GB/T 25221-2010
基本信息
标准号： GB/T 25221-2010
中文名称：粮油检验 粮食中麦角甾醇的测定 正相高效液相色谱法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
GB/T 25221-2010 粮油检验 粮食中麦角甾醇的测定 正相高效液相色谱法
GB/T25221-2010
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标准内容
ICS 67. 040
中华人民共和国国家标准
GB/T25221—2010
粮油检验
粮食中麦角留醇的测定
正相高效液相色谱法
Inspection of grain and oils--Determination of ergosterol in grain-Normal phase high pcrfornance liquid chromatography2010-09-26 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2011-03-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家粮食局提出。
本标推山全国粮油标化技术委员会州口。GB/T 25221--2010
本标准负责起草单位：国家粮食储备局成都粮食储藏科学研究所、辽省粮油检验监测所。本标谁主要起草人：何学超、冯永建、姜涛、钟好、肖学彬、主德谦、熊升伟、乔丽娜。http：//foodmate.net/１范围
粮油检验粮食中麦角留醇的测定正相高效液相色谱法
GB/T 25221---2010
本标准规定了正相高效液相色谱法测定粮食中麦角留醇的术语和定义、原理、试剂与材料、仪器和设备、扦样、试样制备、操作步骤、结果计算与表示、重复性的要求。本标准适用于稍谷、小麦、玉米等粮食中麦角留醇的测定。本方法检山限为0.05mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标推达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/F6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3. 1
麦角醇 ergosterol
求源丁侵染粮食真菌(孢子或菌丝体)产生的游离麦角留醇和麦角留醇磷酸酯物质，是真菌细胞的正常代谢产物，也是真菌细胞膜组成的成分之一4原理
试样经皇化眉，用正让己烷萃取麦角筠醇，萃取綫经脱水，浓缩和硅胶样分离后，用高效液相负谱仪紫外检测器在282nm处检测，外标法定量。5 试剂与材料
除非另有规定，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中三级水要求，色谱用水符合GB/T 6682 中一级水规定的要求。5.1正己烷：色谱纯。
5.2异丙醇：色谱纯。
5.3正已烷：分析纯，用于提取。5.4氢氧化钾。
5.550%氛氧化钾溶液：称取 10g氢氧化钾(5.4),加10mL水溶解5.6甲醇。
5.7 2,6-二丁基对甲(BFIT)。
5. 8维牛素 C(抗坏血酸)。
5.9焦性没食子酸。
GB/T 25221-—2010
氯化钠，
艳和氯化钢溶羧：称腰316氯化钢（5，10），加881ml水配制。5.12无水硫酸钠。
流动相：正已烷(5.1)和异丙醇(5.2)[V(正己烷）+V(异内醇）一99十175.14
麦角萄醇标品：纯度9
麦角备醇标准储备液：准确称取 50 tng麦角留标准品（5.14),加0.1多抗氧化剂B11T(5.7）用异丙(5.2)溶解并定容至 50 mL,于 4 ℃冰箱保存,可保存 6 个月。5.16麦角备留醇标准工作液：根据需要吸取一定量的麦角备醇标准储备液（5.15）,用流动相（5.13)稀释定容，配制成适当浓度的标准工作液。5.17滤膜0.45μm。
6仪器和设备
实验室常用仪器设备，以及下列仪器设备：6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。6.2粉碎磨:机内配0.5 mtl筛片。6.3旋转蒸发器：配150 tnL梨形瓶。6. 4恒温水浴:可控温 80 ℃土1℃。6.5［
回流装置:配150切l.磨口三角瓶6.6氮吹仪。
7扦样
样品的打和分样按GH5491执行。8试样制备
试样用粉碎磨（6.2)粉碎，收集企部粉碎物混匀，装于广口瓶中备用。9操作步骤
9.1提取与净化
