GB/T 20443-2006鸡组织中已烯雌酚残留的测定 高效液相色谱-电化学检测器法

ICS65.020.30
中华人民共和国国家标准
GB/T20443—2006
鸡组织中己烯雌酚残留的测定
高效液相色谱-电化学检测器法
Method for the determination of diethylstilbestrol in chicken tissue-High performance liquid chromatography with electrochemical detection2006-08-28发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2006-11-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部畜禽产品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：杨清峰、吴银良、薛毅、单吉浩、李卫东、王海、刘勇军。GB/T20443—2006
1范围
鸡组织中已烯雌酚残留的测定
高效液相色谱-电化学检测器法
GB/T20443—2006
本标准规定了鸡组织中已烯雌酚残留量测定的高效液相色谱-电化学检测器方法。本标准适用于鸡组织中(鸡肌肉和鸡肝脏）已烯雌酚残留量的测定。2原理
鸡组织中的己烯雌酚经叔丁基甲基醚提取、C1：柱净化，甲醇和水的混合液洗脱。以甲醇-磷酸盐缓冲液（pH3.5)为流动相，用高效液相色谱-电化学检测器法测定，外标法定量。电化学检测器对可氧化还原的化合物具有很高的灵敏度，利用这一特点，可测出痕量的己烯雌酚。3试剂和材料
所有试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。3.1叔丁基甲基醚：色谱纯。
3.2甲醇：色谱纯
3.3氢氧化钠溶液：1moL/L水溶液。3.4乙酸。
3.5乙酸溶液：体积分数为20%水溶液。3.6磷酸盐缓冲液：0.05moL/L磷酸二氢钾水溶液，pH3.5。3.7已烯雌酚标准品：纯度≥99%。3.8已烯雌酚标准储备液：准确称取一定量的己烯雌酚标准品于棕色容量瓶中，用甲醇溶解后定容至刻度，得100μg/mL的标准储备液。储存于4℃冰箱中，使用前恢复至室温。3.9已烯难酚标准工作液：用前将储备液用甲醇稀释为50ng/mL～2000ng/mE的浓度系列。4仪器和设备
4.1高效液相色谱仪，配电化学检测器。4.2均质器。
4.3固相萃取装置。
4.4固相萃取小柱：C柱，容积为6mL。4.5旋转蒸发仪。
4.6心形瓶：100mL。
4.7分液漏斗：100mL。
4.8酸度计。
4.9涡旋混均器。
4.10真空泵。
4.11样品浓缩仪。
样品处理
样品采集后于10000r/min下浆（或者将样品尽量粉碎），于一20℃以下冷冻保存，分析用时将其1
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解冻后使用。
6分析步骤
6.1提取
称取试样10g（精确至0.01g）于50mL带盖离心管中，加人15mL叔丁基甲基醚，用均质器以10000r/min的速度均质15s后以3000r/min的速度离心10min，收集上清液，再用15mL叔丁基甲基醚提取一次，合并有机相至100mL分液漏斗中，加人1moL/L的氢氧化钠溶液10mL，剧烈振摇1min，静置分层30min，收集水相并用体积分数为20%的乙酸调pH至4.5，备用。6.2净化
依次用5mL甲醇、5mL水和5mL的甲醇：水[V（甲醇）+V（水）=45+55］预洗Cls小柱，然后将6.1中备用液过柱，弃去流出液，再用4mL的甲醇：水[V（甲醇）+V（水）=80+20]］洗脱，洗脱液用旋转蒸发仪浓缩至约1mL后用甲醇转移至2.0mL的小瓶中，用氮气吹干，最后用300μL流动相溶解供高效液相色谱-电化学检测器测定用。6.3测定
6.3.1高效液相色谱条件
色谱柱：Cis，3.9mm×150mm；
流动相：甲醇-0.05moL/L磷酸盐缓冲液（pH3.5)[V（甲醇）+V（0.05mol/L磷酸盐缓冲液）=60+40l；
流速：1.0mL/min
电化学检测器的灵敏度设在1nA，工作电势为900mV；进样量：40μL。
6.3.2高效液相色谱测定
根据样液中己烯雌酚残留量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中已烯雌酚响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样进行测定。在上述色谱条件下，已烯雌酚保留时间约为7.2min。标准品色谱图参见附录A中图A.1。6.3.3空白试验
除不加试样外，采用6.1～6.3.2的测定步骤进行平行操作。6.3.4结果计算和表述
用色谱数据处理系统或按式(1)计算试样中已烯雌酚残留量：X-A:c.Vx1000
As.mX1000
式中：
试样中已烯雕酚残留量，单位为微克每干克（ug/kg）：一样液中己烯难酚峰面积；
标准工作液中己烯雌酚峰面积；标准工作液中已烯雌酚的质量浓度，单位为微克每升（ug/L）；-样液最终定容体积，单位为毫升（mL)；-最终样液所相当的试样质量，单位为克(g)。检测限、回收率
7.1检测限
本方法在鸡组织（鸡肉和鸡肝）中的检测限为1μg/kg。7.2回收率
本方法在1ug/kg~100μg/kg添加浓度的回收率为60%~110%。2
.（1)
附录A
（资料性附录）
标准品色谱图
已烯雌酚标准品的液相色谱图见图A.1。40.00
己烯雌酚标准品的液相色谱图
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鸡组织中己烯雌酚残留的测定
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开本880×12301/16印张0.5字数6千字2006年11月第一次印刷
2006年11月第一版
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