GB/T 9695的本部分规定了肉和肉制品中维生素PP含量的微生物测定方法。本部分适用于肉和肉制品中维生素PP含量的测定。 GB/T 9695.25-2008 肉与肉制品 维生素PP含量测定 GB/T9695.25-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

105 07.03
中华人民共和国国家标准
GB/T9695.25—2008
代替GB/T9695.25—1990
肉与肉制品
维生素PP含量测定
Meat and meat products-Determination of vitamin PP content2008-06-25发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-01-01实施
GB/T9695由以下部分组成：
GB/T9695.1《肉与肉制品
GB/T9695.2《肉与肉制品
-GB/T9695.3《肉与肉制品
GB/T9695.4《肉与肉制品
GB/T9695.5《肉与肉制品
游离脂肪含量的测定》；
脂肪酸测定》；
铁含量测定》；
总磷含量测定》；
PH测定》；
胭脂红着色剂测定》；
GB/T9695.6《肉制品
GB/T9695.7《肉与肉制品
-GB/T9695.8《肉与肉制品
GB/T9695.9《肉与肉制品
GB/T9695.10《肉与肉制品
GB/T9695.11《肉与肉制品
GB/T9695.13《肉与肉制品
GB/T9695.14《肉制品
总脂肪含量测定》；
氯化物含量测定》；
聚磷酸盐测定》；
六六六、滴滴涕残留量测定》；氮含量测定》；
钙含量测定》；
淀粉含量测定》；
GB/T9695.15《肉与肉制品
GB/T9695.17《肉与肉制品
GB/T9695.18《肉与肉制品
GB/T9695.19《肉与肉制品
GB/T9695.20肉与肉制品
GB/T9695.21《肉与肉制品
GB/T9695.22《肉与肉制品
GB/T9695.23《肉与肉制品
GB/T9695.24肉与肉制品
GB/T9695.25《肉与肉制品
GB/T9695.26《肉与肉制品
-GB/T9695.27《肉与肉制品
GB/T9695.28《肉与肉制品
GB/T9695.29《肉制品
水分含量测定》；
葡糖酸-8-内酯含量的测定》；
灰分测定》；
取样方法》；
锌的测定》；
镁含量测定》；
铜含量测定》；
L(-)-羟脯氨酸含量测定》;
胆固醇含量测定》；
维生素PP含量测定》；
维生素A含量测定》；
维生素B含量测定》
维生素Bz含量测定》；
维生素C含量测定》；
-GB/T9695.30《肉与肉制品维生素E含量测定》；-GB/T9695.31《肉制品总糖含量测定》。本部分为GB/T9695的第25部分。本部分代替GB/T9695.25—1990《肉与肉制品维生素PP含量测定》。本部分与GB/T9695.25—1990相比主要变化如下：GB/T9695.25-—2008
按照GB/T1.1—2000《标准化工作导则第1部分：标推的结构和编写规则》和GB/T20001.4—2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》进行了结构调整和文字修改；
增加了规范性引用文件；
增加了微生物法，作为第一法；分光光度法作为第二法。GB/T9695.25—2008
本部分由全国食品工业标推化技术委员会肉禽蛋制品分技术委员会提出并归口，、本部分起草单位：中国商业联合会商业标准中心、国家加工食品质量监督检验中心（广州）、广州市产品质量监督检验所。
本部分主要起草人：罗海英、郭新东、罗曼妮、黄金凤、黄宇锋、罗晓茵、吴玉銮。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：-GB/T9695.25—1990。
1范围
肉与肉制品
维生素PP含量测定
GB/T9695.25-—2008
GB/T9695的本部分规定了肉和肉制品中维生素PP含量的微生物测定方法。本部分适用于肉和肉制品中维生素PP含量的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T9695的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用引用文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法（negISO3696：1987）3术语和定义
下列术语和定义适用于GB/T9695的本部分。3.1
