GB/T 24534.4-2009 谷物与豆类隐蔽性昆虫感染的测定 第4部分：快速方法 GB/T24534.4-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.060
中华人民共和国国家标准
GB/T24534.4—-2009
谷物与豆类隐蔽性昆虫感染的测定第4部分：快速方法
Cereals and pulses-Determination of hidden insect infestation-Part 4:Rapid methods
( IS0 6639-4.1987,MOD )
2009-10-30发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-12-01实施
GB/T24534《谷物与豆类隐蔽性昆虫感染的测定》包括以下四个部分：第1部分：总则；
一第2部分：取样，
第3部分：基准方法；
第4部分：快速方法。
本部分为GB/T 24534的第4部分。GB/T 24534.4—2009
本部分修改采用ISQ6639-4：1987谷物与豆类隐蔽性昆虫感染的测定第4部分：快速方法》。本部分与1SO6639-4：1987的主要技术差异如下：用GB/T12620代替ISO565；
用 GB5491代替ISO950。
为方便使用，本部分做了下列编辑性修改：删除了1SO6639-4：1987的前言；—-期除了ISO6639-4，1987的简介”部分；将GB/T24534.2添加到\规范性引用文件”中；一用GB/T5519代替ISO520；
用GB/T21305代替ISO712
本部分由国家粮食局提出。
本部分由全国粮油标准化技术委员会归口。本部分起草单位：国家粮食储备局成都粮食储藏科学研究所。本部分主要起草人：严晓平、周浩、许胜伟，兰盛斌、檀先吕、黎万武、丁建武、侯兴伟、郭道林。ANIKA
1范围
谷物与豆类隐蔽性昆虫感染的测定第4部分：快速方法
GB/T24534.4-2009
GB/T24534的本部分规定了用于估计谷物或豆类样品中隐蔽性昆虫感染程度、或是否存在感染的5种快速方法。
方法一;二氧化碳测定法
本方法适用于完整粒粮和经过粗磨或碾压后经过过筛去掉细粒及活动尾虫后的粮食的测定。本方法不适于测定：
a）磨细的粮食加工品，因为其颗粒可能吸收空气中水分：b）水分质量分数大于15%的粮食产品。因为粮食自身及微生物可能产生二氧化碳而影响结果。另外，这种方法不适合已经吸附了大量二氧化碳粮食产品的快速检测。如气调储藏的粮食或有严重害虫侵染的粮食。
本方法可以用于粗颗粒或粗磨粮食产品，检验时使用检验筛来区分完好颗粒和暴露的害虫本方法不允许测定死的成虫、蛹、幼虫及卵。方法二：节三酮法
本方法适用于测定任何干燥粮食内部的昆虫感染，尤淇是小麦，高粱、大米及其他类似大小的粮粒。大粒粮如玉米，测定前应部分打碎（压碎）。但大粒粮的这些处理可能导致一些昆虫数量碱少或被打成碎片而使结果描述不可靠。本方法可能低估卵及低龄幼虫，但在这方面，本方法并不比任何其他方法差。
方法兰：整粒粮漂浮法
本方法适用于大部分的谷物与豆类隐蔽性感染测定，但仅限于定性。方法四：声音测定法
本方法适用于定取食于粮粒内的活动昆虫成虫及幼虫，不适用于测定死的成虫、幼虫或活的卵及蛹(非取食虫态)。
方法五：X射线法
本方法适用于测定粮粒内活的、死的幼虫及成虫。刚杀死的昆虫（如熏引起的)可能难以与仍活著的昆虫区别。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T24534本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB5491粮食，油料检验扦样、分样法GB/T5519谷物与豆类于粒重的测定(GB/T5519--2008,ISO520：1977,MOD）GB/T12620长圆孔，长方孔和圆孔筛板GB/T21305谷物及谷物制品水分的测定带规法（GB/T213052007，JSO712.1998，IDT）GB/T24534.2谷物与豆类隐蔽性昆虫感染的测定第2部分取样（GB/T24534.2—2009，IS0 6639-2:1986,MOD)
