ICS 65.120 CCS B46 DB21 辽宁省地方标准 DB21/T 3698—2023 饲用微生物制剂中丁酸梭菌的检测 Method for determination of Clostridium butyricum in feeds 2023-02-28发布 辽宁省市场监督管理局 发布 2023-03-28实施 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：大连三仪动物药品有限公司、辽宁国托检测有限公司、江苏三仪生物工程有限公司、大连工业大学、彰武县畜牧业发展服务中心。 本文件主要起草人：江国托、刘艳、单春乔、李娟、刘秋晨、于洪敏、王岩、赵红秋、翟宏旭、田晶、陈玲、王效禹、宋蕙男、吴怡琦、刘星、冷寒冰。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，可通过来电或来函反馈，归口管理部门将及时处理并评估复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），电话：024-23447862。 文件起草单位通讯地址：大连三仪动物药品有限公司，辽宁省大连市甘井子区营城子镇营旭路9号，电话：0411-66886298。 1 范围 本文件规定了饲用微生物制剂中丁酸梭菌的检测方法。 本文件适用于各种饲料添加剂各组分中丁酸梭菌的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 4789.2 食品微生物学检验 菌落总数测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 FTG：Fluid Thioglycollate（液体硫乙醇酸盐培养基） 5 稀释液、培养基及试剂 5.1 0.85%灭菌生理盐水。 5.2 丁酸梭菌培养基（见附录A中的A.1）。 5.3 革兰氏染色液（见附录A中的A.2）。 5.4 细菌生化鉴定试剂盒。 5.5 细菌基因组DNA提取试剂盒。 5.6 标准菌株：丁酸梭菌 CICC 10390。 5.7 实验室用水应符合GB/T 6682要求。 6 设备和实验器材 （原文为设备与实验器材相关内容，按标准实验室配置执行） 7 检验程序 包括采样、试样制备、操作步骤、确证试验以及结果计算与报告等环节。 8 采样 按GB/T 14699.1执行饲料样品采集。 9 试样的制备 按GB/T 20195执行动物饲料试样制备。 10 操作步骤 按照规定方法进行样品处理、培养与检测操作。 11 确证试验 通过生化鉴定、染色试验及分子生物学方法对目标菌进行确认。 12 结果计算与报告 依据GB/T 8170进行数值修约与结果判定，并出具检测报告。 附录A（规范性）培养基和试剂 A.1 丁酸梭菌培养基配方与使用方法。 A.2 革兰氏染色液配置与使用说明。 附录B（资料性）细菌DNA提取 提供细菌基因组DNA提取的参考方法与操作步骤。