肉与肉制品中维生素PP的含量vitaminPPcontent ofmeat and meat products在本部分规定的条件下，测定的尼克酸（烟酸）和尼克酰胺（烟酰胺）的总量。第一法微生物法
4原理
烟酸是植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）生长所必需的维生素。在一定条件下，植物乳杆菌的生长情况及其代谢物与培养基中烟酸的含量成正比。将试样溶液加到只缺少烟酸的培养基里培养，测定培养液对一定波长的光的透光率或吸光度，用烟酸标准溶液得出的微生物生长量与烟酸含量的标准曲线来计算试样中烟酸的含量。5试剂和材料
如无特别说明，所用试剂均为分析纯，注：琼脂培养基和烟酸测定用培养基可购买符合测试要求用的成品。5.1水
符合GB/T6682—1992规定的三级水。5.2氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.4mol/L]称取3.2g氢氧化钠，用水溶解，并稀释至100mL。5.3盐酸溶液[c(HCI)=0.2mol/L]量取2mL盐酸，用水稀释至120mL，混匀。5.4生理盐水
称取9g氧化钠，溶于1000mL水中。每次使用时分别倒入6支～8支10mL试管中，每支约加10mL，塞好棉塞，于高压蒸汽灭菌器内121℃灭菌15min，备用。GB/T9695.25—2008
5.5乙醇溶液[1+3（体积比)]
量取250mL乙醇，加人750mL水，混匀。5.6菌种
植物乳酸杆菌（Lactobacillusplantarum）。5.7乳酸杆菌琼脂培养基
光解陈15g，葡萄糖10g，番茄汁100mL，磷酸二氢钾2g，聚山梨糖单油酸酯1g，琼脂10g，加蒸馏水至1000mL，pH6.8±0.2(25℃）。5.8乳酸杆菌肉汤培养基
光解陈15g，葡萄糖10g，番茄汁100mL，磷酸二氢钾2g，聚山梨糖单油酸酯1g，加蒸馏水至1000mL,pH6.8±0.2(25℃)
5.9烟酸测定用培养基
维生素测定用Casami
ais12g，葡萄糖40g，乙酸钠20g，L胱氨酸.4g，DL-色氨酸0.2g，盐酸腺嘌呤20mg，盐酸乌嘌咚20mg，尿嘧淀20mg，盐酸硫胺素200，泛酸钙200μg，盐酸吡哆醇400μg，核黄素400μg星苯甲酸too
0.4g，氯化钠20mg/吨酸亚铁20
5.10烟酸标准储备②/0.1mg/mul称取0.05g（准确至0.001g）已
(5.5)溶解并定容载58%
dmL，混匀，冰箱
5.11烟酸标准中间
（c=1μg/mE
吸取1.00m烟酸标准储备液
箱中贮存。此溶液号
升相当于1
5.12烟酸标准傅角液（c=100ng/吸取5.00ml烟酸标准中间液
于100ng烟酸。
6仪器和设备
实验室常规仪器应
义器。
解贮存于五
贮存。
二钾Ng，磷二氢钾1g，硫酸镁
pH67±0.2(25℃)。
燥器中的烟酸标准品，用乙醇溶液此溶液每
于100ug烟酸。
用乙醇溶液.5）全容，混勺，于冰水定容，混生。此溶液每毫升相当6.1机械设备：用于试程的购
质化。包括高速旋转的切割机，或多孔板的孔径不超过4mm的绞肉机。干燥箱。
恒温培养箱。
6.4离心机：转速可达2500min。6.5pH计。
磁力搅拌器。
6.7旋涡混合器。
6.8高压蒸汽灭菌器。
6.9分光光度计。
6.10分析天平，可准确称重至0.001g。7取样
本部分不规定取样方法。取样方法参见GB/T9695.19。实验室所收到的样品应具有代表性且在运输和储藏过程中没受损或发生变化。至少取有代表性的样品200g。
8试样制备
GB/T9695.25-—2008
使用适当的机械设备（6.1）将试样均质。注意避免试样的温度超过25℃。若使用绞肉机，试样至少通过该仪器两次。
将试样装人密封的容器里，防止变质和成分变化。试样应尽快进行分析，均质化后最迟不超过24h。
9分析步骤
菌种液的制备
将植物乳酸杆菌（5.6)贮备菌种穿刺接种手乳酸杆菌琼脂培养基（5.7)内，于37℃培养20h~24h。贮存于2℃~8℃冰箱虫
。从琼脂培养基移取部分菌种于灭菌的10mL乳酸杆菌肉汤培养基(5.8)中，于37℃培养20
h。在无菌条件下离心该培养液omin（500r/min），倾去上清液。手旋涡混合器上快速混合均勾，离心10mp(250mt/min），倾去上清液。重加人已灭菌的生理盐水
复清洗操作两次。加人已灭做的然茶器上快速混合的匀，吸取一定体积的菌液，加至10mL已买
9.2试样处理
理盐水（
称取5g试样（准
确至0.00
置于磁力搅拌器
拌的同时用0.