GB/T 24534.4—2009
3原理
方法一二氧化碳测定法
在标准温度下培养样品测定小样，用气体定黛分析法或红外气体分析法測定样品在一定时期内昆虫代谢产生的二氧化碳量。
往，此方法的机理为：呼吸作用能被用来监测产品中的昆虫，并且散存谷物中的空气体积是基本不变的。干燥谷物或谷物产品的新陈代谢率很低，而昆虫的新陈代谢幸很高。所以，干燥谷物或谷物产品中的二氧化碳可以作为昆虫感染的信号。应防止其他来源的二氧化碳的污染并保证谷物对二氧化碳的吸附最小化。4设备
4.1筛子
合适的筛孔，筛孔规格应符合GB/T12620，细颗粒及尾虫能通过而留下被测定的粮粒。4.2天平
精确到0.1 g。
4.3气体定量分析装置（见图1)
窦验密封罐：
B—注射器;
进气管
一三通阀门；
-4mL球茎管（体积刻度由0至E管）-带刻度细茎管（奔积为 1.00 mL,最小分F
度值为 0. 01 mL);
-1.5mL球基管：
刻度标记：
J一水银柱(其作用是调节 F管) K称装氢氧化钾的U型管；
苏打-石灰管，防止空气中的二氧化碳进人K管。L
图1气体定量分析装置
HIKANiKAca
4.3.1密封取样罐：容积不超过750ml.,每个取样罐均能用橡胶塞密封。GB/T24534.4--2009
4.3.2注射器和取样针，用于抽取粮粒阅空气样品。注射器应是完全气密的并耳其容量应足够分析用，全玻璃注射器的容积以20mL为宜。4.3.3培养箱或气候调节室：能将温度保持在25℃士1℃(见4,4.1)。4.3.4气体分析装置：能测定的二氧化碳浓度的体积分数误差为士0.2%。4.4红外气体分析装置（见图2)
千空气提供装罩（钢瓶、压缩空气管线）防漏隔膜泵#
乐力调节阀：
空气洗涤器[装有10%（质基分数氢氧化销溶液的气泡洗气瓶]：空气干燥器（无水氟化钙CaCl）；三迈阀门(手动或电动）)；
气密接口：
-样品容器；
湿度指示器(变色硅胶)：
带流量调节针孔阀的流量计;
近红外分析器；
-电位式记录仪(可选);
N—空气出口。
图2带操作附件的红外气体分析装置示意图M
4.4.1人工气候室：测试设备应放置于可控制温、湿度的房问内，温度为25℃士1℃，相对湿度为70%±5%.
红外气体分析仪：具有两个可以互换的二氧化碳测量范周0～50μL/L及0～500μL/L，用压缩4.4.2
空气钢瓶，压缩空气管线或2000mL/min流速的防漏隔膜泵提供干燥空气作为载气。4.4.3气密样品容器：不超过750ml.，容器包括一个直径大约100mm、由气密材料制成的圆筒；底部密封、顶部有一可以活动的气密性盖子有2个嘴誉，在连接纯净空气管线后，气体从底部进人圆筒，从项部排出。
4.4.4压缩干燥空气供应装置(压缩空气管线，压缩空气钢瓶或隔膜泵)：带有一个减压阀,回路中应带有一个流量调节阀和一个流量计。4.4.5三通阀：手动惑电动控制。4.4，6空气清洗及干燥，安装在样品容器之前，洗气瓶包插一个烧瓶，可使气体冒泡通过质量分数为10%的氢氛化钠溶液，干燥器中装有于燥剂，如无水氯化钙。4.4.7水分指示器：置于样品容器与分析仪之间（变色硅胶）。3
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5扦样
扦样按GB/T24534.2执行。
6.1试样的准备
用筛子(4.1)去掉样品中所有细颗粒及昆虫，如需要鉴定昆虫种类，每种昆虫按成虫、蛹及幼虫分别记录。
为了使样品适于测定，将样品放置于25℃的培养箱（4.3.3)或人工气候室（4.4.1)内培养24h。样品放置在密封的紧纹布装，广口瓶，盘子或罐头瓶中，并适当封盖以允许空气交换，而不让昆虫进入或逃逸。
