本标准规定了采用气相色谱、液相色谱测定叔丁基对苯二酚(TBHQ)的原理、试剂、仪器和设备、分析步骤、结果计算及精密度。本标准适用于较低熔点的食用植物油中TBHQ含量的测定。本标准不适用于熔点高于35℃以上的食用植物油中TBHQ含量的测定。本标准定量限：气相色谱法为0.001g/kg，液相色谱法为0.006g/kg。本标准中气相色谱法为仲裁方法。 GB/T 21512-2008 食用植物油中叔丁基对苯二酚(TBHQ)的测定 GB/T21512-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67. 200. 10
中华人民共和国国家标准
GB/T21512—2008
食用植物油中叔丁基对苯二酚（TBHO）的测定
Determination of tert-butylhydroguinone(TBHQ) in edible vegetable oil2008-03-18发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-08-01实施
GB/T21512—2008
本标准参考美国官方分析化学师协会（A0AC)公定方法983.15（第+-六版）《油脂和奶油中酚类抗氧化剂的测定液相色谱法》、中国国家标准GB/T5009.30-2003食品中叔丁基羟基香醚（BHA）与2,6-二叔丁基对甲酚(BH1)的测定方法\、轻工行业标准QB2395一1998\食品添加剂特丁基对苯二酚（TBHQ）》中的有关原理和技术内容，在试验的基础上，通过简化操作步骤，提高方法的可操作性和准确性而研究制定。
本标准由国家粮食局提出。
本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位：北京市粮油食品检验所。本标推主要起草人·阮玲、尚艳娥、冈琴、王郑平、夏天文。1范围
食用植物油中叔丁基对苯二酚（TBHO)的测定
GB/T 21512—2008
本标推规定了采用气相色谱、液相色谱测定叔丁基对苯二酚（TBHQ)的原理，试剂、仪器和设备、分析步骤、结果计算及精密度。
本标准适用于较低熔点的食用植物油中TBHQ含量的测定。本标准不适用于熔点高于35C以上的食用植物油中TBHQ含量的测定。本标准定量限气相色谐法为0.001.g/kg，液相色谱法为0.006g/kg。本标准中气相色谱法为仲裁方法。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T5524植物油脂检验扦样、分样法GB/T15687油脂试样制备
3气相色谱法
3.1原理
食用植物油中的TBHQ经体积分数为80%乙醇提取、铱缩、定容后，用气相色谱仪测定，外标法定量。
3.2试剂wwW.bzxz.Net
除非另有说明，本标准所使用的试剂为分析纯，水为蒸水或去离子水或相当纯度的水3.2.195%乙醇。
3.2.2无水乙醇。
3.2.3二硫化碳。
80%乙醇溶液：量取80ml95%乙醇和15mL蒸馏水，将二液混合。3.2.4
3.2.5TBHQ标准储备溶液（1000μg/mL）：准确称取TBHQ基准试剂（相对分子质量166.22,含量≥98.0%)0. 100 0 g，放入小烧杯中,用 1 mL 无水乙醇溶解 TBHQ晶体后,加入 5mL左右二硫化碳，转移到 100 ml. 容量瓶中。再用 1 mL 无水乙醇洗涤烧杯后,加人 5 mL左右二硫化碳,转移到容量瓶中，用二硫化碳至少洗涤3次烧杯，定容至100mL，配成浓度为1000μg/mL的TBHQ标准储备液，置于棕色瓶中4℃下保存，可保存6个月。3.3仪器和设备
3.3.1气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器(FID)。3.3.2混合器：旋涡式混合器。
比色管：25mL。
瓷蒸发Ⅲ：60mL。
GB/T21512--2008
3.3.5刻度试管：2mL或5mL
3.3.6微量注射器。
3.4分析步骤
3.4.1样品的扦样，分样和制备
按GB/T5524、GB/T15687执行。
3.4.2试样处理
准碗称取试样2.C0g于25mL比色管中，加人6mL80%乙醇溶液，置旋涡混合器上浪合3g~5s（或振摇15s），静置片刻，放人90C左右的水中加热促其分层，分层后立即将上层提取液用吸管转移到蒸发血中（用吸管转移时切勿将油滴带人），再用6mL80片艺醇溶液重复提敢试样两次，提取液并加人蒸发Ⅲ中。将蒸发血放在80C水浴上通风挥发或自然挥发至近于（切勿蒸于），向蒸发皿中加入二硫化碳，少量多次洗涤蒸发Ⅲ中残留物，转移到刻度试管中，用二硫化碳定容至2.CmL，作为试样测定液。
3.4.3色谱参考条件
色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长3AW DMCS。
仪器条件：检测器
力55kpa。
3.4.4.1制作标准
旗装徐布
OV1固定液的80月~
1oc Chromosorb
进样口温度250℃柱温180氮气压力250kPa，氢4气压力65kPa，空气压
准确移取TBHQ标准储备溶液0.0mL.20mL.75mL10.cmL、12.5L于50mL容量瓶中，用二硫化饿定容，制备成浓度为0g/mL、50ug/mL、100ag/ml1508g/ml.200μg/mL
