ICS 07.100.30 B20 备案号：41840-2014 DB22/T2052-2014 《饲料中沙门氏菌测定 实时荧光PCR方法》由吉林省质量技术监督局发布，2014-02-28发布，2014-04-30实施。本标准仅供内部使用，不得翻印。 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001的规则起草，由吉林省质量技术监督局提出并归口。主要起草单位包括吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。主要起草人：史艳宇、刘金华、王伟、刘晓晖、赵立群、侯宇、柴竹林、张涛。 1 范围 本标准规定了饲料中沙门氏菌的实时荧光PCR检验方法，适用于饲料中沙门氏菌的快速筛选检测。 2 规范性引用文件 下列文件对本标准的应用是必不可少的。凡注日期的引用文件，其所注日期的版本适用于本标准；凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本标准。 - DB22/T2052-2014 - GB/T 6682 实验室用水规格和试验方法 - GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的检验方法 - GB/T 27403 实验室质量控制规范 3 术语和定义 3.1 实时荧光PCR（real-time fluorescent PCR） 实时荧光聚合酶链式反应。 3.2 Ct值（cycle threshold value） PCR反应中达到荧光阈值的循环数。 4 原理 对样品的增菌培养物进行DNA提取，通过实时荧光PCR扩增，观察增幅曲线，从而对饲料中的沙门氏菌进行快速检测。 5 试剂和培养基 除特别说明外，所有试剂均为分析纯，水按GB/T 6682规定为一级水。所有试剂均使用无DNA酶污染的容器分装。 5.1 引物及探针 - 上游引物：5'-GTGAAATAATCGCCACGTCGGGCAA-3' - 下游引物：5'-TCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3'