DB21/T2891—2017 香菇栽培种工厂化生产技术规程 1 范围 本标准规定了利用液体菌种生产香菇栽培种的有关术语和定义、液体菌种制备与相关技术要求、液体菌种抽样检测、栽培种技术要求、栽培种质量检测、生产记录与存档留样及标签标志包装运输。本标准适用于香菇栽培种的工厂化生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅所注明日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 - GB/T12728 食用菌术语 - GB19170 香菇菌种 - GB150.1～150.4 压力容器 - NY/T1742 食用菌菌种通用技术要求 - NY/T1731 食用菌菌种良好作业规范 - NY/T528 食用菌菌种生产技术规程 - NY/T1846 食用菌菌种检验规程 3 术语和定义 GB/T12728界定的术语，以及下列术语和定义适用于本文件： 3.1 发酵罐：进行发酵培养的专用设备，也称发酵反应器。 3.2 罐压：指液体菌种培养过程中培养器内保持的空气压力，单位：Mpa。 3.3 通风量：指液体菌种培养过程中每分钟通入培养基中的无菌空气的量，用V/V（培养基体积/通入空气体积）标示。 3.4 接种量：指接入培养器中的菌种的数量，以菌种体积与培养基体积的百分比标示。 3.5 摇瓶液体种：指装在玻璃三角瓶内在摇床上恒温振荡培养的液体菌种。 3.6 初始pH值：指液体培养基配制灭菌后未接种时的pH值。 4 要求 4.1 技术人员：应有与液体菌种生产所需的专业技术人员，包括检验人员。 4.2 生产场地、厂房和布局：符合NY/T528规定。 4.3 生产设施与设备：符合NY/T528规定。高压灭菌锅和蒸汽锅炉应符合GB150.1～150.4压力容器规定，并经政府有关部门检验合格。 4.4 总生产工艺流程：母种→摇瓶液体种→发酵罐液体种→栽培种。 4.5 培养基与母种 4.5.1 培养基：母种培养基使用附录A中A.1规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）或A.2规定的综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA）。液体种培养基根据香菇品种及当地原料的要求使用适宜配方（见附录B），严格掌握初始pH。栽培种培养基配方参照NY/T528标准附录B原种和栽培种常用培养基配方及其适用种类，根据香菇品种及当地原料的要求选择使用。 4.5.2 母种：母种继代培养后需按NY/T1846规定抽样，并进行感官检验和菌丝微观特征检验，合格菌种进入生产流程。母种质量要求符合NY/T1742关于母种生产的规定。 4.6 摇瓶液体种技术要求 4.6.1 培养基分装及灭菌：摇瓶液体种培养基装量应为容器体积的1/4至1/3，分装后应立即灭菌。按常规高压蒸汽灭菌锅操作规程，0.1Mpa～0.12Mpa（121℃～126℃），维持25min。 4.6.2 灭菌效果的检查：灭菌后的摇瓶液体种培养基于30℃±1℃培养箱恒温培养48小时后，观察确认无混浊、无异味，即可用于接种。 4.6.3 接种：严格按无菌操作程序，将母种斜面菌丝体切割成2mm～4mm颗粒，移入摇瓶培养基中，每100ml液体培养基接种菌丝体颗粒1颗～3颗。 4.6.4 培养条件：菌种培养温度26℃±1℃，空气相对湿度55%～65%，避光振荡培养。往复式摇床振荡频率60次～120次/分；旋转式摇床振荡频率150转～180转/分。 4.6.5 培养期的检查：每日检查生长状态，及时检出浑浊、异味、泡沫异常的不合格菌种。 4.6.6 培养结束：摇瓶静置1分钟后，菌丝球体积占比液体培养基体积的4/5以上，可结束培养。 4.7 发酵罐液体种技术要求 4.7.1 空气过滤器检查：滤芯在额定风量下，对粒径0.1～0.2um粒子的过滤效率在99.999%以上。空气阻力在280Pa以下。所有材质耐126℃高温。 4.7.2 发酵罐检查与清洗：检查罐上全部阀门、安全阀、压力表，要求完好，工作正常。对罐体内、外和全部阀门用流水进行冲洗，达到无死角、内壁无任何培养料残余物的洁净程度。 4.7.3 煮罐和空消：发酵罐初次使用、出现染菌、长期放置、更换品种时，都要求煮罐和空消进行灭菌。有内置电加热棒的培养器加水至容积的80%加热至121℃，维持40min。用外源蒸汽灭菌的培养器，蒸汽压力达到0.1Mpa～0.12Mpa（121℃～124℃），维持40min。 4.7.4 投料与定容：将配制好的培养基...