本标准规定了用微生物管碟法测定蜂蜜中四环素族抗生素残留量的方法。本标准适用于天然或加工蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定。 GB/T 5009.95-2003 蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定 GB/T5009.95-2003 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.95—2003
！151
蜂蜜中四环素族抗生素
残留量的测定
Determination of tetracyclines rcsiducs in honey2003-08-11发布
中华人民共和国卫牛部
小国国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
G3/T5009.952033
本准代替GB/T13110一1回载献护求或用量的测定方偿。本与G/13:10—1991相比主要修改如下；修改了标准的中文名称，标非中文名陈改为蜂蛋中日环索战抗生素践密量的到定-按GB/下2CV.，4一252标消编万规则第4分：仁学分析5法对原标准的结构进行可您改，
本标准出中华人民大和回卫生帮提山归口。标继起库并位：省危品卫生监好检验所、幅建省药品检验所玄标准土要年人，殊川街，乃赛验、为宏、状莹要.体位生。原标准1991年当次发，本次第一次修让76
蜂蕾中盟环美族抗生素残留童的测定本标滞舰定了用崴生物管碟法源定蜂蜜中四环离抗生旁残留置的方法。术标准适瓜于天然或加筛蜜中四环求族抗生累残留最的测定。2顾理
GB/T5009.95—2003
试样中国沐索族扩生款经Me.1-uin冲液提取后，用SFEF-PAKC.住沌化，四环庭该三冲抗牛素四环求，十霉本及分霉索利书薄层层析生物检测法进行分离和定；以蜂栏芽感杆菌为试粉南殊，微少将件课法进行定且检测。
3试剂
3.1Mcllva:ne继冲滤(pF14)：弥取晚鸟二纳（NuHPO12EI,())27.65、柠微破（CHa心.H,0)12.0R.要四乙限二钠37.2k.用水溶矫后释并定容至1000L，3.20.1mul/1.磷酸盐叠冲微（pII4.E）：称收磷酸氢二钾13.e日用水格样已稀释定容至100(ml11灭菌2道4%冰箱中保存
3.3乙二胺队乙酸二钠水溶(50g11。3.4Wa:UrsSF.P-PAKCa格（成国产PT-CL在）用时先经10mL中醇流过化，再用I0n:L蒸愉水罡接，然后用1cmL.50g:L乙二股四2.二钠流过，3.5抗生亲标作品：国环参、十毒索，会冠豪标推品（内卫生部药品生物制品查定所提供）3.6素标准落液
3.6.1抗生震标准原液的死制，准谢称取四环度，七需家、金每事标难品适量（按效价进行换算》，用1,01nml/整酸游解并定存至1000Mg/ml.胃4℃冰箱中[可使用7天]。3.6.2抗生系标维播释激配制，临月前放上述原液按1.前更用0.mo1/磷酸盐缓冲箍避步册弃配制成标准释释波。制备川环表、上素标准曲载的标准滩度为0.16，0.21,0.26U.32，0.41：n.5m/ml.争考能度为0.25g/制备金需表准曲线的标准浓度为0，33.3.0.1.0.051.0.064.0.080.0.133ug/ml.争考液座为C.c53mg/mL。定性试验用标准减涨意环素，土需意为2产g/m.。
3.7展开辆：正丁单-艺-水（1+15），4收器
4.1限水式恒温笔。
4.2 述箱:o℃..~1r.。
4.3相盐水游。
4.4尚压灭菌器
4.5成转式减压蒸谣器、
4.6两心机2333/min：
4.7大半满量0.1mA.
4.多层新缸，内长2(cm、宽1m商m4.9长方形培养血：1.cm×8cx23cm977
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2，10层新纸rmXem，然纸
4. 11微或注射器;1U rL,50 JL:4.12电吹风机，
4.13游际卡尺。
4.14整：奔量1m.那1心m]:标有の,1mL单位别。4.15射能：容为21m：
4.1G平正：内经为9mmm，高16mm~17mm.底部光整光潜，具离瓷带，4.17不锅辆小管（简称小年）：内格6.0mm士0.1mm，径7.8am±1.1m.高度11r-n, t mm.
5培养基
5.1菊种培养基：
庞蛋豚
一肉滋膏
氨化钠
族谢水
14@--:5R:
将上述各成分泥合了菜恼水中，搅计加热盗落解.113'C灭3min.最终pF值为7.2~-7.4。5.2检定用培养账：
决蛋亢陈
牛肉凌有
燕淘水免费标准下载网bzxz
14--_5;
1 co nul.