称取粉碎试样（第8章）约5g（精确至0.002g），置于回流装置的150mL磨口二角瓶（6.5)中，加入0.2g抗氧化剂BHT(5.7）).0.6g维生素（(5.8)、2g焦性没食子酸（5.9)和25mL甲醇（5.6），于80℃恒温水浴（6.4)回流5min。从冷凝间流管顶部加t5mT.50%氛氧化钾溶液（5.5），继续间流30tmin。回流结束后，从水浴中取下回流装置，圾下冷凝向流管，把已通有氮气流的玻璃管（6.6）迅速插入三角瓶通气约30s，快速塞.F瓶塞，于冰水中冷却。再加入55mL饱和氯化钠溶液（5.11）和30ml正已烷（5.3），塞瓶塞剧烈振操2min。转移到150mL.分液漏斗中，静置分层，下层转移至另个分液漏斗中，用30mL正已烷（5.3）重复提取-次，弃去下层，合并正已婉层。每次用约50tml.水洗涤正已烷层，古至洗涤水呈中性为止，将正已婉层经盛有约5多无水硫酸钠（5.12)的漏斗（漏斗中塞一小研脱脂棉），滤浓缩瓶，再用10mL正已烷（5.3)清洗分液漏斗和漏斗，并滤入梨形浓缩瓶（6.3）中，用旋转蒸发器（6.3)浓缔小体积后，在氮气流（6.6）下蒸发全干。残渣用10.0ml.正已烷（5.1)解，用0.45um滤膜（5.17)过滤，供色谱测定。9.2色谱参考条件
色谱柱：Incrsil硅胶柱，柱长250mm，内径4.6tmm，粒度5μm;或性能当的色谱柱。流动相流速：2.0ml./min
检测波长：282nm，
全品伙伴欧
9.3测定
GB/T 25221—2010
按高效液相色谱仪说明书调整仪器参数和灵敏度，使麦角留醇峰位与杂质组分峰位究全分离。取20μL试样溶液（9.1)和支角备醇标准工作液（5.16)（控制标液浓度与样液巾麦角留醇的浓度尽量按近)进样分析，根据峰高或峰面积用单点校正外标法定景。在上述色谱条件下，麦角留醇标谁品和试样的色谱图参见图A.1和图A.2。
10结果计算与表示
10.1结果计算
试样巾麦角留含量(X)以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算：X_×V×A
m ×As
式中：
麦角留醇标准溶液的浓度，单位为微克每升（μg/mL)：V
试样最终定容体积，单位为毫升（mL.）；As
麦角留醇标准溶液对应的峰高或峰面积：A
试样溶液对应的峰高或峰面积；m
样品质量，单位为克(g)。
10.2结果表示
将符合重复性要求的两个独文测定值的算术平均值作为测定结果（tmg/kg），保留三位有效数字。11无复性
在同一实验室，由同一操作者使用相同的设备，按相同的测试方法，在短时间内对样品进行两次独立测定。当测定结果大于3mg/kg时，两个独立测试值的绝对差值应不大于这两个测定值的算术平均值的10%；当测定结果小于或等于3mg/kg时，获得的两个独立测试结果的绝对差值应不大于这两个测定值算术平均值的 15%。
GB/T 25221——2010
A. 1 麦角留醇(标推品)色谱图见图 A. 1。g.
1. 4e-1 —
-2, 0e-2
附录A
（资料性附录）
麦角笛醇色谱图
注：标液浓度 1. 04.6 μ&/mL,出峰时间 11. 59 min;抗氧化剂 BIIT 出蜂时问 3. 19 min,图A.麦角凿醇标准品色谱图
A.2小麦、稻谷，表米中麦角留醇色谱图分别见图A.2.图A.3.图A.4，6
图A.2小麦麦角留醇色谱图
tenet:
6. 0e-1 -
2. 0e 1 -
8, (kc-1 wwW.bzxz.Net
3.20 ~4. 52
3. 20 4. 52
玉米麦角甾醇色谱图
稻谷麦角留醇色谱图
全品伙伴网bttr
GB/T 25221—2010
16.0018.00
GB/T 25221-—2010
参考文献
Schwadorf K,Muller H M.Determination of ergosterol in cereals,mixed fced components,anl mixed feeds by ligjuidl chramalography. J. Assoc.of Amal. Chem. ,1989,?2:457-462.Sia F,Lritla B, Giovane A, et at. Analysis of free and eslerrified ergusterul in tumatoproducts.J.Agric.FoodChem.,2000,48.780-784http：//foodmate.net/GB/↑ 25221-2010
扫印1期：2010年121511F047
中华人民共和国
国家标
粮油检验粮食中麦角笛醇的测定正相高效液相色谱法
GB/T252212010
中国标摊出版社出版发行
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址 spc. nel. tr
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
并本880×1230
印张(.75
