GB/T 17481-1998预混料中氯化胆碱的测定 分光光度法

GB/T17481—1998
本标准等效采用日本农牧水产畜牧局发布并实施的日本饲料分析基准《氯化胆碱》。在技术内容上，日本饲料分析基准《氯化胆碱》中“氯化胆碱雷氏盐的生成和溶出”的部分内容，即“精确吸取上述提取液5mL～50mL茄形烧瓶中，于50℃水浴上减压浓缩后，通氮气下除去溶剂”，可简化为本标准的\精确吸取上述提取液5.00~10.00mL于100mL高形烧杯中，在50℃水浴上蒸发至干”。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验测试中心(武汉)负责起草。本标准主要起草人：杨先奎、钱沁、钱方。225
1范围
中华人民共和国国家标准
预混料中氯化胆碱的测定
分光光度法
The method for determination of choline choridein premix-Spectrophotometry
本标准规定了雷氏盐比色法测定复合预混料中氯化胆碱的方法。本标准适用于复合预混料中氯化胆碱的测定。2引用标准
GB/T 17481—1998
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法3方法原理
用甲醇-三氯甲烷混合溶剂提取试样中的氮化胆碱，将溶剂蒸干后用水溶解残渣，再在低温下加入雷氏盐生成氯化胆碱雷氏盐的结晶，过滤出结晶，用丙酮溶解，定容。将其丙酮溶液在波长525nm下进行分光光度测定。
4试剂
本标准所用试剂，除特殊说明外,均为分析纯。实验室用水符合GB/T6682中三级水的规格。4.1甲醇
4.2丙酮
4.3甲醇-三氯甲烷混合液（10+1)量取900mL甲醇和90mL三氯甲烷，混勺。4.4雷氏盐（二氨基四硫代氰酸铬铵）甲醇溶液([NH,Cr(NH3）2(SCN),为40g/L)称取4g雷氏盐溶于甲醇，加甲醇稀释至100 mL，混匀,置冰箱内保存。4.5氯化胆碱标准溶液
4.5.1氯化胆碱标准储备溶液：精确称取氯化胆碱10.0000g溶解于水，定量转入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此液1.00mL含0.10g氯化胆碱。4.5.2氯化胆碱标准工作溶液：临用时精确吸取氯化胆碱标准储备液（4.5.1)1.00mL于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀。此液1.00mL含氯化胆碱1.0mg。5仪器、设备
5.1实验室常用仪器。
5.2电动振荡器。
国家质量技术监督局1998~08-28批准226
1999-01-01实施
5.3恒温水浴槽。
5.4真空泵。
5.5离心机：转速能达到3000r/min。GB/T 17481-1998
5.6分光光度计：有1.0cm比色Ⅲ，可在525nm下测定吸光度。5.7具塞锥形瓶：200ml，
5.8高形烧杯：100ml。
5.9抽滤瓶：250mL。
5.10式过滤器：孔径4～7μm。
6试样制备
取具有代表性样品至少2kg，用四分法缩分至250g，粉碎至过0.42mm孔筛，混均，装入样品瓶内密闭，保存备用。
测定步骤
7.1提取
精确称取试样约5g（含氯化胆碱约0.04~0.4g）于具塞锥形瓶中，精确移入甲醇-三氯甲烷混合液（4.3）100.00mL，加塞，在振荡器上振荡30min后，用慢速滤纸过滤，得试样提取液。7.2氯化胆碱雷氏的生成和溶出
精确吸取上述提取液（7.1)5.00~10.00mL于100mL高形烧杯中，在50℃水浴上蒸发至干，加水40ml.使残渣溶解，再在冰浴中冷却到5℃以下，加3mL雷氏盐溶液（4.4），间断搅拌反应30min，得到氯化胆碱雷氏盐的结晶。
将生成的结晶转入娲式过滤器中真空抽滤，烧杯用水洗净，洗液一并抽滤。滤毕，结晶用3×5mL水洗，再用5×1mL甲醇洗，抽干，向过滤器中加入丙酮，使结晶溶解，转入50mL容量瓶中，用丙酮洗净过滤器，洗液一并转入50mL容量瓶中，加丙酮至刻度，混匀，得试样溶液。7.3测定步骤
7.3.1试样的测定
吸取5.0mL所得试样液（7.2)于10mL离心管中，离心5min，转速为3000r/min，取上层清液，以芮酮作参比，用1.0cm比色血在525nm波长下，用分光光度计测定吸光度，在工作曲线上查得试样中氯化胆碱的含量。
7.3.2工作曲线的绘制
精确吸取氯化胆碱标准工作液（4.5.2)5.00、10.00、15.00、20.00mL分别置于100mL高形烧杯中，加水40mL，以下按7.2中\再在冰浴中冷却到5℃以下”以后的操作及7.3.1试样的测定进行，测各标准工作液的吸光度，绘制工作曲线。8测定结果的计算及表示
8.1测定结果按式(1)计算：
X = miV/mV.
式中：X-每干克试样中氯化胆碱的含量，g；-标准曲线上查得测定时所取试样液中氯化胆碱的含量，mg；mi
V——试样提取液的总体积，mL；m试样质量，g；
V.--试样测定时吸取试样提取液的体积，mL。所得结果表示到小数点后一位。(1）
GB/T17481—1998
2重复性：每个试样取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果。8.2
测定结果的相对偏差应不大于15%。228