本标准规定了用高效液相色谱法、紫外分光光度法对茶叶中咖啡碱测定的原理、仪器与用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。本标准适用于茶叶中咖啡碱的测定。 GB/T 8312-2002 茶 咖啡碱测定 GB/T8312-2002 标准下载解压密码：www.bzxz.net

GB/T8312--2002
本标准是对GB/T8312一1987《茶咖啡碱的测定》的修订。本标准\第一法高效液相色谱法”等效采用ISO10727：1995《高效液相色谱法测定茶和固态速溶茶中的咖啡碱含量》。本标准与ISO10727：1995的主要差异是：将等效采用的ISO10727：1995方法作为本标准的第法。bzxZ.net
本标准与GB/T8312一1987的主要差异是：增加了第一法高效液相色谱法，并将GB/T83121987中“紫外分光光度法”作为本标准的第二法。本标准第一法和第二法可获得相同的结果。本标准自实施之日起，同时代替GB/T8312-1987。本标准由中华全国供销合作总社提出。本标准由中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院归口。本标准起草单位：中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院。本标准主要起草人：周卫龙、孙安华、钟萝。本标准由中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院负责解释。144
GB/T8312—2002
ISO前言
ISO（国际标准化组织）是一个各国标准化组织机构（ISO成员团体）的国际性联盟。通常制定国际标准的工作是由ISO技术委员会承担，每个戒员团体如有兴趣，都有权成为该项目委员会的代表，与ISO有联系的官方或非宫方的国际标准组织也参与工作。ISO与国际电工委员会（IEC）在电工标准文件紧密合作。
技术委员会所采纳的国际标准草案提交各成员团体表决，国际标准的出版必须取得不少于成员团体75%的赞成票。
国际标准ISO10727是由ISO/TC34农产食品技术委员会制定。国际标准IS010727的附录A和附录B仅供参考。145
1范围
中华人民共和国国家标准
茶咖啡碱测定
TeaDetermination of caffeine contentGB/T 8312--2002
eqv ISo 10727:1995
代替GB/T83121987
本标准规定了用高效液相色谱法、紫外分光光度法对茶叶中咖啡碱测定的原理、仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。本标准适用于茶叶中咖啡碱的测定。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T8302-2002茶取样
GB/T8303一2002茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定第法高效液相色谱法
3原理
茶叶中咖啡碱经沸水和氧化镁混合提取后，经高效液相色谱仪、C1s分离柱、紫外检测器检测，与标推系列比较定量。
4仪器和用具
实验室常规仪器及下列各项：
4.1高效液相色谱仪。
4.2紫外检测器：检测波长280nm。4.3分析柱：C18ODS柱）。
4.4分析天平：感量0.0001g。
5试剂和溶液
甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。5.1氧化镁：分析纯。
5.2高效液相色谱流动相：取600mL甲醇倒入1400ml，重蒸馏水，混，脱气。5.3咖啡碱标准液：称取125mg咖啡碱（纯度不低于99%）加乙醇：水（1：4）溶解，定容至250mL。使用时，待标准液至室温后，取2ml.加水至100mL作为工作液。6操作方法
6.1取样
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-06-17批准146
2002-12-01实施
按GB/T8302的规定。
6.2试样制备
按GB/T8303的规定。
6.3测定步骤
6.3.1试液制备
GB/T8312—2002
称取1.0g（准确至0.0001g）磨碎茶样（6.2），置于500mL烧瓶中，加4.5g氧化镁及300ml.沸水，于沸水浴中加热，浸提20min（每隔5min摇动一次），浸提完毕后立即趁热减压过滤，滤液移人500mL容量瓶中，冷却后，用水定容至刻度，混匀。取一部分试液，通过0.45μm滤膜过滤，待用。6.3.2色谱条件
6.3.2.1检测波长：紫外检测器，波长280nm。6.3.2.2流动相：水：甲醇的体积分数为7：3。6.3.2.3 流速:0.5 mL/min~1.5 mL/min。6.3.2.4柱温：40℃。
6.3.2.5进样量：10μl~~20μl.。6.3.3测定
准确吸取制备液（6.3.1)10uL～20μL，注入高效液相色谱仪，并用咖啡碱标准液（5.3)制作标准曲线，进行色谱测定。
7 结果计算
7.1计算方法
比较试样和标准样的峰面积，按式（1)计算：C×
咖啡碱(%）M,×100×100
式中：Ci-
测定液中咖啡碱含量，ug；
样品总体积，mL；
进样体积,μL;
试样的质量，g；
ml—试样于物质含量，%。
如果符合重复性(7.2)的要求，取两次测定的算术平均值作为结果，结果保留小数点后一位。7.2重复性
同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.2g。第二法紫外分光光度法
8原理
茶叶中的咖啡碱易溶于水,除去干扰物质后，用特定波长测定其含量。9仪器和用具
实验室常规仪器及下列各项：
9.1紫外分光光度仪。
9.2分析天平：感量0.001g。
（1）
10试剂和溶液
GB/T 83122002
所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。10.1碱式乙酸铅溶液：称取50g碱式乙酸铅，加水100ml，静置过夜，倾出上清液过滤。10.2盐酸：0.01mol/L溶液，取0.9mL浓盐酸，用水稀释1L，摇匀。10.3硫酸：4.5mol/L溶液，取浓硫酸250mL，用水稀释至11，摇匀。10.4咖啡碱标准液：称取100mg咖啡碱（纯度不低于99%）溶于100ml.水中，作为母液，准确吸取5ml加水至100mL作为工作液（1mL含咖啡0.05mg）。11测定步骤
11.1试液制备
称取3g（准确至0.001g）磨碎试样（6.2）于500mL锥形瓶中，加沸蒸馏水450mL，立即移人沸水浴中，浸提45min（每隔10min摇动-次）。浸提完毕后立即趁热减压过滤。滤液移人500mL容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2～3次，并将滤液滤人上述容量瓶中，冷却后用蒸罐水稀释至刻度。11.2用移液管准确吸取试液（11.1)10ml.移人100mL容量瓶中，加人4ml.0.01mol/l盐酸（10.2）和1ml.碱式乙酸铅溶液（10.1），用水稀释至刻度，混勾，静置澄清过滤，准确吸取滤液25mL*注人50ml.容量瓶中，加人0.1mL4.5mol/1.硫酸溶液（10.3），加水稀释至刻度，混勾，静置澄清过滤。用10mm比色杯，在波长274nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。11.3咖排誠标准曲线的制作
分别吸取0、1、2、3、4、5、6mL咖啡碱工作液（10.4）于一组25ml.容量瓶中，各加入1.0mL盐酸（10.2），用水稀释至刻度，混勾，用10mm石英比色杯，在波长274nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。将测得的吸光度与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线。12结果计算
茶叶中咖啡碱含量以干态质量分数表示，按式(2)计算：2××器
咖啡碱（%）=
Mz × m2
25×100
式中：C.根据试样测得的吸光度（A），从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量，mg/ml.L试液总量，ml
M试样用量，g；
m试样干物质含量，%。
如果符合重复性（7.2），取两次测定的算术平均值作为结果，保留小数点后一位。148
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