种猪场伪狂犬病净化技术规范
DB37/T36762019

发布日期：2019-08-30
实施日期：2019-09-30
发布单位：山东省市场监督管理局

前言
本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施，由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：山东省动物疫病预防与控制中心、山东省畜牧总站、山东汇众兽医科技服务公司。
本标准主要起草人：李云岗、张栋、张月、周开锋、楚遵峰、汪洋、王士荣、王敏、曹振山、刘波。

1 范围
本标准规定了种猪场猪伪狂犬病净化的检测方法、净化群的建立、净化场的维持及综合生物安全措施。本标准适用于种猪场猪伪狂犬病净化。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 17823 集约化猪场防疫基本要求
GB/T 17824.2 规模猪场生产技术规程
GB/T 18641 伪狂犬病诊断技术
GB/T 35911 伪狂犬病病毒荧光 PCR 检测方法
NY/T 1168 畜禽粪便无害化处理技术规范
NY/T 1568 标准化规模养猪场建设规范
DB37/T 2384 种猪场消毒技术规范
《病死及病害动物无害化处理技术规范》《跨省调运乳用种用动物产地检疫规程》

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 伪狂犬病 (Pseudorabies)
伪狂犬病是由疱疹病毒科疱疹病毒 I 型伪狂犬病毒（PRV）引起的猪及多种家畜和野生动物的传染病。
3.2 净化 (Eradication)
对种猪场采取一系列措施，达到消灭和清除猪伪狂犬病的过程。在某一限定的种猪场内，根据猪伪狂犬病的监测结果，及时发现并淘汰感染猪只，使种猪群中猪伪狂犬病逐渐被清除的疫病控制方法。
3.3 猪伪狂犬病 gE 基因缺失疫苗 (Pseudorabies gE gene-deleted vaccine)
利用猪伪狂犬 gE 基因缺失病毒株所制成的疫苗。

4 检测方法
4.1 仪器
4.1.1 荧光 PCR 检测仪。
4.1.2 PCR 仪和凝胶成像系统（根据实验室条件选择，替换 4.1.1）。
4.1.3 高速台式冷冻离心机：可控温至 4℃、离心速度可达 12000 r/min 以上。
4.1.4 组织研磨器或者研钵。
4.1.5 普通冰箱。
4.1.6 微量移液器：0.2 μL~2 μL，1 μL~10 μL，10 μL~100 μL，20 μL~200 μL，100 μL~1000 μL。
4.1.7 酶标仪。
4.1.8 恒温箱。
4.1.9 高压灭菌锅。
4.2 耗材
4.2.1 1.5 mL 离心管。
4.2.2 0.2 mL PCR 薄壁管。
4.2.3 酶标板，移液器吸头。
4.3 试剂
除非另有说明，在检测中使用的试剂均为分析纯，实验室用水应符合 GB/T 6682 的要求。
4.3.1 商品化 DNA 抽提试剂，于 4℃ 保存。
4.3.2 无水乙醇，-20℃ 预冷。
4.3.3 75% 乙醇、无水乙醇和双蒸水配制，-20℃ 预冷。
4.3.4 含 dATP、dGTP、dCTP、dTTP 各 10 mmol/L，-20℃ 保存，避免反复冻融。
4.3.5 普通 PCR 引物参照 GB/T 18641。荧光 PCR 引物和探针参照 GB/T 35911。
4.3.6 酶标检测试剂等效采用 PRV-gE 基因缺失疫苗配套的商品化鉴别检测试剂。
4.4 核酸检测
活猪采集扁桃体或全血，病死猪或流产胎儿采集大脑、扁桃体、淋巴结、肺脏等组织。依据 GB/T 18641 或 GB/T 35911，使用 PCR 方法，检测组织中的猪伪狂犬病病毒核酸。
4.5 血清学检测
4.5.1 猪伪狂犬病病毒 gB (PRV-gB) 抗体检测：采集猪血，分离血清。采用商品化 ELISA 试剂盒，检测猪血清中的 PRV-gB 抗体，评估免疫抗体水平。
4.5.2 猪伪狂犬病病毒 gE (PRV-gE) 特异性抗体检测：采集猪血，分离血清。采用商品化 ELISA 试剂盒，检测猪血清中的 PRV-gE 特异性抗体，评估野毒感染状态。
4.5.3 合格免疫抗体判定标准