将样品放入气密样品容器（4.1.3)前，再过筛去除在制备期间出现的任何昆虫。在盘子或合适的平面上将样品摊成薄层，暴露在空气中15min～30min（敬去吸附的二氧化碳）。在红外分析法中，气不是很重要，但如没有这样做，检测报告中应予以说明。按照GB/T21305测定样品中的水分后，立刻填装气密样品容器。6.2容器及测定小样的准备
打开样品容器（4.3.1或4.4.3)，使水分、二氧化碳散发，然后称量，准确至0.1g。将约300样品倒人容器中，轻拍容器使样品下降，加人样品直到容器完全装满。称量装有测定小样的容器，准确至0.1g，算出测定小样重册。注：便用红外气体分析设备时，填充和压实容需不是必要的。盖紧样品容器，防止漏气。
如果用气体定量分析法测定二氧化碳，将制备好的样品放人培养箱或气候调节室（4.3.3）停留24h；如果采用红外法，将制备好的容器立即与红外气体分析装置相连。6.3气体定量分析法测定
将注射器（4.3.2)中的气体排出，将取样针插人样品罐的密封橡胶塞并推动注射器的活塞，推动数次，以使样品中的气体混合均匀。用注射器抽出大约10ml.的样品容器中的气体并拨出取样针。立即将适量的气体样品转移到气体分析装置（4.3.4)中（如果气体样品不能被.江即转移，将取样针插人一个橡胶塞中），测定气体样品中二氛化碳的浓度，以体积百分数表示。对同一样品进行两次分析操作。
6.4红外气体分析法测定
调节阀门(4.4.5），使装有测定小样的容器与回路断开，以1L/min的纯净空气清洗5min后，将气体分析仪调至零，并调到最灵敏范围(0～50μL/1.)。将样品容器嘴管与空气输人替及分析仪相连（如图2)。通过调节三通阀，使空气通过样品，这时分析仪调至最不灵敏范围（测量范围0～500μL/L），用纯净空气以1L/min的速度通过样品15min，然后将分析仪调到最灵敏范围（0～50μL/L），直接从分析仪显示屏或从记录仪上，以每分钟每升微升数，读出样品中二氧化碳的释放量。使用非线性刻度的分析仪，测得的值应使用校正曲线换算成每升微升数。6.5测定次数
相同的测定小样测定两次。
7结果表示
7.1气体定量分析法
7.1.1计算及公式
1kg粮食1min在粮粒间产生的一氧化碳浓度，以μL/I.表示。计算公式如式（1)：4
THKANiKAca-
式中：
+×1000
分别为两次测定所得的二氧化碳浓度，单位为微升每升(uL/L); 和
一测定小样的质量，单位为克（g）。如符合重复性条件(见7.1.2),取两次测定结果的算术平均值。7. 1.2重复性
相同分析者两次相邻的测定结果差异应不超过2 μL/min。7.2红外气体分析法
7.2. 1计算及公式
GB/T 24534.4—2009
1kg粮食1min在粮粒间产生的二氧化碳浓度，以μL/L表示。计算公式如式（2)：×1000
武中：
测定小样1min时间内粮粒间产生的二氧化碳浓度，单位为微升每升(μL/L)；测定小样的质量，单位为克（g）。如符合重复性条件（见7.2.2)，取两次测定结果的算术-平均值。7.2. 2重复性
相同分析老两次相邻的测定结果差异应不超过2μL/min。8结果描述
8.1气体定量法
对于小麦、豌豆、干豌豆、扁豆，精米，小黄玉米和类似的小颗粒脱壳粮食，适于采用气体定量分析法进行测定，其具体范围及方法见表1。注：对其他粮食而言，需要设定一个粮粒间空气体积的修正系数，观测到的二氧化碳浓度应乘以这个修正系数。某些修正系数如下：
亚麻子：0.89；
大白±米：1.18，
大麦：1.25：
那：1.39
表 1气体定量分析法获得的结果描述1kg粮CO.产生迹率/(μ1./min)）0.2
0. 6~0. 9
8.2红外法
结果描述见表2。
