DB64/T1605—2019
牛病毒性腹泻/粘膜病酶联免疫吸附试验操作规程

前言
本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求。本标准由宁夏农林科学院提出，由宁夏回族自治区农业农村厅归口。本标准由宁夏农林科学院动物科学研究所起草。本标准主要起草人：康晓冬、李知新、王建东、高海慧、岳彩娟、吴韶儒、范春梅、工伟华、宜小龙、李昕、张牵举、邵倩、高慧兰。

1 范围
本标准规定了牛病毒性腹泻/粘膜病酶联免疫吸附试验的诊断技术规范。本标准适用于牛血清、血浆、全血、牛奶和耳部切口组织样本中牛病毒性腹泻病毒抗原/抗体的检测，可用于该病的实验室检测、诊断和流行病学调查。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T18637-2002 牛病毒性腹泻/粘膜病诊断技术
SN/T1129-2015 牛病毒性腹泻/粘膜病检疫技术规范
SN/T1999-2007 牛病毒性腹泻-粘膜病抗原捕获酶联免疫吸附试验操作规程

3 牛病毒性腹泻病毒抗原酶联免疫吸附试验
3.1 材料准备
3.1.1 工作液的稀释
首先将10倍浓缩的洗液置于18℃～26℃，混旋后确定析出的盐类全部溶解。将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水按1:10稀释，混匀备用。无菌条件下制备的洗涤液在2℃～8℃可保存1周。稀释用蒸馏水应符合GB/T6682的要求。
3.1.2 抗原检测试剂盒保存
病毒性腹泻病毒抗原检测试剂盒保存温度为2℃～8℃。试剂盒应包括如下物品：BVDV(Erns)特异性单克隆抗体包被的微量反应板；酶标抗体；阳性对照；阴性对照；耳部切口组织浸泡缓冲液；检测溶液：10×浓缩洗液；TMB底物溶液；终止液。
3.1.3 仪器与设备
抗原检测所需的仪器与设备有：酶标仪（单波长450nm，双波长450nm/650nm）；振荡器；高速台式离心机；冰箱（2℃~8℃）；37℃恒温培养箱。