GB/T 18651-2002牛无浆体病快速凝集检测方法

GB/T18651—2002
过去认为无浆体（anaplasma)是原虫，现确定是一种立克次氏体，译名还有微粒孢子虫、无形体等，根据生物学特征，“无浆体”最为确切，因此本标准中用此名。牛无浆体病是一种牛血液传播病。牛一旦感染，即可成为终生带虫者，使养牛业造成很大经济损失。世界动物卫生组织［WorldOrganization forAnimal Health（英）,Office Intentional des Epizootic（法），OIE］将本病列为B类传染病，本病也是我国出入境动物检疫对象之一
OIE推荐诊断牛无浆体病的方法中，卡片凝集检测具有微量、快速、灵敏度高和特异性好等优点，故得到广泛应用。我国曾报道过用补体结合试验诊断牛无浆体病，但因部分血清有抗补体作用，而常被误判，目前，国内尚无卡片凝集检测标准。本标准以OIE推荐技术为依据，参考了澳大利亚和美国检测方法，抗原保存期为一年到三年，试验温度范围为25℃～28℃。
本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部动物检疫所。本标准主要起草人：吴鉴三、张肖正。216
1范围
中华人民共和国国家标准
牛无浆体病快速凝集检测方法
Methods of fast agglutination testfor bovine anaplasmosis
本标准规定了牛无浆体病快速凝集检测方法。GB/T 18651--2002
本标准适用于牛无浆体病的诊断。其他动物无浆体病的诊断亦可参照本方法。2试剂和器械
2.1试剂
a）无浆体凝集抗原，4℃保存；b）阴性协同血清（牛血清因子），70℃～80℃保存；c）阳性对照血清，一20℃保存；d）阴性对照血清，20℃保存。
以上试剂由制标单位提供。
2.2器械
2.2.1微量移液器：5μL、10μL或5μl～25μl（连续可调）。2.2.2微量移液器头若干个。
2.2.3试验用板：取85mm×12.5mm洁净透明塑料平板，用油漆或油性记号笔划成4排×6个区位。3操作步骤
实验应在25℃～28℃环境下进行。3.1被检血清按常规采集和分离，从采集到第一次检测前，要在室温放置38h～48h，然后冷藏或冻存备用，长期低温保存会使阳性率下降。3.2取出凝集抗原、阴性协同血清、阳性和阴性对照血清以及被检血清，在25℃～28℃下放置15 min~~20 min.
3.3同时在平板第一排左起1、2区位划上阳性（十）和阴性（一）符号，其余各区位依次编上被检血清号。
3.4用微量移液器在编号区位内按号分别加阳性、阴性对照血清和待检血清10μL。3.5在各区位加凝集抗原5μL，靠近血清，互不接触。3.6在各区位抗原旁加阴性协同血清10μL，互不接触。3.7用牙签将各区位的三种反应物摊成液面（约成人小指甲盖面积），混合均勾。做一份血清换用一根牙签。
3.8用手轻轻晃动该平板，在4min～8min内，当阳性对照血清开始出现凝集反应时，对着黑色背景判读结果。
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-02-19批准2002-05-01实施
判定标准
GB/T 18651—2002
4.1阳性对照血清出现颗粒清晰的凝集现象。4.2
阴性对照血清没有可辨认的任何凝集颗粒被检血清凡出现可辩认的凝集颗粒的凝集现象，均判为阳性反应。4.3