中，用水洗涤三
试样中维生素
度为宜)，混匀
合器开快速混合
L棕色三
上搅拌混奇
L氢氧化钠器
次，洗液并
含量，吸取
9.3试样培养液的制备
按表1依次
蒸馏水/mL
试样溶液/mL
烟酸测定用培养基/mL
121℃灭菌30
新告浴
用永定
匀，使菌种形成混悬液，备用。0.2mol/盐酷溶液（5.3)100mL，令却。充分搅伴，直至颗粒分散，于搅4~4.6，转移至250mL棕色容量瓶最初的25
80mL滤液。根据
旋湿的滤液，用水稀释至适痘衣度（以不超出标维工作液系列的浓水、试样溶液
因酸测定用培
于试管中。
一式三份。
注：于测定前配制烟酸测定用培养基，配制后放登不要超过6h，需避光处理，避免空气污染。9.4标准工作液的制备
按表2依次加人水、烟酸标准使用液（5.12)和烟酸测定用培养基（5.9)于试管中。式三份。表2标准工作液的配制
蒸馅水/mL
标准使用液/mL
烟酸测定用培养基/mL
标准工作液的浓度/(μg/mL）
试管号
GB/T9695.25-2008
9.5灭菌
将各试管于121℃灭菌10min，取出后快速均匀地冷却至室温。9.6接种
在无菌条件下接种所有试管，除标准工作液的1号试管外，其余试管均滴加适量的菌种液（9.1)，使测定时标准工作液3号试管内的溶液于600nm处的吸光度约为0.2。盖上盖，充分振荡混合所有管。9.7培养
将所有试管于37℃恒温培养24h。10测定
培养液（9.7)于121℃灭菌5min，取出后快速均勾地冷却，于旋涡混合器上混合均匀。于分光光度计波长600nm处，以未接种空白标准工作液为参比，将已接种空白标准工作液的吸光度调为零，测定其余管内溶液的吸光度。以标准工作液的浓度为横坐标、相应的吸光度（三次测定的平均值）为纵坐标绘制标准曲线。由测试溶液各水平的吸光度，从标准曲线上查出溶液中维生素PP的浓度值。11计算
试样中维生素PP的含量按式(1)计算：w
式中：
cxvxfx1000
mx1000x1000
一试样中维生素PP的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c-—从标曲线上查得的试样溶液中维生素PP的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；V—一试样溶液第一次定容的体积(9.2)，单位为毫升（mL)；f———试样溶液稀释的倍数；
一试样的质量，单位为克（g）。结果保留至小数点后第一位。
每一份试样溶液（9.2)均可得到四个水平的测定值，计算所得值的平均值。含弃超过平均值土15%的数值。重新计算平均值，重新检验是否有超过此平均值土15%的数值，舍弃超过此平均值士15%的数值。如果剩余管数少于所测定的四个水平稀释液的管数的三分之二，用于计算样品浓度的数据是不充分的，应重新进行测定。如果剩余管数不少于所测定的四个水平稀释液的管数的三分之二，则可根据平均值计算其样品中的含量。
12·试验报告
试验报告应说明：
一所有与识别样品有关的必需信息；一取样方法；
一依据本部分所采用的方法；
一本部分未规定或未列为可选的所有操作，以及可能影响测试结果的其他因索；测试结果；
一如果检验了重复性，列出最终结果。13原理bZxz.net
第二法比色法
GB/T 9695.25-2008
维生素PP经氢氧化钙溶液提取，与溴化氰结合，在对氨基苯乙酮作用下，生成黄色化合物，在420nm波长处测定吸光度，标准曲线法定量。14试剂和材料
如无特别说明，所用试剂均为分析纯。14.1水，符合GB/T6682—1992规定的三级水。14.2乙醇。
14.3戊醇。
