DB37/T3824.2—2019
青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定
Technical specification for silage quality testing and evaluation Part 2: Determination of absorbable starch in whole plant corn silage
2019-12-24 发布
2020-01-24 实施
前言
DB37/T3824—2019《青贮饲料质量检测与评价技术规范》分为4个部分：第1部分：全株玉米制作青贮饲料机械揉搓质量评价技术规范；第2部分：青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定；第3部分：多功能饲草粉碎机作业质量技术规范；第4部分：青贮饲料霉菌毒素检测技术规程。本部分为DB37/T3824—2019的第2部分。本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本部分由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本部分由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。
本部分起草单位：山东省畜牧总站、山东五征高北农牧机械有限公司、德州农慧农牧专业合作联合社、东营市畜牧兽医工作站、山东芳华农业机械有限公司。
本部分起草人：翟桂玉、刘栋、姜慧新、王兆凤、张文娟、仲崇岳、曹阳、纪中良、王志坚、郭爱华、刘刚、张磊、王玉霞。
1 范围
本标准规定了青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定方法。本标准适用于所有青贮玉米可吸收淀粉含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
NY/T728 禾本科牧草干草质量分级
NY/T2129 饲草产品抽样技术规程
3 术语与定义
下列术语与定义适用于本文件。
3.1 absorbable starch 可吸收淀粉
健康动物胃肠中能够吸收的淀粉及其降解产物的总称。
4 原理
样品经前处理后，先在沸水浴中经耐高温 $lpha$-淀粉酶水解，使可消化淀粉转化成葡萄糖，离心，得上清液，用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖含量（FS），沉淀加入一定浓度的氢氧化钾使之溶解，经葡萄糖淀粉酶作用将其转化成葡萄糖，用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖含量（SS），将获得的两个葡萄糖含量（FS+SS）相加，再乘以0.9即换算成可吸收淀粉含量。
5 仪器设备
5.1 离心机
5.2 电热恒温水浴锅
5.3 酸度计
5.4 分光光度计
5.5 电子分析天平（感量0.0001g）
5.6 容量瓶（100mL、1000mL）
6 试剂与溶液
除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
6.1 乙醚
6.2 耐高温 $lpha$-淀粉酶（120000U/mL）
6.3 2 mol/L 氢氧化钾溶液
6.4 磷酸盐缓冲液（pH 5.8）：分别称取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g，加适量水使其溶解，定容至1000mL。
6.5 醋酸盐缓冲液（pH 4.4）：分别量取0.2 mol/L醋酸溶液30.5mL及0.2 mol/L醋酸钠溶液19.5mL混匀。
6.6 葡萄糖淀粉酶（100000U/mL）
6.7 2 mol/L盐酸溶液
6.8 葡萄糖试剂盒
7 检测方法
7.1 样品前处理
7.1.1 样品的干燥
抽取青贮玉米样品，并进行烘干处理，烘干样品过40℃筛磨碎备用。
7.1.2 样品脱脂
称取烘干磨碎样品2g～5g（精确到0.001g），置于放有慢速滤纸的漏斗中，用30mL乙醚分三次洗去样品中脂肪，弃去乙醚。
7.2 可吸收淀粉含量测定
7.2.1 可吸收淀粉提取及转化
7.2.1.1 上清液部分
取0.5g试样放入50mL离心管，加入10mL（pH 5.8）磷酸盐缓冲溶液和1mL耐高温 $lpha$-淀粉酶，沸水浴30min，冷却至室温，离心（5000r/min，20min）获得上清液；加入10mL蒸馏水，洗涤沉淀，离心获得上清液（该步骤至少重复一次）。
7.2.1.2 洗涤沉淀物部分
将7.2.1.1获得的洗涤离心沉淀物，加入6mL 2 mol/L 氢氧化钾溶解沉淀，室温下振荡30min，促进沉淀溶解，以2 mol/L盐酸调pH至中性，加入5mL醋酸盐缓冲液（pH 4.4）和1mL葡萄糖淀粉酶。60℃水浴45min。离心（5000r/min，20min），收集上清液，再用10mL蒸馏水洗涤沉淀（该步骤重复两次），离心（5000r/min，20min)，获得上清液。
7.2.2 上清液的处理
7.2.2.1 分别将7.2.1.1和7.2.1.2所收集的上清液，定容至100mL容量瓶中。
7.2.2.2 葡萄糖含量的测定
根据葡萄糖试剂盒以及使用说明书，用分光光度计测定样品中葡萄糖的含量，以蒸馏水为空白管，以试剂盒自带标准液为标准管，把试剂与工作液按一定比例混合，置37℃水浴15min，以空白管调零，在505nm波长下读取各管吸光度值。
8 结果计算
8.1 计算公式
8.1.1 葡萄糖（X）含量计算公式：
X = (A - A_blank) / (A_std - A_blank) × C × 180
式中：
X —— 葡萄糖含量，mg/L；
A —— 样品管吸光度；
A_blank —— 空白管吸光度；
A_std —— 标准管吸光度；
C —— 标准管中葡萄糖的浓度，mmol/L。
8.1.2 可吸收淀粉（DS）含量计算公式：
DS = (C_F + C_S) × V × 0.9 / W × 100%
式中：
DS —— 可吸收淀粉含量，%；
C_F —— 第一次处理上清液（FS）样品中葡萄糖的浓度，mg/L；
C_S —— 第二次处理上清液（SS）样品中葡萄糖的浓度，mg/L；
V —— 溶液终体积，L；
W —— 样品重量，mg。
8.2 结果计算
同一试样取两个平行样测定，以其算术平均值作为测定结果，结果保留3位有效数字。
8.3 允许差
三个平行样的测定结果最大允许相对标准偏差为5%。