可能无感染，再复测定另一个样品以确定可能轻度感染，重复测定另一个样品以确定轻度至中度感染,粮食不适于存放2月以上而不处理中度至严重感染，粮食应立即熏蒸严重感染，粮食处于危险状态，极不适于储5
GB/T24534.4—2009
1 kg粮 CO, 产生速率/(μL/ min).1
1. 0~1. 9
2. 0~-3. 9
4. 0~5. 9
检验报告
表2红外法获得的结果描述
可能无感染，连续的低峰值可能表示很轻的感染，重复测定另一个样品以确定可能轻度感染,重复测定另一个样品以确定轻度至中度感染，粮食不适于存放2月以上而不处理中度至严重感染，粮食应立即熏蒸严重感染，粮食处于危险状态，极不适于储藏检验报告应表明使用的测定方法、测定的次数及获得的结果，表明使用的计算方法。应尽可能地记录发现昆虫的虫态。任何本部分设有规定的，或视为可选的操作细节，以及可能影响了结果的任何意外情况都应注明。
检验报告应包括确认样品所必需的所有信息。方法二三酮法
10原理
在浸有節三酮的白纸上碾压已去掉可见活虫的测定小样，当被感染粮粒被压碎时，虫体液中的氨基酸与纸中的苗三酮反应产生紫色斑点，但粮粒中的氨基酸却不释改，不起反应。注：高水分粮2d～3d后也可发生反应。计数纸上的紫色斑点，斑点数代表了样品中隐蔽性感染的程度。11设备
11. 1 筛子(见 4. 1)。
11.2碾压设备：如需要，部分打碎大粒粮。11.3粮食分样器（见GB5491）。11.4感染测定器：手动或电动，志要包括两个表面粗糙，相距0.75mm的钢辊，中间可以连续通过节三酮纸带（见图3）。
注：可使用AshmanSimon仪器\或具有相同性能的仪器。1）AshtnanSimon是仪器商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可．如果其他产品能有相同的效果，则可便用这些等效的产品。6
-YYKANTKACa
纸上的
紫色斑点
压后的粮颌
图3节三酮检测隐蔽性昆虫感染器粮食样品
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苗兰酮处理
后的纸带卷
处理后的
纸带山口
11.5节三酮纸带：使用57mm宽、50m长，且已浸泡过节三酮的白纸卷。或按下列方法准备：使未处理的纸通过10g/L的节三酮T业酒精溶液，将纸卷上，放在20℃～25℃、40%～60%相对湿度、无光处理3天，干燥的处理后的纸卷用锡泊包好避光存放，在20℃～25℃、40%～60%的相对湿度环境下，这样处理过的纸卷可保持2年～3年不变。11.6天平：精确度0.1g。
12托样
接照GB/T24534.2的规定执行。
13测定步骤
13.1试样及测定小样的准备
用筛了（4.1)去掉样品中所有杂质及活动昆虫，如需要，按种类和虫态对活动昆虫逃行鉴定和计数。称量过筛后的样品，使用粮食分样器（11.3）分样，得到需要的测定小样（见13.3和第15章）。每一小样应至少1000粒(见GB/T 5519)。大粒粮的测定小样应打碎,测试前重新过筛。7
GB/T 24534.4—2009
称量测定小样或计数小样中的粮粒数，推备好感染测定器（11.4），按操作说明将测定小样通过感染测定器。
13,2测定
从测定器上取下相应的纸带，取纸带时注意只能抓纸的末端，因为手指皮肤上的氢基酸也与距三酮呈紫色反应（可以带外科手套，或使用镊子以避免）。留一段时间加深紫色反应，在环境温度20℃或更高时，紫色反应1h（尽管紫色反应需24h才能达到最强）；在低温或需加速反应时，可将纸带放在50℃的烘中加热，或小心地经过酒精灯火焰或电灯泡进行烘烤（注意防燃）。紫色反应完成后，用铅笔标记每个点的范围，注意区分很近的点，要忽略纸上的非紫色斑点，仅计数标记的斑点数目。
13,3测定次数
相同的测试样品测定两次。
14结果表示
以千克或每100粒粮中隐蔽性昆虫头数表示，取两次测定值的算术平均值作为结果。15结果描述
