GB/T 19542-2004饲料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的测定--高效液相色谱法

ICS 65. 120
中华人民共和国国家标准
GB/T19542---2004
饲料中磺胺二甲基嘧和磺胺间甲氧嘧啶的测定
高效液相色谱法
Determination of sulfamethazine and sulfamonomethoxine infeeds---High-performance liquid chromatography2004-06-09发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2004-10-01实施
GB/T19542—2004
本标准在查阅了大量文献资料的基础上，经过方法筛选，确了用高效液相色谱分析方法测定饲料磺胺“甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的试验方法本标推山国家质量监督检验检疫总局提出本标推山全国饲料工业标摊化技术委员会归口。本标摊由国家饲料质量监督检验甲心（北京)负责起草本标推干要起带人:李兰、素德成、李丽蓓.魏秀莲、董焕翟，杨文军，1范围
饲料中磺胺二甲基嘧密陨和磺腰简甲氧嘧啶的测定高效液相色谱法
GB/T 19542—2004
本标准规定了用搞效液相色谱仪测定衡料中磺胺一甲基嘧啶和磺胺间甲氢嘧啶含量的方法。本标准适用于配台饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中磺胺二中基嘧啶利磺胺间甲氧嘧啶的测定，最低检浓度为23mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款，通过本标准的引而成为本标准的条款·尼是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内穿或修订版均不适用于本标准，然间，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注行期的非用文件，其晨新版本适用了木标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(13/T14699.1饲料采洋方法
3原理
试样中磺胺…甲基嘧啶和磺胺闭甲氧嘧啶经酸性甲醇溶被超声提取后，注人高效液指色仪反相色谱系统中进行分离，用紫外检测器（或二极管矩阵检测器）检测，外标法计算藏胺二甲基嘧啶和磺胺间甲疯的含。
试剂和溶液
除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馅水：包谱用水符合GH/T6582中级用水规定。4.1冰乙酸：优级纯
4.2盐酸，
4,3盐酸溶液HC)-0,11al/L取盐酸（4.2)8.5m溶解于1000ml.水中4.4乙膀:色谱纯。
4.5甲醇：色谱纯。
4. 6N,N-甲基甲酰胺,
4.7提取液：在10001l容景瓶i期人盐酸溶波（4.3)300ml..用甲醇1.5）定奔牟刻度摇勾。4.8流动相：在1C00ml.容景瓶中加人700ml_～800ml.去离子水.移取冰艺（4.1)3ml加人水中.用水定容至刻度，摇匀，过0.45m滤膜，取上述溶液880mL与乙睛（4.4）i20m1.混介，播约，脱气.得用。
4,9磺胺三中基啶标滩品纯度均应大于7学4，磺胺间中氧嘧啶标准品：纯度均应大于9了%。4.11磺骏二甲基磁啶标推溶液
4.31.1磺胺二甲基啶标准贮备液：准确称取已知纯度的磺胺甲基噬啶标准品：001n19，精确至0.0001g，置一只100mL棕色容量瓶中，加2mLN，二甲基酰胺(4.6)及少量醇（4.5)超产使之完全溶解，用甲醇（4.5）定容至刻度，摄匀.该溶液中磺胺二甲基嘧啶浓度为1mg/ml.，丁冰箱4七保有可使1个月。
GB/T19542—2004
4.11.2磺胺二甲基嘧啶标准中间液：准确移取标准贮备液（4.11.1)5mL于一只501IlL棕色容量瓶中，用甲醇（4.5)定容至刻度，该溶液中磺胺一甲基嘧啶的浓度为100g/mL，于冰箱4℃保存可使用半个月。
4.11.3横胺二甲基嘧啶标准工作液：准确移取标准中间液（4.11.2）5mL于一只50ml.棕色容氧瓶中，用流动相(4.8)定容至刻度，该溶液中磺胶二甲基嘧浓度为10 g/mL，当日使用。4.12磺胺间甲氧嘧啶标准溶液：配制过程同磺胺二甲基螃啶。注：著同时测定两种胺可配制混合标准工作液4.13磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶混合标准工作被分别移取磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氯嘧啶标准中间液5mI.于一只50ml.棕色容最瓶中，用流动相（4.8)定容至刻度，该溶液中磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的浓度均为10g/mL，当日使用。5器
5.1实验室常用仪器设备。
5.2具塞锥形瓶，150mL。
5.3振器。
5.4高效液相色谱仪：配白动进样器、紫外检测器（或二极管矩阵检测器）。5.5针头过滤器：备孔径为0.45μm(或0.20m）微孔滤膜，6试样制备
选取有代表性饲料样品至少500多.四分法缩减至100%，磨碎，全部通过0.28mm孔筛，混匀，装人密闭容器中，避光低温保存备用。7分析步骤
7.1试样溶液的制备
称敢饲料样品5g(精确至 0.001g)置丁具塞锥形瓶(5.2)中，加人100 mL的提取渡（4.7)，于振荡器(5.3)振提取30min，过滤：滤过0.45m滤膜(5.5),待上机。7.2色谱条件
7.2.1固定相具有Cs填料的柱子（粒度为4m）：柱长150mm，内径3.9mm。7,2,2流动相12%乙精溶液(4.8),以1. 0 mL/tnin 流速洗脱。7.2.3进样量20 ul-。
7.2.4检測器紫外检测器（或二极管矩阵检测器）,检测波长270 nml。若单独测定，磺胺二甲基嘧啶检测波长可选为266nm磺胺间甲氧嘧啶检测波长可选为271nm。8定量定
按高效液相色谱仪器说明书调整仪器操作参数：向色谱柱中注人磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧暖标推工作被(4.13)及试样溶液(7.1)，得到色蜂积响应值，用外标法定量。9结果计算
9.1试样中磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的含量分别按式(1)计算。W,-.PxVxaxy
F Xm XVi
武中：
W:-一-试样中磺胺一甲基嘧啶或磺胺间中氧嘧陡的含量，单位为囊克每干克（mg/kg);+t1)
P试样溶液峰询积值；
样品的总蒂释体积，单位为笔升（ml.)；.
—标准溶液浓度.单位为微每毫外（ug/ml.)；V，标谁溶液进样体积，单位为微升（I.).-—标准溶液峰面积平均俏：
m试样质量，单位为克)
V,-试栏溶被液进样体积,单位为微升(p)9.2平行测亲结果用算术乎均值表示,保留两位有效数宁。10复性
同一分析老对同试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大下%GB/F19542—2004