字数12千学
2010年1门月第-次印制
201C 年 11月第一版
书号：155066：140679定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
举报电话：（010）68533533
http：
//wwufoodm
atenet
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粮油检验
粮食中麦角留醇的测定
正相高效液相色谱法
Inspection of grain and oils--Determination of ergosterol in grain-Normal phase high pcrfornance liquid chromatography2010-09-26 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2011-03-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家粮食局提出。
本标推山全国粮油标化技术委员会州口。GB/T 25221--2010
本标准负责起草单位：国家粮食储备局成都粮食储藏科学研究所、辽省粮油检验监测所。本标谁主要起草人：何学超、冯永建、姜涛、钟好、肖学彬、主德谦、熊升伟、乔丽娜。http：//foodmate.net/１范围
粮油检验粮食中麦角留醇的测定正相高效液相色谱法
GB/T 25221---2010
本标准规定了正相高效液相色谱法测定粮食中麦角留醇的术语和定义、原理、试剂与材料、仪器和设备、扦样、试样制备、操作步骤、结果计算与表示、重复性的要求。本标准适用于稍谷、小麦、玉米等粮食中麦角留醇的测定。本方法检山限为0.05mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标推达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/F6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3. 1
麦角醇 ergosterol
求源丁侵染粮食真菌(孢子或菌丝体)产生的游离麦角留醇和麦角留醇磷酸酯物质，是真菌细胞的正常代谢产物，也是真菌细胞膜组成的成分之一4原理
试样经皇化眉，用正让己烷萃取麦角筠醇，萃取綫经脱水，浓缩和硅胶样分离后，用高效液相负谱仪紫外检测器在282nm处检测，外标法定量。5 试剂与材料
除非另有规定，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中三级水要求，色谱用水符合GB/T 6682 中一级水规定的要求。5.1正己烷：色谱纯。
5.2异丙醇：色谱纯。
5.3正已烷：分析纯，用于提取。5.4氢氧化钾。
5.550%氛氧化钾溶液：称取 10g氢氧化钾(5.4),加10mL水溶解5.6甲醇。
5.7 2,6-二丁基对甲(BFIT)。
5. 8维牛素 C(抗坏血酸)。
5.9焦性没食子酸。
GB/T 25221-—2010
氯化钠，
艳和氯化钢溶羧：称腰316氯化钢（5，10），加881ml水配制。5.12无水硫酸钠。
流动相：正已烷(5.1)和异丙醇(5.2)[V(正己烷）+V(异内醇）一99十175.14
麦角萄醇标品：纯度9
麦角备醇标准储备液：准确称取 50 tng麦角留标准品（5.14),加0.1多抗氧化剂B11T(5.7）用异丙(5.2)溶解并定容至 50 mL,于 4 ℃冰箱保存,可保存 6 个月。5.16麦角备留醇标准工作液：根据需要吸取一定量的麦角备醇标准储备液（5.15）,用流动相（5.13)稀释定容，配制成适当浓度的标准工作液。5.17滤膜0.45μm。
6仪器和设备
实验室常用仪器设备，以及下列仪器设备：6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。6.2粉碎磨:机内配0.5 mtl筛片。6.3旋转蒸发器：配150 tnL梨形瓶。6. 4恒温水浴:可控温 80 ℃土1℃。6.5［
回流装置:配150切l.磨口三角瓶6.6氮吹仪。
7扦样
样品的打和分样按GH5491执行。8试样制备
试样用粉碎磨（6.2)粉碎，收集企部粉碎物混匀，装于广口瓶中备用。9操作步骤
9.1提取与净化
