本标准规定了肉和肉制品中维生素A含量的测定方法。本标准适用于肉和肉制品中维生素A含量的测定。 GB/T 9695.26-1991 肉与肉制品 维生素A含量测定 GB/T9695.26-1991 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
肉与肉制品
维生素A含量测定
GB/T 9695.26-91
Meatandmeatproducts-MethodfordeterminationofvitaminAcontent1主题内容与适用范围
本标准规定了肉和肉制品中维生素A含量的测定方法。本标准适用于肉和肉制品中维生素A含量的测定。2引用标准
GB9695.19肉与肉制品取样方法
3原理
样品皂化后，用石油醚提取不皂化的维生素A,浓缩后，用高效液相色谱荧光检测器激发波长340nm.发射波长460nm分离测定维生素A.用标准外标法计算样品中维生素A的含量。
4试剂
除特别标明外所用试剂全为分析纯,所用水应为蒸馏水或同等纯度的水。氢氧化钾(GB2306)：50%溶液；
4.2抗坏血酸：10%溶液；
4.3无水乙醇(GB678)；
4.4石油醚：沸程30~60℃；
4.5无水硫酸钠；Www.bzxZ.net
4.6异丙醇；
4.7甲醇(GB683)：重蒸后使用；4.8维生素A标准溶液：0.2mg/mL称取维生素A标准品10.0mg,用异丙醇溶解，移至50mL棕色容量瓶中，用异丙醇稀至刻度。
当天配制。
5仪器和设备
5.1实验室常规设备；
5.2绞肉机：孔径不超过4mm
5.3旋转蒸发器；
5.4液相色谱仪，带荧光检测器
5.5色谱柱：十八烷基键合固定相柱或其他能分离维生素A的柱子。6试样
6.1按GB9695.19取样。
6.2取有代表性的试样200g，于绞肉机中至少绞两次使其混匀,试样应尽快分析。7分析步骤
7.1皂化
维生素A易被光破坏，试验应避光操作。称取0.55g试样于150mL棕色皂化瓶中，加入10%抗坏血酸溶液5mL50%氢氧化钾溶液15mL，乙醇30mL混匀，于80℃水浴上回流加热30～60min，使试样溶液清澈，完全皂化后于流水中冷却。
7.2提取
将皂化后的试样溶液移入125mL分液漏斗中用30mL石油醚分数次洗皂化瓶.洗液并分液漏斗中，塞上塞子,轻摇分液漏斗，避免乳化。静置，待分层后，将水层放入第二个分液漏斗中,醚层留在第一个分液漏斗中。于第二个分液漏斗中倒入10mL石油醚,进行第二次提取.如此进行3～4次.石油醚层交入第一个分液漏斗中。石油醚层反复用水洗涤,直至水层不呈碱性(用pH试纸检查)为止,弃去水层。将分液漏斗中石油层经过无水硫酸钠脱水，滤入干燥的棕色圆底烧瓶中。再用石油醚洗涤无水硫酸钠和分液漏斗，洗液并入棕色圆底烧瓶中。7.3分析试样的准备
将盛有石油提取液的圆底烧瓶与旋转蒸发器连接，于50～60℃水浴上减压回收石油醚，待瓶内只剩约1～2mL液体时，取下烧瓶，用氮气吹干剩余液体，立即加入2.0mL异丙醇溶液,摇匀,溶解瓶中维生素A,塞上塞子,以防溶剂挥发,此为色谱分析样液。7.4测定
7.4.1维生素A标准曲线的绘制
取维生素A标准溶液1,2,3,4,56,7,8mL进行高效液相色谱(HPLC)分析，记录峰面积或峰高,以维生素A量为横坐标,峰高或峰面积为纵坐标绘制标准曲线。若样品中维生素A含量很低,可取维生素A标准溶液(0.2mg/mL)5mL,用异丙醇溶液定容
至50mL容量瓶中，此标准溶液浓度为0.02mg/mL。如前进行高效液相色谱(HPLC)分析,绘制标准曲线。7.4.2色谱分析参考条件
分析柱：十八烷基键合固定相柱式相同效用的柱：流动相：甲醇/水98/2；
流动相流速：1mL/min；
检测器：荧光检测器Ex:340nm，Em:460nm;
进样量：试样液4～6uL,记录峰面积或峰高。8分析结果的计算
AX1000XV0
计算公式
V1Xm×1000
式中：X—样品中维生素A含量，mg/100gX100
A—根据试样的峰面积或峰高查标准曲线得到维生素A的量,ug;V1—试样进样分析的体积,uL;
VO试样最终稀释的体积,mL；
m—称样质量，g。
当符合充许差规定的要求时，取两次测定结果的算术平均值作为结果。9允许差
同一样品同时或相继两次测定结果之差不得超过平均值的30%。附加说明：
本标准由中华人民共和国商业部提出。本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。本标准由中国肉类食品综合研究中心起草。本标准主要起草人王津生、蒲健。国家技术监督局1991-03-26批准1991-12-01实施
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