ICS 07.100.30 B20 备案号：41839-2014 DB22 吉林省地方标准 DB22/T2051-2014 饲料中肉毒梭菌测定 PCR 方法 Determination of Clostridium botulinum in feedstuffs PCR method 2014-02-28 发布 2014-04-30 实施 发布单位：吉林省质量技术监督局 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20001.4-2001 的规定起草。 本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。 主要起草单位为吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、中华人民共和国顺德出入境检验检疫局。 主要起草人包括史艳宇、刘金华、邵秋荣、刘斌、周亮、刘晓晖、主潇、任明月。 1 范围 本标准规定了饲料中肉毒梭菌的PCR检验方法。 本标准适用于饲料中A、B、E、F型肉毒梭菌的快速筛选检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期版本适用；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 3 术语和定义 3.1 肉毒梭菌 Clostridium botulinum 肉毒梭菌为梭菌科梭菌属革兰氏阳性芽孢杆菌，厌氧，在适宜培养条件下可产生具有强毒性的神经麻痹毒素，即肉毒毒素。 4 原理 样品经增菌培养后提取DNA作为PCR模板，通过PCR扩增并进行琼脂糖凝胶电泳检测产物特征条带，从而判断饲料中是否污染肉毒梭菌。 5 试剂 除特别说明外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合 GB/T 6682 一级水要求，所有试剂均需使用无DNA酶污染容器分装。 5.1 引物（见表1）