NY/T 1618-2008
基本信息
标准号:
NY/T 1618-2008
中文名称:鹿茸中氨基酸的测定 氨基酸自动分析仪法
标准类别:农业行业标准(NY)
标准状态:现行
出版语种:简体中文
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相关标签:
氨基酸
测定
自动
分析仪
标准分类号
标准ICS号:农业>>农业和林业>>65.020.30动物饲养和繁殖
中标分类号:农业、林业>>畜牧>>B44饲养动物
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标准简介
NY/T 1618-2008 鹿茸中氨基酸的测定 氨基酸自动分析仪法 NY/T1618-2008 标准下载解压密码:www.bzxz.net
标准内容
ICS65.020.30
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 1618—2008
鹿茸中氨基酸的测定
氨基酸自动分析仪法
Determination of amino acids in velvet antlerby amino acid analyzer
2008-05-16发布
2008-07-01实施
中华人民共和国农业部发布
木标准的附录A为资料性附录。
本标推出中华人民共和国农业部畜牧业司提出言
本标准由全国育牧业标准化技代委员会口儿本标准起草单位:农业部参茸产品质量监督检验测试中心本标准参加起草单位:吉林省农业科学院大豆研究所。本标准主要起草人:陈丹、李月茹、王艳梅、初丽伟、尚梅、王艳红、张明。NY/T1618—2008下载标准就来标准下载网
NY/T1618—2008
鹿茸中氨基酸的测定氨基酸自动分析仪法小标催规定了子用氨基酸白动分析仪测定鹿茸中氨基酸的常规酸水解法和氧化酸水解法。本标准适用于鹿年(包拆茸片、茸粉)中氨基酸的测定。常规酸水解法适用于测定天门冬氨、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、氢酸和猎氨酸的含量。氧化酸水解法适用于测定胱氨酸、蛋氨酸的含量。2规范性引用文件
下列标准包含的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版不适用本标推,然而:鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的晟新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T6682:分析实验室用水规格和试验方法3原理
常规酸水解法使鹿茸蛋白在110℃、c(IICI)…6mol/L盐酸作用下,水解生成游离氨基,经离子交换色谱法分离后,与三酮溶液产生颜色反应,再通过分光光度计测定非含硫氨基酸:天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨氢酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的含量。含硫氨基酸需用氧化酸水解法进行测定。氧化酸水解法将鹿年中的含硫氨基酸(胱氮酸、半胱氨酸和蛋氨酸)用过甲酸氧化并经盐酸水解牛成磺基丙氨酸和蛋氨酸佩.然后用离子交换色谱法分离测定。
4试剂和材料
除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂,实验用水应符合GB/下6682。4.1常规酸水解法
4.t.1盐酸:优级纯。
4.1.2酸解剂:盐酸溶液c(HC1>=6 mol/L,将盐酸(见本标推4. 1.1)与去离子水等体积混合,然后在衔百密升此溶液中加人0.1g的莱酚。4.1.3冷炼剂市售食盐与冰接1:3混合。4.1.4.稀释上机样品用的柠檬酸缓冲液,pH2.2.c(Na+)=0.2mo1/l:称取柠檬酸三钠19.6g,用水溶解后加人盐酸16.5mL.硫二甘醇5.0mL,苯酚1g,加去离子水稀释到1000mL,摇匀,用G,玻璃砂芯漏斗过滤,备用。
