HG/T 3663-2000 胶鞋抗菌性能的试验方法(琼脂平板法) HG/T3663-2000 标准下载解压密码：www.bzxz.net

备索号：7262—2000
HG/T3663-2000
为适应胶鞋抗菌性能测定的要求，特制定本标准。本标准的制定参考了美国纺织化学师与印染师协会AATCC90—1977(R1981)标准。胶鞋施行抗菌防臭加工时，抗菌剂可施放于海绵胶料、内底布胶浆和鞋面材料中，测定制品抗菌性能时可以从施行过抗菌防臭处理的部件取样试验。试验用菌采用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌。这三种细菌都是常见的细菌，对外界抵抗力强，是引起脚臭的主要微生物，也是消毒剂消毒效果检测方法中采用的细菌，故在标准中试验时选用了上述三种菌。
经过试验发现试样直径大小对试验结果无明显影响，因此试样规格定为(16.0士0.2)mm。本标准由中华人民共和国原化学工业部技术监督司提出。本标准由全国橡胶与橡胶制品标准化委员会胶鞋分技术委员会归口。本标准起草单位：上海市胶鞋研究所。本标准主要起草人：吕志强、徐德佳9
标准挖按避a.baoo.co客类标准行业资料免费下载1范围
中华人民共和国化工行业标准
胶鞋抗菌性能的试验方法
（琼脂平板法）
TestingMethod forAntibactarialActivity of RubberShoes(Agar Plate Method)
本标准规定了施行抗菌防臭加工的胶鞋及其部件的抗菌性能试验方法。本标准适用于胶鞋及其部件抗菌性能的测定。2引用标准
HG/T3663—2000
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB4789.28-—1994食品卫生微生物学检验、染色法、培养基和试剂GB15981—1995消毒与灭菌效果的评价方法与标准3原理
利用胶鞋及其部件中抗菌材料（物质）在琼脂培养基内的扩散作用，即当其扩散过程中保持了足够浓度时，则可抑制细菌的生长，从而产生一个透明的抑菌圈。根据抑菌圈的大小，可以衡量胶鞋制品的抗菌性能的水平。
4定义
本标准采用下列定义：
4.1抗菌防臭加工Antibacterial andanti-stinkingprocessing指胶鞋及其部件添加抗菌材料（物质），以抑制胶鞋在穿着过程中鞋腔内和足部的细菌繁殖生长为目的的加工。
4.2抑菌圈Antibacterial clearzone抗菌材料（物质）阻碍细菌繁殖生长，从而在培养皿里试样周围形成的透明区域。4.3抗菌性Antibacterialactivity抑制细菌生长繁殖，或将细菌杀灭的特性。4.4抑菌宽度Widthofantibacterial clearzone抗菌材料（物质）阴碍细菌繁殖生长，从而在培养皿单试样周围形成的透明区域的宽度5试验用菌
5.1金黄色葡萄球菌（ATCC6538）。5.2大肠杆菌（8099或ATCC25922）。国家石油和化学工业局2000-05-23批准标准挖按网a.basoo.co客类标准行业资料免费下载2000-12-01实施
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5.3枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC9372）。6仪器、设备
6.1恒温培养箱。
6.2压力蒸气消毒锅。
6.3冰箱。
6.4接种环（尖端环圈直径约4mm）。6.5移液管（1.0mL）。
6.6平m(9 cm)。
6.7玻璃试管（g12mm×100mm）。6.8吸管。
6.9三角烧瓶。
6.10酒精灯。
6.11镀子。
6.12游标卡尺（分度：0.02mm）。6.13制取试样的圆形裁刀，裁刀内径：(16.0士0.2)mm。7培养基、营养肉汤及生理盐水
7.1营养琼脂培养基（半固体培养基）7.1.1成分
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
7.1.2制法
15g（若制备半固体培养基，则为0.5g）1000mL
除琼脂外，其他成分溶解于蒸馏水中，用4.0mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.2～7.4，加人琼脂，加热溶解，分装烧瓶，在不低于120℃的温度下高压灭菌30min。7.2平板制作