14.4盐酸溶液[c(HCI)=6mol/L]：量取25mL盐酸（p20~1.19g/mL），用水稀释至50mL。14.5硫酸浴液Lc（HzSO）=5mol/L]：量取13.5mL硫酸（p20~1.84g/mL），用水稀释至.50mL。14.6硫酸溶液[c（H,SO）=1mol/L]：量取2.7mL硫酸（p20~1.84g/mL），用水稀释至50mL。14.7氢氧化钙溶液[cCCa(OH)，J=1mol/L]：称取3.7g氢氧化钙，用水溶解并稀释至50mL14.8硫酸锌：饱和溶液。称取12g硫酸锌，在室温下用水溶解并稀释至20mL，如有沉淀须过滤。4.9氢氧化钠溶液[c(NaOH)=3mol/L]称取6g氢氧化钠，用水溶解并稀释至50mL。14.10氢氧化钠溶液[c（NaOH)=1mol/L]：称取2g氢氧化钠，用水溶解并稀释至50mL。14.1110%溴化：称取2g溴化氰，用水溶解并稀释至20mL。注：溴化氰是剧毒试剂，应载上手套在通风橱里配制。14.122%对氨基苯乙酮：称取对氨基苯乙酮1g，用少量盐酸溶解，用水稀释至50mL。14.13酚酞指示剂（c=10g/mL）：称取0.5g酚酥，用乙醇（14.2)溶解并稀释至50mL。14.14烟酸标准储备液（c=1mg/mL）：称取已干燥恒量并贮存于五氧化二磷干燥器中的烟酸标准品0.1g准确至0.001g），用5mol/L硫酸（14.5)1mL溶解，转移至100mL容量瓶中，定容。在4℃冰箱内保存。
14.15烟酸标准工作液：吸取烟酸标准储备液（14.14）0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、2.50mL，分别置于100mL容量瓶中，用水定容，混匀。此标准工作液系列中烟酸的浓度分别为2.5μg/mL、5μg/mL、10g/mL20μg/mL、25μg/mL。15仪器和设备
实验室常规仪器及下列仪器。
15.1机械设备：用于试样的均质化。包括高速旋转的切割机，或多孔板的孔径不超过4mm的绞肉机。
15.2恒温水浴锅。
15.3分光光度计。
15.4分析天平：可准确称重至0.001g。16取样
同第7章。
17试样制备
同第8章。
G/T9695.25--2008
18分析步骤
18.1提取
称取试样2g（准确至0.001g）于三角瓶中，加人1mol/L氢氧化钙溶液（14.7)10mL，水40mL，混后，在沸水浴上提取90min。取出，冷却后移人100mL（V,）容量瓶中，用水定容。混匀过滤，滤液备用。
18.2中和
吸取滤液25.00mL(V，）于50mL（V，）容量瓶中，加酚指示剂（14.13）两滴，用6mol/L盐酸(14.4)中和至红色刚刚褪去。加人饱和硫酸锌溶液（14.8)2mL及几滴戊醇（14.3），用3mol/L氢氧化钠溶液（14.9)和1mol/L氢氧化钠溶液(14.10)调至粉红色。滴加1mol/L硫酸溶液(14.6)，使粉红色刚好褪去。用水定容，混勾，放置10min后过滤，滤液备用。18.3测定
分别吸取烟酸标准工作液（14.15)1.00mL（V.）于具塞试管中，加水4mL。吸取试样溶液（18.2）5.00mL(V，）于具塞试管中。于上述各试管中加人10%溴化氰溶液（14.11)2mL，摇匀。将各试管置于60℃~70℃水浴中保温15min后，迅速冷却。加人2%对氨基苯乙酮溶液（14.12)1mL，摇匀，在暗处放置15min。在420nm波长处测定吸光度。18.4标准曲线的绘制
以标准工作液的浓度为横坐标、相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。19计算
试样中维生素PP的含量按式(2)计算：w=xxxX1000
mxV,xV.x1000
式中：
试样中维生素PP的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；（2）
C—从标准曲线上查得的待测试样溶液中维生素PP的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；Vs一-试样溶液第二次定容的体积（18.2），单位为毫升（mL)；V，一试样溶液第一次定容的体积（18.2），单位为毫升（mL）；V—-显色用标准工作液的体积(18.3)，单位为毫升（mL)，一试样的质量，单位为克（g）；V——中和用试样溶液的体积(18.2),单位为毫升(mL)；V，—显色用试样溶液的体积(18.3),单位为毫升(mL)。结果保留至小数点后一位。
20试验报告
同第12章。
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