如在第一对测定小样中没有检测到昆虫，在合理地得出没有昆虫感染前，应重复测定10份测定小样。即便如此，还应注意本方法可能检测不到卵及小幼虫，因此表面上无感染的粮食2周～4周后最好重新测定。
本方法的测定效果随昆虫的种类及测定粮粒的大小、种类而变化，值得考虑的是：是否能够或应该推荐合适于不同粮种及不同屈虫种类的校正系数，另外校正系数在商业实践中是否必需。-般讲，阳性结果表示储凝的粮食不安全。一个紫色斑点代表测定小样中有一头昆虫；如几次测定的结果相似，纸上不规则的、较少的紫色斑点表示轻度至中度感染；很多斑点表示严重感染，需立即进行处理。在采取任何措施前，应确定粮食是否已被有效地处理过以及处理的时间。因为在死虫体液变干前，死昆虫仍产生阳性反应，个体大的死昆虫要数周后才会变干。16检验报告
检验报告应表明使用的测定方法、测定的次数及获得的结果。任何本部分没有规定的，或视为可选的操作细节，以及可能影响了结果的任何意外情况都应注明。检验报告应包括确认样品所必需的所有信息。方法三整粒粮浮法
17原理
隐蔽性昆虫的感染会碱轻粮粒的质量，当完善粒与被害粮粒一起浸人测试溶液中时，完善粒下沉，而被害粮粒则上浮至溶液表面。但这种分离并不十分精确，因为含有低龄幼虫的粮粒也可能下沉，而种皮下带有气泡或有其他缺陷的没被感染的粮粒也可能会浮起来。解剖漂浮上来的粮粒，确定是否有昆虫存在，
18设备
18.1浮力比重计：相对密度测定范围1,100～1,300。18.2量筒：容量500mL。
18.3筛子（见4.1)。
-YYKAONTKACa
18.4天乎：精确度0.01g
18.5粮食分样器（见GB5491）。18.6烧杯:容量1000 mL。
18.7勺：用于取出飘浮的粮粒，19扦样
按照GB/T24534.2的规定执行。
20测定溶液
GB/T 24534.4—2009
用硅酸钠、硝酸铵或甘油溶于水可以得到合适的测定溶液。1 000 mL相应密度的测定溶液所需的溶质量可以参照图4计算，用量简(17.2)及适当的浮力比重计(17.1))校正溶液的相对密度，如需要，加人少量水或溶质，得到所需密度的测定溶液，精确至土0.005。注；由于粮食的密度随种类、品种及其他因子的不同而变化，所需的剩试率液的相对密度也需改变。按实际情说，需要的溶液相对密度应通过实验而定，下列测定溶液的相对密度值仅供参考：小麦1.15、玉米和高桑-1.19、大米1. 27、豌豆 1. 27。
(7/) / 3
硝酸铵
楚酸钠
21℃时的相时密度
图4制备不同相对密度测定溶液的参照曲线图21步骤
21.1试样及测定小样的准备
用筛子（4.1)去除样品中的杂质，过筛后称量，用分样器（17.5）分样成测定小样，每小样约500粒粮,计数测定小样的粒数。
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21.2测定
将测定小样放人含有测定溶液的烧杯(17.6)中，完全混合，放置10min，每隔1min搅动一次，以释放附着在粮粒上的气泡，最后一次完成后，用漏勺(17.7)取出所有漂浮的粮粒，分出并计数所有可见昆虫感染迹象的粮粒（种皮内有可见的孔或孔道），用适当的工其切开其余的粮粒，记录发现有昆虫幼虫，蛹及成虫的粮粒数。
21.3测定次数
相同的试样测定两次。
22结果表示
22.1计算：用被感染粮粒的百分数表示感染，取两次测定值的算术平均数作为结果。22.2重复性：每次测定值与平均数的差异应不超过图5所表示的极限，如超过这个极限，测定其他测试小样直到符合要求。
50(50)
40(60)
% / 降好是研大殊量
20(80）
10（90）
可接受结果
重友测试
被害粒测定百分数与平均百分数差值±5.0
图5粮粒漂浮法重复性极限（约500粒粮样品95%置信限重复性曲线）10bzxZ.net
YIKANTKAa
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