4.1.5不同pH和离了度的洗脱用柠檬酸钠缓冲液:按氨基酸白动分析仪的说明书配制。4.1.6节三酮溶液:按氨基酸自动分析仪的说明书配制。4.1.7氨基酸混合标准储备液:含L-天门冬氨暖、L-苏氮酸等17种嘴规蛋白水解液分析用层析纯氨基酸,各组分浓度氨苯酸)=2.50(或2.00)mmol/L。4.1.8混合氢基酸标准工作溶液:吸取一定量的氢基酸混合标准储备液(见本标准4.1.7)置于50mL容量瓶中,用稀释上机用柠檬酸缓冲液(见本标准4.1.)定溶,混匀,使各氨基酸组分浓度(氨基酸):100 μmol/L
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4.2氧化酸水解法
4.2.1过用酸溶液,将30%过氧化氮(GB/T6684)与88%甲酸(IIG3-1296)按1:9(V/V)混合,于室温下放置1h,置冰水溶中冷却30min.临用前配制。4.2.2氧化终止剂:48%氢漠酸(GR621)。4.2.3酸解剂,盐酸溶液c(IIC1)=6mol/I将盐与去离子水等体积混合。4.2.4稀释.上机样品用的柠檬酸缓冲液,PH2.2,c(Na-)--0.2mol/I.称取柠檬酸一钠19.6,用去高子水溶解后加人盐酸16.5mI,硫二甘醇5.0m,苯酚1g,加去离子水稀释到1.000mL,勺,用G玻璃砂芯漏斗过滤,备用。
4.2.5不同PH和离子强度的洗脱用柠檬酸钠级冲液:按氨基酸白动分析仪的说明书配制。4.2.6节三雨溶液:按氮基酸自动分析仪的说明书配制。4.2.7磺基内氨酸一蛋氨酸标准储备液,2.50mmol/L准确称取磺基丙氨酸105.7ing和蛋氨酸砜113.3mg.加去离子水溶解并定容至250ml.4.2.8氨基酸混合标准储备液:含L-天门冬氨酸、L-苏氨酸鳞17种带规蛋白水解液分析用层析纯氨基酸:各组分浓度c(氨基酸)=2.5Ummbl/L。4.2.9混合氮基酸标准工作溶液:吸取磺基丙氨酸一蛋氨酸标准储备液(.见本标准1.2.7)和氨基酸混个标准储备(见:个标准4.2.8)各1.0tnL,置于50mL容量瓶中,用稀释上机用柠檬酸缓冲波(见本标4.2.4)定容,混句。各有关组分涨度为50umo/L。5仪器、设备
5.1高速中药粉碎机
5.2标准筛:孔径(20目)、0.25mm(60日)5.3真空蒙与真空规
5.4喷灯。
5.5怕温箱:控温精度士1°℃。5.6施转蒸发器或浓缩器:可在室温至65℃间调控控温精度土1℃,真空度为3.3×103Pa(25mmHg).5.7氨基酸自动分析仪。
6样品
取不同规格鹿菩(三杖萨,二杠岸、毛桃岸及骨片、蜡片等)和不同部位鹿茸(上殿、中段、下段)样品初步粉碎(全部过10月标准筛),内用四分法缩减分取约25g样品,粉碎并过0.25mm孔径(60周)标准筛.筛上部分样品量≤0.5,将筛上和筛下部分充分混匀后装人磨瓶中备用。薄片:用四分法缩减分取约25样品,粉碎并过0.251mm孔径(60开)标准筛,筛上部分样品量公0.5g,将筛上和筛下部分充分混句后装人磨口瓶中各用。年粉:直接过0.25mm孔径(60H)标准筛,筛上部分样品量0.5g如巢筛上部分样品量0.5g:继续粉碎,直到符合要求,将筛上和筛下部分充分混匀后装人磨口瓶中备用。在进行同类产品多个样品质量评价时,要取相同规格、相同部位的样品进行测定:7分析步骤
7.1样品测前处理
7.1.1常规酸水解法
准确称取制备好的鹿茸试样30mg,精确至0.0001g。于水解管中,加15mL酸解剂(见本标准2
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4.1.2),将水解管放人冷冻剂中冷冻,然后抽真空至7Pa(≤5×10-2mmHg)后封管。将水解管置于110℃=1恒温箱中,水解24h。取用冷却置宰温,开管后过滤,用移液管吸取适量的滤液于旋转热发器或浓缩器中在60℃真空度为3.3×10°Pa(25mmHg)的条件下蒸发至干,残留物用2mL去离了水溶解,单复上述操作3次,最后蒸干,用2mLpH2.2的柠酸缓冲液(见本标准4.1.4),使样品落液中氨基酸浓度达50zmo1/L~250μol/L,摇匀,取上清液上机测定。7.1.2氧化酸水解法
