ICS 65.020.30
CCS B41
DB42/T 1589—2020
湖北省地方标准
H7亚型禽流感病毒竞争ELISA抗体检测方法
Competitive ELISA for detection of antibodies against H7 subtype avian influenza virus

2020-07-07发布
2020-11-07实施
湖北省市场监督管理局 发布

前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则起草。本文件由华中农业大学提出，由湖北省农业农村厅归口管理。本文件起草单位：华中农业大学、武汉科前生物股份有限公司。本文件主要起草人：金梅林、范俊青、李冉、董俊、王园园、但汉并、吴超、董晓辉、徐高原。

本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅（电话：027-87665821，邮箱：hbsnab@126.com）或华中农业大学（电话：027-87282038，邮箱：xys@mail.hzau.edu.cn）。对本文件的修改意见建议请反馈至华中农业大学（电话：027-87286905，邮箱：jm18328@126.com）。

引言
禽流感（avian influenza, AI）是由甲型流感病毒感染引起的禽类急性传染病。按照致病力强弱可分为无致病性、低致病性、中致病性和高致病性禽流感。H7亚型禽流感病毒属于高致病性禽流感，我国将其列为优先防治和重点防范的人兽共患病。

目前检测H7亚型禽流感病毒抗体的经典方法为血凝抑制（HI）试验，该方法操作复杂、重复性差、灵敏度较低，且结果易受主观因素影响。本文件采用竞争ELISA抗体检测方法，以纯化病毒为包被抗原，结合酶标单克隆抗体，通过抗体竞争结合抗原表位来判断血清中抗体含量。该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强、适合高通量检测及结果客观直观等优点。

1 范围
本文件规定了H7亚型禽流感病毒竞争ELISA抗体检测方法的术语与定义、检测原理、检测条件、操作步骤及结果判定。本文件适用于H7亚型禽流感病毒抗体的检测。

2 规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。

3 术语与定义
3.1 辣根过氧化物酶（HRP, horseradish peroxidase）：通常来源于辣根，是临床检验及ELISA试剂盒中常用酶，广泛用于生化及免疫检测。

4 检测原理
本文件采用竞争免疫吸附法（cELISA）。待检血清中的抗体与酶标抗体竞争结合固相抗原。血清抗体含量越高，结合的酶标抗体越少，显色越浅。将H7亚型禽流感病毒抗原包被于固相载体表面形成固相抗原，待检血清与酶标抗体同时加入包被板。如血清中含有抗体，则与抗原结合，同时减少酶标抗体结合量。加入底物后，HRP催化底物生成有色产物，其颜色深浅与抗体含量呈负相关，从而实现定性或定量分析。该方法利用酶的高催化效率放大免疫反应信号，提高检测灵敏度。

5 检测条件
5.1 仪器与耗材：Ⅱ级生物安全柜或超净工作台、酶标仪（450nm滤光片）、离心机（4000r/min）、微量移液器（200μL、1mL）、枪头、恒温箱（37℃）、电子天平、96孔微量反应板、离心管（1.5mL、2mL、5mL）。
5.2 试剂：略