SN/T 1146-2002 植物检疫 烟草环斑病毒检疫鉴定方法 SN/T1146-2002 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国出大地检验检疫行业标准S/T 146---1
代蓉附/M6：200%
烟草环斑病检疫鉴定方法
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2010-12-01
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SN/t1148--2010
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增册“症状格查”见)
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烟球方法
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SN/T1148-2010
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S/2122进山境植物及植物产品检资释规测3源遇
烟坏斑病静（tobecriugviru称V），异名为银經花坏死病毒（rnrmontecroni：i）蓝袋坏死环斑病（e：p），烟斑病（obaerinus1）。该病毒步等输多面体素松病持，两然m29mm感线实传多所体病声脂成员：可传染54科、00家神植物，具十主要的登济作物有以发、雪铃薯、H窖、烟草、阅瓜、黄瓜、司瓜市下、活问货，门合点展，本属，艺果与常甜题桃等，俊染的粘株症状因寄土面异，通带川片出现环状成状纹、被绿斑或断验、坏外斑：根腐学，车而部谢能的聚畸等。该病准签袋染线出和种平让行传盛主要分布中北美、大消洲欧潮非洲止风，有广泛，危界猎获明显价原性常容易制备尚滴息、专化性强解病毒价面湾第特点（器国隔累A），预效通清学效护体爽心激（DASA给合鉴别新主计物学鉴定方法或负收电锁测，个大检接计中购欢该满帝的依据。4用息、设蓄、设施
研韩做梯机.酶标仪、送速密心（转流头00：m）4物略养箍其有光照，温熙可谢范同为0）嗨燃（8礼9智体为1）单逆移液器（1010！C0u）B谱移液密（1或2求路钢成们流培养箱、分析电了大平pH计方露款Gm）神级隔离金度富
将微化钠Na）瞬我酸熟Na、化抑）y-20Fween-2cl路taxco0 n
5.解品提取缓冲液
将能确骏伪（503，带贴（MW24(00-40600PVP20营双销（N）httn
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C2遍20（n2落.“用浓龄调节H信至74信存于4℃
5、3包被缓冲液
将微酸钢0.59饿骏低、：.3熟钓Na0.2溶解于1000mL热馏水中,浓骏话节H值祥萃：
5.4洗缓冲液
×缓冲激浓骏擎储F
5酶称育物缓冲液
将1XPHS级液S00mL生7.:33+2H、PVP(MW24 000~40 000)20多叠须销N02用蒸馅水容至1Gm穿1
5.物缓冲液
将：醇胺ml叠氮缺（Na.：添：30蒸钢水牛用浓盐酸（HC)调节n值个 0. 8,头能存1 4 C,
5.7P底塑溶液
将4-硝基酚磷酸纳垫（筒称为：N：宿佛冲液00m中，现用现配制5.8终止反成液
特氧微化NaO)4g济解系请x中
5.9神于囊面消液
将0次酸纳10m！.落率：9.决净本十度滚度3的消事液。乐1生物试剂
可彩用商品化灿苹环斑病量检试价消片发升广产的牛物检测试剂，包招烟草环斑病游抗体（g）碱性磷殷酶你池的烟单环：的新流你（：rvmConjugate）.阅性对照和阴性对照。
5112%7.酸铀染液
2龄铀溶解丁m茶穿求用
注·本标准木作毕殊说明、所视们品剂！的为分性年，6翻场检癌
技货物批量总件数的·障积叫：专假产件数！件不够最低检青数量件数的金部检查
5.2柚释
按T2的要求样
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SR/T 1146:2011
奥前检疫时，应根据该病毒在礼同最检棉物成其产品上表现的特有游状迹行检登。发现可额症状的成靠市雅状的样品应立即采择成整殊植协送施。7魔度悠定
双抗饰浓心送（A)
7.1.1群品谢备
随机糖最100粒种平经3次氛漫激油销非0mm后用菌小洗涤次，将种于微了销有吸水的门瓷点中，分五组将格下分码中征活官真（象件下做穿，比至长出第封叶，随机新取恢画叶片每梯中沟：：「/模库/）旧微能格汁机（成街克线飘圳人群品微液训磨举山游分别微加1/ppend微本双样品概魔冲激（如洗用商品检测剂密购妆股或开心讲）制智站个伴品：7.1.1.2邂球（块）双类
海在少20个（头）瞬球成划的限（处1依驱状惠的还婴行摄体顺）在本物培养箱（2028）中截弥百深及出叶片。阳机抛18叶升（：：片辣），鳞球热前与接用解力湖取只：到织用微量擦汁桃（或得克品燃冲液讲潮榨出凝分别盛装于co管加人（//3理o管体供择品摄成接如用商品检测试剂盗按服试范盆要家进行）制备跋…个样品
7.11.3神菌器
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张检测需账设的（嗨版点弹。件指2个间性对照礼2个阴性对照孔个1个空自对升和影个诺检测机品礼，等测群棉设两次重复，12加人200抗V游路，解2成涨箱过夜），71..3空平后用×T洗膝液流漆签游影成3次以工解次3m4绿乳排人200待检样品解份2成冰箱对您）。7.2.5洗落号2.2.3的要求租同
