细胞，称为小梗。着生小梗的细胞叫梗基，支持梗基的细胞称为副枝。小梗用断离法产生分生孢子，形成不分枝的链，分生孢子呈球形、椭圆形或短柱形，光滑或粗糙，大部分生长时呈蓝绿色，有时呈无色或呈别种淡色，但决不呈污黑色。少数种产生闭壳，或结构疏松柔软，较快地形成子囊和子孢子，或质地坚硬如菌核状由中央向外缓慢地成熟。还有少数菌种产生菌核。
6.2.1黄绿青霉（P.citreoviride），异名：毒青霉（P.toxicarum）属单轮青霉组，斜卧青霉系。菌落生长局限，10d～12d直径2cm～3cm，表面皱褶，有的中央凸起或凹陷，淡黄灰色，仅微具绿色，表面绒状或稍现絮状，营养菌丝细，带黄色。渗出液很少或没有，有时呈现柠檬黄色，略带霉味。反面及培养基呈现亮黄色。分生孢子梗自紧贴于基质表面的菌丝生出，一般(50μm～100um）×（1.6μm～2.2μm），壁光滑。状枝大部为单轮，偶尔有作一，二次分枝者。分生113
GB/T4789.16-—2003
孢子链约略平行或稍散开。小梗为紧密的一簇，8个~12个，大多（9μm12μm）×（2.2μm~2.8m）。分生孢子球形，2.2um～2.8Hm，壁薄，光滑或近于光滑，成链时具明显的孢隔（见图5）。黄绿青霉的代谢产物为黄绿青荐素，该毒素是一1
状枝；
一分生孢子。
-种很强的神经毒。
图5黄绿青霉
6.2.2桔青赛(P.citrinum)
属于不对称青舞组，绒状青霉亚组，桔青霉系。菌落生长局限，10d~14d直径2cm~2.5cm，有放射状沟纹，大多数菌系为绒状，另一些则呈现絮状，艾绿色。反面黄色至橙色，培养基颜色相仿或带粉红色，渗出液呈淡黄色。低倍显微镜下分生孢子链为明确的分散柱状。分生孢子梗大多自基质生出，也有自菌落中央气生菌丝生出者，一般（50μm～200μm）×（2.2μm~3μm），壁光滑，一般不分枝。帚状枝由3个~4个轮生而略散开的梗基构成，（12um~20um）×（2.2μm~3μm），每个梗基上簇生6个~10个略密集而平行的小梗，(8μm~11μm）)×(2μm～2.8μm）。分生孢子呈球形或近球形，直径2.2μm~3.2um，光滑或近于光滑（见图6）桔青产生桔青霉素，该毒素是一种强的肾脏毒n
1常状技；
分生孢子。
图6桔青霉
6.2.3圆弧青霉（P.cyclopium）属于不对称青霉组，束状青霉亚组，圆弧青霉系。菌落生长较快，12d~14d直径4.5cm～5cm，114
GB/T4789.16—2003
路带放射状皱纹，老后或显现环纹，暗蓝绿色，在生长期有宽1mm～2mm之白色边缘，质地绒状或粉粒状，但在较幼区域为显著束状，渗出液无或较多，色淡。反面无色或初期带黄色，继变为橙褐色。常状枝不对称，紧密，常具三层分枝，约50um～60μm，上生纠缠的分生孢子链。分生孢子梗大多（200um～400μm）×（3um~3.5μm），典型地粗糙，但也有一些菌系近于光滑。副枝（15μm~30μm）×（2.5um~3.5μm）。梗基（10μm~15μm）×(2.5μm~3.3μm）。小梗4个~8个轮生，(7μm~10μm）×（2.2μm~2.8μm)。分生孢子大多近球形，3μm～4μm，光滑或略现粗糙（见图7)。圆弧青霉的代谢产物为圆弧偶氮酸，该毒素是一种神经毒。图7圆弧青霉的帚状枝及分生孢子链6.2.4岛青霉（P.islandicum）