准确称取制备好的鹿茸试样30mg(精确至0.0001)置于旋转浓缩器20ml.浓缩瓶或浓缩管中,于冰水浴中冷却30min后加人巴经冷却的过中酸溶液(见本标准4.2.1)2mL,加液吋需将样品全部湿润,但是不要播动,盖好瓶益,连同冰水浴一道置于0冰中反应16h。然后在样品氧化被中加人氢溴酸(见本标4:2.2)0.3ml,充分摇匀后,放同冰水浴,静置30min,然后移到旋转蒸发器或浓缩器上,在60℃真空度为3.3×10Pa(25mmIg)条件下液缩至干。用酸解剂(见本标准4.2.3)15mL将残渣定量转移至水解管中,封管,置恒温箱中在110℃土1℃的条件下水解24h。取出水解管,冷却至室温,用去离子水将内容物定量地转移至50mL容最瓶中定容,充分混勾,过滤,取2mL滤液,置于旋转蒸发器或浓缩器中,在低于50℃的条件下,减压蒸发至干。残留物用2ml.么离子水溶解,重复上述操作3次,推确加人2m柠檬酸缓冲液(见木标准4.2.4)充分溶解,摇匀,过滤或离心,取上清液供仪器测定用。
7.2测定
非含硫氨氢基酸的测定用混合氢基酸标准工作液(见本标准4.1:8)调整仪器操作参数和洗脱用柠檬酸钠缓冲液(见木标准4.1.4)的pII,含硫氨基酸的测定用混合氨基酸标准工作液(见本标准4.2.8)调整仪器操作参数和洗脱用柠檬酸钠缓冲液(见本标准1.1.4)的PH,使各氨基酸分辨率285%,注人制备好的试样水解液和相应的氨垫酸混合标准工作溶液,逊行分析测定。每10个单样为一纽,组问拆人氨基酸标准工作液进行校准。
8结果计算
用质量分数表示的某种氨基酸含量X(%)按式(1)计算::
武中:
x(%/m×Vixx10-×100
m2X V2
X一试样中某种氨基酸的含量百分含量,%,上机试样中某种氮基酸的质量,ng试样的质量:mg:
Vi—试样的定容体积,mL;
试样的上机体积,nI
于—试样的稀释倍数。
以上两个平行试样测定结果的算术平值报告结果,保留两位小数。9相对偏差
在同一实验室,由同一操作者使用相同设备,按相间的测试方法,并在短时问内对同一被测物进行测试,所获得的测定结果中每种氨基酸两次平行测定结果的相对差值不大于10%。10方法最低检出浓度
本方法中各种氨蒸酸的最低检出浓度均为0.02%。3
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附录A
【资料性附录”
混合标准溶液中各种氨基酸和鹿茸中氨基酸分离色谱图93S HITACHI AMINO ACHD ANAL YZERHHr
21.1221.69
图 A. 1 10. 05天门冬氢羧(ASP)10. 8苏氮酸(THR)11.54丝氨酸(SFR)12.56容氨致(GLIJ)13. 64躺氨酸20. 98 胱氨酸(CYS)21. 69 缅氨酸(VAL)25. 12 蛋氨酸(MET)25. 24(PR)16.9C 氮酸(Y)8.70两氨(ALA)异亮刻(ILE)26.1亮酸LEV)28.18酪斌(1YR)3.62 组氨酸(HIS)11.57销氨较(ARG)图A.1
29.69本丙氢酸(PHE)33.64懒氨酸(L.YS)36.15氢17种氨基酸混合标准溶液分离色谱图9ESIIITACIIAMINOACIDANALYZER9.10
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图A.2中11).C6天I冬氮腹(ASP)10.66苏氨酸(THR)11.51丝氢酸(SER)12.52谷效酸(GL)13,38脯氨18.32丙氨酸(ALA)22.38懒氨酸(VAL)25.80异氢酸(F)26.克然酸(LEV)28.72(PR)1%.7甘氮(GTY)
酪氢酸(TYR)30.20苯丙氨酸(PIIE)33.97赖氨酸图4.3中3.90磺苯丙氯酸12.05登氨酸调3磺基丙氨酸、蛋氨酸砜标样分离色谱图图A.3
935 HIILALII AMINO ACID ANAL YZFR3.90
图 A. 1 中 3. S0 磺基丙氮酸1.3. 03蛋实嗽酮梅花聋中磺基丙氢酸、蛋氨酸砜分离色谱图图A.4
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