称取粉碎试样（第8章）约5g（精确至0.002g），置于回流装置的150mL磨口二角瓶（6.5)中，加入0.2g抗氧化剂BHT(5.7）).0.6g维生素（(5.8)、2g焦性没食子酸（5.9)和25mL甲醇（5.6），于80℃恒温水浴（6.4)回流5min。从冷凝间流管顶部加t5mT.50%氛氧化钾溶液（5.5），继续间流30tmin。回流结束后，从水浴中取下回流装置，圾下冷凝向流管，把已通有氮气流的玻璃管（6.6）迅速插入三角瓶通气约30s，快速塞.F瓶塞，于冰水中冷却。再加入55mL饱和氯化钠溶液（5.11）和30ml正已烷（5.3），塞瓶塞剧烈振操2min。转移到150mL.分液漏斗中，静置分层，下层转移至另个分液漏斗中，用30mL正已烷（5.3）重复提取-次，弃去下层，合并正已婉层。每次用约50tml.水洗涤正已烷层，古至洗涤水呈中性为止，将正已婉层经盛有约5多无水硫酸钠（5.12)的漏斗（漏斗中塞一小研脱脂棉），滤浓缩瓶，再用10mL正已烷（5.3)清洗分液漏斗和漏斗，并滤入梨形浓缩瓶（6.3）中，用旋转蒸发器（6.3)浓缔小体积后，在氮气流（6.6）下蒸发全干。残渣用10.0ml.正已烷（5.1)解，用0.45um滤膜（5.17)过滤，供色谱测定。9.2色谱参考条件
色谱柱：Incrsil硅胶柱，柱长250mm，内径4.6tmm，粒度5μm;或性能当的色谱柱。流动相流速：2.0ml./min
检测波长：282nm，
全品伙伴欧
9.3测定
GB/T 25221—2010
按高效液相色谱仪说明书调整仪器参数和灵敏度，使麦角留醇峰位与杂质组分峰位究全分离。取20μL试样溶液（9.1)和支角备醇标准工作液（5.16)（控制标液浓度与样液巾麦角留醇的浓度尽量按近)进样分析，根据峰高或峰面积用单点校正外标法定景。在上述色谱条件下，麦角留醇标谁品和试样的色谱图参见图A.1和图A.2。
10结果计算与表示
10.1结果计算
试样巾麦角留含量(X)以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算：X_×V×A
m ×As
式中：
麦角留醇标准溶液的浓度，单位为微克每升（μg/mL)：V
试样最终定容体积，单位为毫升（mL.）；As
麦角留醇标准溶液对应的峰高或峰面积：A
试样溶液对应的峰高或峰面积；m
样品质量，单位为克(g)。
10.2结果表示
将符合重复性要求的两个独文测定值的算术平均值作为测定结果（tmg/kg），保留三位有效数字。11无复性
在同一实验室，由同一操作者使用相同的设备，按相同的测试方法，在短时间内对样品进行两次独立测定。当测定结果大于3mg/kg时，两个独立测试值的绝对差值应不大于这两个测定值的算术平均值的10%；当测定结果小于或等于3mg/kg时，获得的两个独立测试结果的绝对差值应不大于这两个测定值算术平均值的 15%。
GB/T 25221——2010
A. 1 麦角留醇(标推品)色谱图见图 A. 1。g.
1. 4e-1 —
-2, 0e-2
附录A
（资料性附录）
麦角笛醇色谱图
注：标液浓度 1. 04.6 μ&/mL,出峰时间 11. 59 min;抗氧化剂 BIIT 出蜂时问 3. 19 min,图A.麦角凿醇标准品色谱图
A.2小麦、稻谷，表米中麦角留醇色谱图分别见图A.2.图A.3.图A.4，6
图A.2小麦麦角留醇色谱图
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6. 0e-1 -
2. 0e 1 -
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3.20 ~4. 52
3. 20 4. 52
玉米麦角甾醇色谱图
稻谷麦角留醇色谱图
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16.0018.00
GB/T 25221-—2010
参考文献
Schwadorf K,Muller H M.Determination of ergosterol in cereals,mixed fced components,anl mixed feeds by ligjuidl chramalography. J. Assoc.of Amal. Chem. ,1989,?2:457-462.Sia F,Lritla B, Giovane A, et at. Analysis of free and eslerrified ergusterul in tumatoproducts.J.Agric.FoodChem.,2000,48.780-784http：//foodmate.net/GB/↑ 25221-2010
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粮油检验粮食中麦角笛醇的测定正相高效液相色谱法
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字数12千学
2010年1门月第-次印制
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