属于双轮对称青霉组，绳状青霉系。在察氏琼脂培养基上菌落生长局限，致密丛状，呈橙色、红色及暗绿色的混合体。反面浊橙色至红色，变至浊褐色。低倍显微镜下分生孢子链纠缠链状，分生孢子梗短，长50μm～75μm，由气生菌丝或菌丝索上生出，壁光滑，帚状枝典型对称双轮生，稍短，小梗有些骤然变尖，（7μm~9μm）×2μm。分生孢子箱圆形，光滑，（3μm~3.5μm）×（2.5μm~3μm）)（见图8）。岛青霉产生黄天精和环氯素，该毒素均为肝脏毒，能引起动物的肝损害，并能引起肝瘤。帚状枝；
2—分生孢子。
图8岛青霉
6.2.5展开青霉（P.patulum），异名：尊麻青霉（P.urticae）属于不对称青霉组，束状青霉亚组。在察氏琼脂培养基上，菌落生长局限，12d～14d直径2cm~2.5cm，大多有放射状沟纹，边缘陡峭，中央稍凸起，表面呈现粒状，有些在边缘有明显的菌丝束，有的则呈现絮状，厚密。灰绿色至亮灰色。有的菌系产生近于无色的渗出液，气味不明显。反面暗黄色渐变为橙褐色乃至红褐色，稍扩散于培养基中。帚状枝疏松散开，可具3层～4层分枝，其大小和复杂程度差别很大，一般40μm~50μm，极限20μm~80μm。分生孢子链略散开，长达50μm100μm。分生孢子梗一部分单生，一部分集结成束，多弯曲，壁光滑，般（400μm～520μm）×（3μm～4μm）。副枝115
GB/T4789.16—2003
散开，大多（15μm~20μm）×（3μm~3.5μm）。梗基较短，大多为（7μm~9μm）×（3μm3.5μm）。小梗短，（4.5μm~6.5um）×(2μm~2.5μm），8个~10个密集一簇。分生孢子椭圆形，后变为近球形，长轴2.5μm~3μm，光滑（见图9）。展开青产生展青舞素，该毒素能引起动物中毒死亡。皮下反复注射展青霉素，可引起注射部位的肉瘤。展青霉素也是一种神经毒。n
图9展开青霉的帚状枝及分生孢子链6.2.6纯绿青霉（P.viridicatum）属于不对称青霉组，束状青霉亚组，纯绿青霉系。菌落生长局限，12d～14d直径2.5cm～3.5cm，亮黄绿色，有时有狭的带蓝绿色的带紧邻于白色边缘的内侧，极厚，通常为显著的粒状，老年时变为浊褐色。反面纯淡黄色至纯褐色。帚状枝正常的有三层分枝，常常副枝及梗基生在同一高度。分生孢子梗大部分直径3.5μm~4.5μm，但有时达6μm，粗糙至很粗糙。小梗（7μm~10μm）×（2.5μm~3μm）。分生孢子椭圆形，达4.5μm×3.3μm，或亚球形，直径约3.5μm，略粗糙，成纠缠链状或不确定的直柱状（见图10)。纯绿青莓产生赭曲霉毒素和桔青霉素。1—状枝，
一分生孢子。
图10纯绿青霉
6.2.7皱褶青霉（P.rugulosum）GB/T4789.16—2003
属于对称二轮青霉组，皱褶青群系。菌落生长局限，12d~14d直径1.0cm～1.5cm，儿为绒毛状至一定的絮状，浓绿继变为稍灰色。反面最初无色，慢慢变为深色至橙色的点状及块状，在斜面培养时尤以边缘为然。帝状枝大部分典型，但也常常不规则。梗基长短不一。分生孢子梗光滑，直径2.5μm3μm。小梗（10um~12μm）×（1.8μm~2μm）。分生孢子呈椭圆形，显著地粗糙，（3μm~3.5μm）×（2.5μm~3μm），生成纠缠链状（见图11)。皱褶青霖产生皱褶青霉素，该毒素是一种肝脏毒。00