避孔人200酶标积体溶微，件或冰过夜）。). 1.26Www.bzxZ.net
7.1.2.7洗涤与7.1.2.3的系求剂尚。7.1,8孔人200物率液活h
必然时剂加人」辫额终正成应者即测邮不需要）7.1.2. 3
7、1. 2. 10
用肉限观察判断障杯极颜仰这成件点靠博标仪分有0.、1h和2h检测0D值。htt
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7.1.3其他
装时商品化烟章不致病检法法产川快比实利盒签测情导说明进行操作7.2鉴别生生物学检测方法
对经门ASFSA检测出明能的荐出，第点心避片，训人量样品摄联缓冲液，拼磨启用擦接利法接种秘外于弃温（20%2关)将将南穿落离空的诺藜，黄瓜自助烟、长虹和莱短“Pm\等鉴别寄主植物上。
昆诺藜（cheneponmu核冲视外或部绿痴：黄瓜（（cuns：按在：：店按种目清部趣绿斑，后出跳系统环斑，10n植株批曲变形：
-白防灿（Ncariana tahectacvWhiteiuiricy)接种店 d~7 d.按种叶出现扇部褪绿斑戚坏死盘，约15d片发照为系经越绿成坏死游，后期或添度超过30时新长叶光避带亦：长豆Vgu aidse种：：,接弹件出褐的原死斑践环斑约10 d生长点环死，店全株枯外
\Pinta\莱可（Pharenu：uigan：cPinto：接轴t7l后，接种出现都环死环斑，10d~后系统环孩，长点坏死，
2.3鱼辣电镜
取经DAS-ELISA检测后栏品示F性发应的植深U片、月微量榨汁机制备样品提汁液·经肉心服至清渡。是本方法见N名1
结果判宽
8。1而清学检测结果判定
消阳性样品孔有额色度成附性对照效色反用陶坐对照乳D值小0.期果小丁C.05按0.05计算。1工复检测样品0LD馆许率（2)小下20%时则判定检测编果行效。计竞得测样品值和羽性对照D相之比V若P大下2双抗体来心法DAELSA恤清掌检测结果判定为闻性。器P接适2.需重复检测列额详品（如果越用商品检测试剂食：按照新愈的判定标执行）
释品值的平行允许率按武洪行计管.点中：
中行允许划
薰复样品：
-·-亚复样品2
200x005%
3.2整别主谱生物学检测黏判案
经131SA检测为阳性的品您动整别率提现的典划症状符合7。2的摘，生物学检测给试一步椭亲检测样品量有8.3免病电镜结果判定
经A检测和鉴弱商兰谱密测去乳设的样品·心负按表镜下可见粒体外复被一层电子会4
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核数体为等谢面体，
儿综金到宽
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同附符盒3.：与&2成811，8、3两项主划.网判定待检测样品带有RSV病毒，需进鉴定该病毒，川采用站计分高、生物学格测意济分了生物学检测为法比行全整定的都象核
种了器样品保存6个片：发现烟摩降房实典创择品保有1年，片他馨殖材料发奥草环烧病商的案病叶经液筑！爆后准·的“条件十保疗检测原调康、股序寄文销摄有艾规定作好登！标记和存档：以便必读品复核。
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A1熟型症状
学物学
爱T我侵案的植株症快医寄，，类，菜训生长点环死，产生顶粘和牙粘。大豆日间摘袜常晚然，健林意老黄化病株为等产主发管不良有祸色斑，病株矮化、西瓜粘林燃化，节间毓短，束预。叶片产生以死文、单！室家，产单先中！「溶叶产牛环状秘绿房，后变粘黄色环死痴，老产生环死黄斑。新十叶片除产在出、求外通产燕环学。结果少。果实变小，上有环斑蔬赖桩株矮化，叶心牛褪绿距和房影信少袭本冠辛离的引和淘韧皮部增厚并星的缅状。华果嫁按绍合处变形或分，小片稀致叫产生录绿出风驳，由错机植株矮化，新时（产生线系状绿斑：牌些港叫片产牛塔酸，相探噗，去些滑期焖种后～7接种叶出现尚部褪绿斑或坏死斑，约单个片后发虑为系药雄绿度可严环而息或制覆超过30“时新长叶无病带察。点是黑尺g接衰出现竭的环死斑或环班，的0～d计长点环死，及店个殊码死，品评蒙（（0：）要种目游环死斑，一般无案统反应，番gonaens接种计尚部编发思凉微综斑件小，袜。A2传播方式
TRSV的传播途径多样.可遵运介体种广燃这机械技种等方式传播，美洲剑线虫（Xmaamericanumensulat以持久性式专播，例究发原该疾赤释体行在于线血的们针周制内照和食中心满时间祖当民·传声能为市保数表，似悦皮后不能传森，病喜在齐体中不增殖，传寄较，包梧大是、甜瓜白红离比虹：、静阅洲平单光、传铃、百H菊和天然雾饰均经种子传声。汁被接种易传录。
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焖草环斑病毒粉瘦鉴定方淡
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北京复兴门外准剂北16号
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电话：685234668517:18
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