ICS 65.120 B46 河北省地方标准 DB13/T 1384.1-2011 饲料中4种β-内酰胺类药物的测定 Determination of four kinds of β-lactams in feed 发布：2011-05-10 实施：2011-05-20 河北省质量技术监督局 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河北大学、河北省食品质量监督检验研究院、河北医科大学、北京出入境检验检疫局技术中心、石家庄市疾病预防控制中心、河北省饲料产品质量监督检验站。 主要起草人：张岩、李挥、吕品、丛斌、卢晓宇、张敬轩、沈磊、米振杰、贾茜、张宏、杨立学、李志平、高振同、武英利。 1 范围 本标准规定了饲料中青霉素G、青霉素V、氨苄西林、阿莫西林4种β-内酰胺类药物的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于饲料中上述4种β-内酰胺类药物的测定。 本方法检出限：青霉素G、青霉素V为1.0 μg/kg；氨苄西林、阿莫西林为2.0 μg/kg。 2 规范性引用文件 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样中的4种β-内酰胺类药物残留经Oasis HLB或相当固相萃取柱净化后，采用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 甲醇（色谱纯） 4.2 乙腈（色谱纯） 4.3 乙酸（优级纯） 4.4 乙腈+水（1+3）：25 mL乙腈与75 mL水混匀 4.5 Oasis HLB固相萃取柱（500 mg，6 mL） 4.6 标准品：青霉素G、青霉素V、氨苄西林、阿莫西林（纯度≥99%） 4.7 标准储备溶液：各标准物质用乙腈配制成1.0 mg/mL储备液，-18℃保存 4.8 标准工作溶液：由储备液稀释配制 5 仪器 5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪（ESI源） 5.2 分析天平（0.1 mg、0.01 g） 5.3 涡旋混匀器 5.4 固相萃取真空装置 5.5 微量进样器（25 μL、100 μL） 5.6 刻度样品管（5 mL，0.1 mL精度） 5.7 真空泵（≥80 kPa） 5.8 pH计（0.01精度） 5.9 氮吹仪 5.10 高速离心机 6 测定步骤 6.1 试样溶液制备 称取5 g试样，加45 mL去离子水，涡旋混匀5 min，5000 r/min离心10 min。上清液通过Oasis HLB柱净化，依次用水洗柱并减压抽干后，用甲醇洗脱。洗脱液在40℃氮吹至干，用乙腈定容至1 mL，供仪器测定。 6.2 测定 6.2.1 液相色谱条件 色谱柱：SunFire C18（3.5 μm，150 mm×2.1 mm）或等效柱。 流动相及梯度洗脱条件如下： 0–15 min：水（含0.4%乙酸）60% → 35%，乙腈40% → 65% 15.01–25.01 min：恢复初始条件 柱温30℃，进样量20 μL。 6.2.2 质谱条件 电喷雾离子源（ESI），正离子扫描，多反应监测（MRM）。 青霉素G、青霉素V、氨苄西林、阿莫西林的定性与定量离子对见表2。 6.2.3 定性测定 通过特征离子对进行定性确认。