将7.1.2的营养琼脂培养基取出约15mL，倾注于灭菌的平血中，待营养琼脂凝固后翻转平皿，置（36土1）℃C恒温箱中培养（24土2)h。灭菌后的营养琼脂若不马上使用，要放在4～10C温度下保存，保存时间不宜超过10d。使用前要打开平皿倒置于（36士1)℃培养箱内烘15～30min。7.3斜面培养基制作
将7.1.2的营养琼脂约2mL加人无菌试管中，然后将试管倾斜放置，使营养琼脂冷却凝固。制备好的斜面培养基如不马上使用要放在4～10℃温度下保存，保存时间不宜超过2周。7.4营养肉汤
7.4.1成分
蛋白陈
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
7.4.2制法bzxz.net
1000mL
按上述成分混勾，溶解后调节pH值至7.2~7.4（用4.0mol/L氢氧化钠溶液调节），然后在试管中12
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分别注人2mL，塞上棉塞，在不低于120℃的温度下高压灭菌30min。灭菌后的营养肉汤如不马上使用要放在4～10℃温度下保存，保存时间不宜超过2周。7.5生理盐水
将8.5g氯化钠加1000mL蒸馏水制成生理盐水。分装于瓶中，每瓶100mL，并在不低于120℃的温度下高压灭菌30min。冷却至室温备用。8细菌的保存
8.1琼脂斜面保存
将菌种接种于营养琼脂斜面，置于（36士1)℃恒温箱培养18～24h，放在（4土1)C冰箱中保存。般可保存1个月左右。
8.2半固体穿刺保存
将细菌穿刺接种于半固体培养内，在（36土1）℃恒温培养18～24h后，将其取出加适量灭菌液体石蜡覆盖在培养基上面，隔绝空气，置于（4士1）℃冰箱内可保存3～6个月。如需长期保存，则每36个月传代1次。
8.3分离培养
工作用菌种每3～6个月在琼脂平板上分离单个菌落1次，选典型的菌落接种于普通琼脂斜面上，可以代替原有的工作用菌种。
9试样
9.1从施放抗菌防臭剂的部件上取样。9.1.1鞋帮取样
鞋帮取样从鞋的前后帮各取1个样品。9.1.2鞋内底取样
在鞋内底的前掌部位及后跟部位各取1个样品。9.2用(16士0.2)mm的圆形裁刀裁取试样。10试验步骤
10.1试验前的准备
10.1.1试管、三角烧瓶、吸管、移液管及培养乎皿预先用水洗净烘干。将试管、三角烧瓶、移液管塞上棉塞，同时吸管、移液管要用纸包严，并将上述所有器皿在不低于120℃的温度下高压灭菌30min，然后烘干备用。
10.1.2用游标卡尺测量试样的实际直径，并记录。10.2菌液的制备
10.2.1从8.1保存的菌中分别移植一接种环接种于斜面培养基，置（36土1)C恒温培养18～24h。10.2.2从10.2.1的斜面培养菌中分别移植一接种环接种于7.4.2营养肉汤管中，并在（36土1)℃C恒温培养18~24h。
10.3试验
10.3.1用移液管分别吸出0.1mL10.2.2金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及0.2mL枯草杆菌黑色变种芽胞菌的菌液（枯草杆菌黑色变种芽胞菌的菌膜要预先打碎混勾），各自放人100mL无菌生理盐水中稀释。
10.3.2用吸管吸出10.3.1的稀释菌液均匀地涂布在7.2无菌培养基上，吸干多余菌液。10.3.3用消过毒的镊子将9.2的试样夹起轻轻放置并贴紧在10.3.2的培养基中央，注意不要损坏培养基的表面。
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10.3.4将10.3.3的培养平血置于（36±1)℃恒温培养18～24h。11、试验结果
11.1从培养平血的底部观察并用游标卡尺测量试样抑菌圈的直径。11.2试验结果的计算
抑菌圈宽度按式(1)计算：
W-(T-D)/2
式中：w-
抑菌圈宽度，mm；
T抑菌圈最短直径，mm；
D试样的直径，mm。
11.3试验结果的表示
每个样品的试验数量不得少于2个，以算术平均值表示试验结果（取值保留小数点后1位）。12试验报告
试验报告应包括下列内容：
a）试样名称；
b）试验编号；
e）菌种名称；
d）试验结果；
e）试验日期；
f）试验者、复核者。
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