图11皱褶青霉的帚状枝和分生孢子6.2.8产紫青霉（P.purpurogenum）属于对称二轮青霉组，产紫青霉系。菌落生长稍局限，12d~14d直径1.5cm～2.5cm，绒状或稍呈现絮状；孢子多，在黄色至橙红色菌丝体上为深绿色，继而变为深暗绿色。反面深红色至紫红色并扩散于培养基中。分生孢子梗多自基质生出，（100μm~150um）×（2.5μm~3.5um），自气生菌丝分枝而出者则较短、光滑。帚状枝为典型的双轮对称型，紧密。梗基5个~8个轮生，（10μm～14μm）×（2.5μm~3μm）。小梗细长，端尖，4个~6个成为紧密而平行的一簇，（10μm~12μm）×（2μm~2.5um）。分生孢子呈椭圆形至近球形，具厚壁，大多数菌系是粗糙的，偶而光滑，（3μm～3.5μm）×(2.5μm~3μm）（见图12）。
红色青霉（P.rubrum）与产紫青霉很类似，其区别在于它的较淡的灰绿色，分生孢子光滑并几为球形。
产紫青霉和红色青霉均产生红青霉毒素，该毒素为肝脏毒。117
GB/T4789.16—2003
1,2——产紫青荐的状枝和分生孢子；红色青霉的帚状枝和分生孢子。3
6.3镰刀茵属（Fusarium）
本属的产毒霉菌主要包括禾谷刀菌、串珠镰刀菌、雪腐镶刀菌、三线镶刀菌、梨孢镶刀菌、拟枝孢镶刀菌、尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌和木贼镰刀菌等。这些舞菌的代谢产物为单端孢霉烯族化合物、玉米赤烯酮和丁烯酸内酯等。
在马铃薯-葡萄糖琼脂或察氏培养基上气生菌丝发达，高0.5cm~1.0cm或较低为0.3cm~0.5cm，或更低为0.1cm~0.2cm，稀疏的气生菌丝，甚至完全无气生菌丝而由基质菌丝直接生出粘孢层，内含大量的分生孢子。大多数种小型分生孢子通常假头状着生，较少为链状着生，或者假头状和链状着生兼有。小型分生孢子生于分枝或不分枝的分生孢子梗上，形状多样，卵形、梨形、椭圆形、长椭圆形、纺锤形、披针形、腊肠形、柱形、锥形、逗点形、圆形等。1～2（3）隔，通常小型分生孢子的量较大型分生孢子为多。大型分生孢子产生在菌丝的短小爪状突起上或产生在分生孢子座上，或产生在粘孢团中；大型分生孢子形态多样，镰刀形、线形、纺锤形、披针形、柱形、腊肠形、蟠虫形、鳗鱼形，弯曲、直或近于直。顶端细胞多种形态，短啄形、锥形、钩形、线形、柱形，逐渐变窄细或突然收缩。气生菌丝、子座、粘孢团、菌核可呈各种颜色，基质亦可被染成各种颜色。厚垣孢子间生或顶生，单生或多个成申或成结节状，有时也生于大型分生孢子的孢室中，无色或具有各种额色，光滑或粗糙。镶刀菌属的一些种，当初次分离时，只产生菌丝体，常常还需诱发产生正常的大型分生孢子以供鉴定。因此须同时接种无糖马铃薯琼脂培养基或察氏培养基等。6.3.1串珠镰刀菌（F.moniliforme）在马铃薯-葡萄糖琼脂培养基上气生菌丝呈棉絮状，蔓延，高0.2cm～0.8cm，有些菌株平铺或局部低陷，试管壁或菌落中央有一定程度的绳状或束状的趋势。气生菌丝的色泽随菌株及培养基而异：白色、浅粉红色、淡紫色。基质反面为较淡的黄、赭、紫红乃至蓝色，或它们之间的颜色。野生型菌株一般产孢子良好，在气生菌丝层上见有一层稍稍反光的、松散的细粉就是散落成堆的孢子。某些菌株在菌落中央产生粉红色、粉红-肉桂色的粘孢团，个别菌株则为暗蓝色，粘孢团含大量的小型分生孢子及较多的大型分生孢子。
小型分生孢子呈椭圆形、纺锤形、卵形、梨形、腊肠形。透明，单细胞或有1个～2个隔，直或稍弯，[3μm~7（~14）μmJ×（2μm~4.8μm）液体培养时较大为（9μm~18μm）×（2.5μm~6μm）]。小型分生孢子成串或假头状（见图13)。大型分生孢子为镰刀形、纺锤形、棍棒形、线形，直或稍弯。孢子两端窄细或粗细均一，或一端较锐，118
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。