250ug/mL的标准液用微量注射器山低到高依次准确吸取不同浓度的标准落液2u注人气相色谱仪测定。以TBHQ峰面积为纵坐标，求度为横坐标，绘制标准由线3.4.4.2试样测定S
用干净的微量注射器准确吸取2测定没，注人气相色仪测定，取试样的TBHQ峰面积与标准出线比较定量，
3.5结果计算
试样中的叔丁基对举一份（TBHQ）含量按式（1进行计算：X
式中：
exVx1c00
X1OCOX1000
试样中的叔丁基对苯二酚（TBHQ）含量单位为克每千克（/kg）；(12
由标准曲线上查出的试样测定液中相当于TBHQ的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）：V—-试样提取液的体积，单位为毫升（mL）：试样的质量，单位为克（g）
计算结果保留两位有效数字。
3.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的15%。4液相色谱法
4.1原理
食用植物油中的TBHQ经体积分数为95%乙醇提取、浓缩、定容后，用液相色谱仪测定，外标法定量。
4.2试剂
4.2.1甲醇：色谱纯。
4.2.2乙睛：色谱纯。
4.2.336%乙酸：分析纯、
4.2.495%乙醇：分析纯。
4.2.5异肉醇：分析纯，重蒸馏。4.2.6异丙醇-乙腈混合液：V（异丙醇）十V（乙腈）-1+1。GB/T21512—2008
4.2.7TBHQ标准储备溶液（10COg/mL）：准确称取TBNQ基准试剂（相对分子质量166.22.含量≥98.0%>0.05℃Cg，放人小烧探中，用异丙醇-乙磨混合液溶解，转人53mL.容量瓶中，再用少量混合液洗涤烧杯3次，转人容量瓶中，用异丙醇-乙混合液定容至50ml配成浓度为1000μg/mL的TBHQ标准储备液，置棕套瓶节4C下保存，可保存6个月。4.2.BTBHQ标准释散
0Gμg/zL）：准碗移取TBHQ标准储备液10.0CmL于100mL容量瓶中，用异丙醇-乙晴混合液定容至100mL，置于棕色瓶中4C下保存。4.3仪器
.3.1高效液相谱：配有二极管阵列或紫外检测器蒸发器
4.3.3混合器
具塞试
4.3.5浓维瓶
4.3.6微量注的器
4.4分析步骤
旋转蒸发器
武混合器。
4.4.1样品的折样分样和制备
按GB/T55%
4.4.2试样处理
B/T15687执行
准确称联试样，
于25mL比色管中，加人6mL95%z醇溶液，置旋涡混合器上混合3s~5s（或振15s），静置片到成人90C左右水浴中加热促其分层，分层后立即将上层提取液用吸管转移到浓缩瓶中（用吸管转移时切勿将油滴带人）再用6mL95%乙醇溶液重复提取试样两次，合并提取液于浓缩瓶内，该液可放在冰箱中储存约16h。乙醇提液在40℃下，min内，用真空旋转蒸发器浓缩至约1l，将浓缩液转移至10ml.试管中，用异丙醇-乙睛混合液至少洗涤3次浓缩瓶，定容至10mL，经0.45um滤膜过滤于小瓶中，作为试测定液。
4.4.3色谱参考条件
色谱柱：C柱250mmX4.6rim（内径）。流动相：（A）甲醇-乙睛混合液[V（甲醇）+V（乙臂）=1+I：（B)5%乙酸水溶液（10QmL水加5mL36%Z酸）。
柱箱温度：40°0
波长280mm
流速：2mL,min.
洗脱梯度：0min~8min流动相（A）从30%线性增至100%，8min~14min流动相（A）100%，14min~-17min流动相（A)从100%降至30%3
GB/T21512—2008
4.4.4测定
4.4.4.1制作标准曲线
准确移取TBHQ标准使用液0.0rnL.0.5mL.1.CmL1.5mL.2.0mL、5.0mL.10.0mL，于10.0mL容量瓶中，用异丙醇-乙睛准合液定容至10mL，制备成浓度为0ug/ml、5ug/ml.、10ug/mL20g/imL、50ug/mL100ug/mL的标准溶液，用微量注射器主低到高依次准确吸取不同浓度的标准溶液20L注人液相色谱仪测定。以TBIIQ峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，4.4.4.2试样测定
用干净的微量注射器准确吸取20L测定液，注人液相色谱仪测定，取试样的TBIIQ峰百积与标准曲线比较定量。
4.5结果计算
试样中的TBHQ含量按式（2)进行计算：X
CXVXI000
m X1 000X1000
式中：
X，试样中的TBHQ含量，单位为克每千克（g/kg)·(2)
由标准曲线上查出的试样测定液中相当于TBHQ的浓度，单位为微克每毫升（pg/mL）；V一试样提取液的体积，单位为毫升（mL）；一试样的质量，单位为克（g）。m
计算结果保留两位有效数字。
4.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的10%。4.7色谱图
V(X100)
2-BHA;
图1气相色谱图
TBHQ：
2—BHA;
3——BHT
图 2 液相色谱图
GB/T 21512—2008
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