将上述各虑夺混台于热缩水中搅举划热至流案,11死函31nn,展整pII问为. 55. 1。6试样处理
6.1定量试格用样液制格，格取混勾的纤蛋试样10.*，加入3nL[H4.的M:1vi冲液抛均实，溶解斤进行过滤滤微分数次注射器中，用终预处理的PA下性选过，用mI水忧托，可月10m:T.中醇洗脱，设脱饿经107.减准缔惠十所.肩确m人pH4.5降般盐线冲液3ral.--4rsl陷解，备定负检测用
6.2定性试用样制备，称取蜂密试样多：按6.1女频处理，中醇洗脱减经41减压我箱蒸一后，用.1mL中醇溶解，备定性试验用。？前流和检定用平板的制备
7.1试冷用种：择杆南ctsrr：r.mcies，号6331.工生部药品生物品检定所提供：
7.2菌被的制各：将苗种移种干成有菌用范等基的点瓶内，平37培差7大，使镜捡斗胞数让，充用10mL火南水选下需咨，离心20mIn净上救，平短探作次再加10L灭菌水于沉旋物中，混勾，然，将此：脏恶浮波面55亡恒温水浴中加热30mim。从水浴中取出，」室温下放置再于所机温水浴中热待冷后骨T冰保存：月时可取此装租总液双灭水希样10书菌液。
7.3芽胞来用量的制定：把同量的带送液加人检完用培养H，按本法还行操作，0.2多的678
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国环帝参浓度可产生15rm1l以上的消晰完整的冲苗图，选择出最适它书等吃最落用地。一股为每11 mT.检应用培苯基训人c.2 aL~心.5 mE稀南液。7.4检定片平板的制备：试验用乎正内预先铺方201.种余培养作火低层，将适单新的液（已于7.3中确定加当落正玲至55℃60的检定用塔希成中，滤后往上述平血内划人5m！.为菌。的后烂的平，使菌层均多要蓝于底层表面，置水平化置！，益下啊益，德凝固匠，每个平恨的均并弟表面放置个小曾识小学在半径2.的上成S0间节。用平快应当准备，8定量试验
8.1标准曲线的解备：亚3个校定用平孩为·洲，心个标难法度需要六组·在该组每个捡定用平板的全间屑小驾内江满一每能度滋在另3个小管内汁满一标准浓夜于37三1培荞1e然测员意考达度求标准依的批尚困经求得齐白目个激值的平的值，准川第出名组内标准滚安与参考液要球圈径平均传的芳值下，以标信浓饿。为纵坐标，以相显的产值为摘坐标，在\对效坐标炫利乐准用战
8.2测实：每份立最3定用半板，下每个半板上3个间隔的小者内注满C.2八m四坏本券考依度（或0.25/L十充或3.0/ml.金每系，视许含就牛索种类而定）另3个小咨内空满被检样液：」87=1二倍养16h澳单李.卡液成利放检样浪的冲菌图直径求得齐9个数闻的平与间并算出故检样液与参考淡度抑菊图直空平与慎.的差位下，9定性试验
取层析月滤组7rX22m喷上0.1mm/.磷教盐驱获1.5于空气中晾十，备书。所忘纸底边2.m起始绒分则酒2g/四环素土1金年案标准帮种满与定性试验件液，将滤纸控于盛有恶开剂3.7)为折断中，以上行法展开，等路剂前浩展至15cm处将违纸收出，空气中惊下贴在步光加有mL含试验氏齿层的长方形培养血上min后移去独纸，在汇二_亡培养S止抑商图划促比移道，以确实被松试栏中所含四环系族抗牛素的韩类：10箔果计算
根据裁检试样滤与率多法抑当断白经平也俏的关谁，从淡种抗生素标推曲线上查出抗生求的依（（/ml.）试样中名同付件在两种以四环系片生素时，除了四环素，金孵素共存以金再求表示结果外，其尔情况均以土末表示站乐，试样中川环系族抗生录战解疫下出计算：x=sxz1000
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式市，
X-…·试样中四环素族抗兰索残望量.单拉为率克梅下克(mg/kg).—检完月样液4川环系施抗生素的谈展，单位为微克每意于（gm；征检定推液的休，单位为毫升（ml.)：m—试样质最，单位与光(g)。
11鹅密度
在立复好条件下获信的州饮融划定站果的跨对关俏不得超过弹太平均值的(治，Er
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